梁波，趙君，高明

（大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院，大連市 116622）

正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方兒茶止瀉膜的成膜材料Δ

梁波＊，趙君，高明#

（大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院，大連市 116622）

目的：優(yōu)選復(fù)方兒茶止瀉膜的成膜材料。方法：以膜劑的外觀質(zhì)量和體外透皮實(shí)驗(yàn)中兒茶素的累積釋放量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以聚乙烯醇（PVA）1750、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）、白及膠用量為考察因素，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳成膜材料。結(jié)果：最佳成膜材料為PVA17509mL、CMC-Na 2mL、白及膠4mL。結(jié)論：改進(jìn)后的復(fù)方兒茶止瀉膜較單用白及膠作為成膜材料的原制劑，外觀質(zhì)量更好，體外透皮吸收含量更高，能夠顯著改善原制劑的不足之處。

復(fù)方兒茶止瀉膜；成膜材料；外觀質(zhì)量；體外透皮實(shí)驗(yàn)

復(fù)方兒茶止瀉膜是近年來某“三甲”醫(yī)院研發(fā)的醫(yī)院制劑，由兒茶、五倍子、黃柏和木香4味中藥配伍組成，具有清熱燥濕、收斂止瀉的功效。臨床上用于濕熱型兒童腹瀉的治療，療效顯著。原制劑采用白及膠單一成膜材料，雖然柔韌性較好，但制成的膜劑抗拉強(qiáng)度差，且沒有進(jìn)行體外透皮吸收實(shí)驗(yàn)等系統(tǒng)研究。本試驗(yàn)意在運(yùn)用正交試驗(yàn)法對(duì)聚乙烯醇（PVA）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）和白及膠3種成膜材料的配比進(jìn)行篩選，以膜劑的外觀質(zhì)量和體外透皮實(shí)驗(yàn)中兒茶素的累積釋放量（即兒茶素含量）為指標(biāo)，優(yōu)選出復(fù)方兒茶止瀉膜的最佳成膜材料。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HITACHI L-2100高效液相色譜儀、HITACHI L-2400紫外檢測(cè)器、N-2000色譜工作站（日本日立高科技公司）；HH-S112電熱恒溫水浴鍋（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；AB135-S電子分析天平（瑞士Mettle Toledo公司）；MSE-1600體外透皮吸收儀（天津正通科技有限公司）；KQ-50B超聲波清洗器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；DHG-9076A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

兒茶、五倍子、黃柏、木香和白及藥材均購(gòu)自安徽亳州，經(jīng)大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院中醫(yī)中藥學(xué)系高松副教授鑒定均為真品；兒茶素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110878-200102）；PVA1750購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；CMC-Na購(gòu)自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；乙腈和甲醇為色譜純，磷酸為優(yōu)級(jí)純，吐溫-80和液體石蠟為化學(xué)純，其余試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

SD健康大鼠，♂，體重（200±20）g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（合格證號(hào)：2007-6A007）。

2 方法與結(jié)果

2.1 膜劑的制備

2.1.1 復(fù)方藥物提取液的制備 按處方量稱取藥材，即兒茶36.5g，黃柏7.5g，五倍子7.5g，木香7.5g。藥材粉碎后加入7倍量水，微波（功率：480W）提取15min，提取液濃縮成每1mL含相當(dāng)于生藥2.5g的提取液，備用。

2.1.2 白及膠的制備 稱取粉碎成豆粒大小的白及適量，加入8倍量蒸餾水，浸泡72h，經(jīng)常攪拌使充分膠溶；浸液用單層紗布濾過并擠出藥渣中余液；將藥渣搗爛加入濾液中重新浸泡24h，再用兩層紗布濾過，濾液保存，備用。

2.1.3 PVA溶液的制備[1]稱取PVA175010g，置于燒杯中，加入80%乙醇適量浸泡48h，烘干后加蒸餾水30mL，90℃水浴加熱使溶解成膠漿，用兩層紗布濾去不溶物，備用。

2.1.4 CMC-Na溶液的制備 稱取CMC-Na 10g，置于燒杯中，加蒸餾水30mL，90℃水浴加熱使溶解成膠漿，備用。

2.1.5 復(fù)方兒茶止瀉白及膠膜的制備 取上述制備好的白及膠6mL，置于燒杯中，加入復(fù)方藥物提取液1.5mL，再加入10%甘油與2%吐溫-80各適量，攪拌均勻，超聲振蕩至無氣泡后量取2mL，傾倒在玻璃板（2cm×7cm）上，涂勻，攤平，自然干燥，即得。

