孫靜，王昌利，張佩燁

（1.陜西中醫(yī)學院，咸陽市 712046；2.湖南中醫(yī)藥大學，長沙市 410208）

黃芪藥材加工工藝的改進Δ

孫靜1，2＊，王昌利1，張佩燁1

（1.陜西中醫(yī)學院，咸陽市 712046；2.湖南中醫(yī)藥大學，長沙市 410208）

目的：研究不同加工飲片的方法對黃芪中黃芪甲苷含量的影響，改進藥材加工工藝。方法：對黃芪采用改進工藝——鮮切法和傳統(tǒng)干切法制備飲片，用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定2種飲片中黃芪甲苷含量并進行比較。結(jié)果：鮮切法所得飲片中黃芪甲苷含量為0.072%，高于傳統(tǒng)干切法所得飲片中黃芪甲苷含量（0.046%）。結(jié)論：鮮切法優(yōu)于傳統(tǒng)干切法；該含量測定方法簡便、準確，重復性好，適用于黃芪中黃芪甲苷含量的測定。

黃芪；黃芪甲苷；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法；加工工藝

黃芪為常用中藥，其性溫，味甘，歸肺、脾經(jīng)，具有補氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌之功效，常用于治療氣虛乏力、食少便溏等證。2005年版《中國藥典》收載了黃芪生品和蜜炙品2個品種，并將黃芪甲苷作為檢測黃芪質(zhì)量的指標成分[1]。但飲片傳統(tǒng)加工炮制方法周期長、資源浪費較大、有效成分損失較為嚴重，故筆者結(jié)合陜西省中藥材種植情況，對黃芪藥材進行飲片制備工藝的改進，具有較強的實踐意義。

本文采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法[2～12]測定鮮切法黃芪飲片、傳統(tǒng)干切法黃芪飲片中黃芪甲苷的含量，比較了2種加工方法對飲片中有效成分含量的影響，以期為黃芪藥材炮制工藝改進、黃芪飲片規(guī)范化生產(chǎn)、臨床療效增加提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

2996 型HPLC儀（美國Waters公司）；2420檢測器、Accurasil ODS C18色譜柱（北京金歐亞科技發(fā)展有限公司）。

鮮品黃芪，購于陜西省寶雞市，經(jīng)陜西中醫(yī)學院生藥教研室王繼濤高級實驗師鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bge.var.mongholicus（Bge.）的根；黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0781-9706）；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材飲片制備

2.1.1 鮮切法黃芪飲片 將新鮮黃芪除去表面泥沙后，置于陽光充足且通風良好的空間內(nèi)晾曬，測定含水量，控制含水量在70%左右，將藥材置于切藥機中切成厚為2～3mm的薄片，于60℃烘干，備用。

2.1.2 傳統(tǒng)干切法黃芪飲片 將新鮮黃芪曬至七成干（含水量為20%），除去表面泥沙，洗凈，潤透，置于切藥機中切成厚為2～3mm的薄片，于60℃烘干，備用。

2.2 含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品5.03mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL含0.503mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別取“2.1.1”和“2.1.2”項下飲片粉末約4g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，長12cm），以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 流動相的選擇[2，8]試驗過程中，比較了不同濃度的乙腈-水（90∶10、35∶65、36∶64）為流動相時的出峰情況。結(jié)果，當乙腈-水為90∶10時，在7min內(nèi)出峰；當乙腈-水為35∶65時，出峰時間均在25min以上；當乙腈-水為36∶64時，在10～15min內(nèi)出峰且峰形良好，故最終選取乙腈-水（36∶64）為流動相。

2.2.4 圖譜分析時間的確定 取供試品溶液，注入HPLC儀，記錄1h左右色譜圖，根據(jù)圖譜確定分析時間。結(jié)果，在30min后無明顯峰出現(xiàn)，因此選取分析時間為30min。

2.2.5 色譜條件 色譜柱：Thermo ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（36∶64）；流速1mL·min-1；柱溫：40℃；分析時間：30min；進樣量：5μL。

2.2.6 對照試驗 分別吸取對照品溶液5、10μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖。以進樣量（X）為橫坐標，吸收峰峰面積積分值（Y）為縱坐標，按外標兩點法計算，得對數(shù)方程為lgY＝0.8394X+6.607[9]。

2.2.7 樣品含量測定 分別吸取2種供試品溶液，每種3份，每份5μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖。按“2.2.6”項下方法計算黃芪甲苷含量（以每1g藥材中黃芪甲苷計）。不同黃芪炮制方法下黃芪甲苷含量見表1。

表1 不同黃芪炮制方法下黃芪甲苷含量Tab1 Content of astragalosideⅣin Astragli Radix by different processing methods

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取黃芪鮮切供試品溶液在室溫下放置，分別于2、4、6、8h按上述色譜條件測定，共測定5次。結(jié)果，每1g藥材中黃芪甲苷含量分別為0.0726%、0.0732%、0.0741%、0.0777%、0.0733%，RSD＝3.09%（n＝5），表明黃芪鮮切供試品溶液中黃芪甲苷至少在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 精密度試驗 取干切法黃芪飲片的供試品溶液10μL，按上述色譜條件進樣測定5次。結(jié)果，每1g藥材中黃芪甲苷含量分別為0.0756%、0.0753%、0.0741%、0.0766%、0.0801%，RSD＝2.99%（n＝5），表明本方法精密度較高。

2.2.10 重復性試驗 取同一批干切法黃芪飲片的供試品溶液適量，共6份，按上述色譜條件測定。結(jié)果，每1g藥材中黃芪甲苷含量分別為0.0721%、0.0733%、0.0788%、0.0753%、0.0746%、0.0787%，RSD＝3.27%（n＝6），表明本方法重復性較好。

2.2.11 加樣回收率試驗 精密稱取已測黃芪甲苷含量的黃芪樣品約