2.1.6 不同配比基質(zhì)的復(fù)方兒茶止瀉膜制備 以PVA 1750（A）、CMC-Na（B）和白及膠用量（C）為考察因素，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)[2]。按正交設(shè)計(jì)表安排，分別量取3種成膜材料倒入研缽內(nèi)，研勻后按10∶1（成膜材料和藥液的體積比）的比例加入復(fù)方藥物提取液，再加入10%甘油、2%吐溫-80各適量，研勻，超聲振蕩至無氣泡后，量取2mL，傾倒在玻璃板（2cm×7cm）上，涂勻，攤平，自然干燥，即得。因素水平見表1；正交設(shè)計(jì)見表2。

表1 因素水平Tab1 Factor and level

2.2 膜劑的外觀質(zhì)量檢查

對(duì)上述制得的復(fù)方兒茶止瀉白及膠膜和各種不同配比基質(zhì)的復(fù)方兒茶止瀉膜進(jìn)行外觀質(zhì)量（膜劑的柔韌性、均勻度和抗拉強(qiáng)度[3，4]）檢查，結(jié)果見表3。

2.3 兒茶素含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil GOLD ODS（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸（8∶92）；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取兒茶素對(duì)照品3.6mg，用甲醇溶解，超聲處理5min，定容至25mL容量瓶中，制得1mL中含有0.144mg兒茶素的對(duì)照品溶液。用0.45μm有機(jī)微孔濾器濾過，取續(xù)濾液，備用。

表2 正交設(shè)計(jì)Tab2 Orthogonal design

表3 復(fù)方兒茶止瀉膜的外觀質(zhì)量檢查結(jié)果Tab3 Results of appearance quality tests of Compound catechu anti-diarrhea film

2.3.3 供試品溶液的制備 在透皮3h后定時(shí)從接受管量取1mL接受液，定容于50mL容量瓶中，混勻。用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取兒茶素對(duì)照品溶液（0.144mg·mL-1）5、10、15、20μL，依次進(jìn)樣（n＝3），以進(jìn)樣量（X）對(duì)峰面積積分值（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝466326X（r＝0.9995）。結(jié)果表明，兒茶素進(jìn)樣量在0.72～2.88μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 兒茶素含量測(cè)定 取各供試品溶液，進(jìn)樣10μL（n＝3），按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算兒茶素含量。

2.4 體外透皮實(shí)驗(yàn)

2.4.1 離體皮膚的制備 頸椎脫臼法處死大鼠，除去臍部的毛，用鑷子鈍性分離臍部已去毛的皮膚，小心剔除皮下脂肪和結(jié)締組織后用0.9%生理鹽水洗凈。將洗凈后的皮膚置4℃冷藏保存，于第2天選擇無可見傷痕的皮膚供透皮吸收實(shí)驗(yàn)用。

2.4.2 樣品膜的制備 取上述制得的復(fù)方兒茶止瀉白及膠膜和各種不同配比基質(zhì)的復(fù)方兒茶止瀉膜，分別剪下0.785cm2的小圓片（等于體外透皮吸收儀中接受管上孔面積），精密稱重，備用。

2.4.3 體外透皮實(shí)驗(yàn) 將供試皮膚固定于樣品池與接受池之間，將制備的藥膜貼于皮膚上層，使皮膚角質(zhì)層面向樣品池，接受管內(nèi)注入5mL 0.9%生理鹽水，開動(dòng)恒溫水浴循環(huán)[（37±1）℃]和磁力加熱攪拌器（轉(zhuǎn)速：130r·min-1），達(dá)到設(shè)定溫度后開始計(jì)時(shí)，3h后定時(shí)從接受管內(nèi)量取接受液制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表4；方差分析結(jié)果見表5。

表4 復(fù)方兒茶止瀉膜體外透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab4 Results of transdermal tests of Compound catechu anti-diarrhea film

表5 兒茶素含量方差分析結(jié)果Tab5 Variance analysis of the content of catechin

以膜劑外觀質(zhì)量為指標(biāo)的結(jié)果顯示，第8組，即PVA 17509mL、CMC-Na 2mL、白及膠4mL為混合基質(zhì)制得的膜劑，其柔韌性、均勻度和抗拉強(qiáng)度均滿足要求，外觀質(zhì)量最好；以兒茶素含量為指標(biāo)的結(jié)果顯示，各因素作用的主次為A＞C＞B，以A3B2C1（即第8組）為最佳。從表5可知，B因素對(duì)兒茶素含量有顯著性影響（P＜0.05），A和C因素對(duì)兒茶素含量有極顯著性影響（P＜0.01），因而確定PVA17509mL、CMC-Na 2mL、白及膠4mL為最佳基質(zhì)配比。結(jié)合外觀質(zhì)量考察結(jié)果，該配比混合基質(zhì)制得的膜劑，其外觀質(zhì)量（柔韌性、均勻度、抗拉強(qiáng)度）也為最好。綜上所述，確定A3B2C1為膜劑的最佳基質(zhì)配比，即分別量取PVA17509mL、CMC-Na 2mL和白及膠4mL倒入研缽內(nèi)，研勻后加入復(fù)方藥物提取液1.5mL，再加入10%甘油、2%吐溫-80各適量，研勻，超聲振蕩至無氣泡，量取2mL，傾倒在玻璃板（2cm×7cm）上，涂勻，攤平，自然干燥，即可得到優(yōu)質(zhì)的膜劑。

3 討論

PVA、CMC-Na和白及膠均為良好的成膜材料[5～7]。目前對(duì)復(fù)方兒茶止瀉膜成膜材料的研究仍處于單一基質(zhì)的狀態(tài)。本試驗(yàn)中分別制備了3種單一成膜材料制成的膜劑，結(jié)果表明，以PVA為成膜材料制得的膜劑柔韌性差，PVA漿液與藥液的互溶性也很差；以CMC-Na為成膜材料藥物的溶解性好，制成的膜劑光滑均勻，但是柔韌性和抗拉強(qiáng)度都很差；以白及膠為成膜材料制得的膜劑具有較好的柔韌性，但是抗拉強(qiáng)度比較差。最重要的是，3種單一成膜材料制得的膜劑在體外透皮實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的3h后兒茶素含量都比較少，因而不適合使用單一成膜材料制備復(fù)方兒茶止瀉膜。鑒于此，筆者進(jìn)行了混合基質(zhì)的配比研究，優(yōu)選出最佳的基質(zhì)配比，制得的膜劑體外透皮吸收3h后兒茶素的含量顯著增加，且膜劑的柔韌性、均勻度、抗拉強(qiáng)度都好于3種單一成膜材料制成的膜劑，大大改善了原醫(yī)院制劑（使用白及膠為單一成膜材料）的不足。

本方君藥為兒茶，因而選擇兒茶的主要有效成分兒茶素作為檢測(cè)指標(biāo)，通過測(cè)定兒茶素在體外透皮實(shí)驗(yàn)中的3h含量來考察不同基質(zhì)配比的膜劑質(zhì)量。參考日常用藥的需要，筆者選擇測(cè)定透皮3h后兒茶素的含量為指標(biāo)，但由于其并不能全面反映膜劑的具體釋藥特性，對(duì)此還有待于進(jìn)一步考察研究。

[1] 李慧琴，張 忠，李 泓，等.聚乙烯醇膜的制備與性能表征[J].天津工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，6（3）：1.

[2] 趙 亮，魏 嵐，趙安利.呋塞米膜劑的制備與質(zhì)量控制[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26（6）：655.

[3] 姚 丹，謝成國(guó).正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選壬苯醇醚膜劑的制備工藝[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2007，20（6）：878.

[4] 賈海鷹，賈海波，愛 民，等.不同基質(zhì)制備嘎木朱爾涂膜劑的比較研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，23（1）：40.

[5] 張韻慧，李 寧，許建辰，等.聚乙烯醇在中藥新劑型中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，29（2）：101.

[6] 王 晉，劉巨厚，王占琴.正交試驗(yàn)優(yōu)化白及成膜材料的制備工藝[J].中國(guó)藥房，2005，16（12）：1134.

[7] 田 睿，李勤耕，徐啟貴.聚維酮碘膜劑的制備及質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥房，2006，17（6）：430.

Optimization of Film Materials of Compound Catechu Anti-diarrhea Film by Orthogonal Test

LIANG Bo，ZHAO Jun，GAO Ming
（Medical College，Dalian University，Dalian 116622，China）

OBJECTIVE：To optimize the film materials of Compound catechu anti-diarrhea film.METHODS：The proportions of film material were optimized by orthogonal experiments using appearance qualtiy and the cumulative drug release of catechin in transdermal tests in vitro as index and with amount of PVA 1750，CMC-Na，bletilla gum as factors.RESULTS：The optimal proportion of film material was as follows：PVA17509mL，CMC-Na 2mL and bletilla gum 4mL.CONCLUSION：The improved Compound catechu anti-diarrhea film has the better appearance quality and the higher permeated content of catechin than the original film prepared with bletilla gum alone so that it could make up for the deficiencies of the original one.

Compound catechu anti-diarrhea film；Film materials；Appearance quality；Transdermal tests

R283.62；R943

A

1001-0408（2011）19-1764-03

Δ大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2008E11SF171）

＊副教授，博士。研究方向：中藥化學(xué)成分的分離鑒定、中藥制劑及其分析。電話：0411-87402334。E-mail：beibeiliang0000@hotmail.com

#通訊作者：教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：中藥藥劑。電話：0411-87402361

2010-05-18

2010-10-11）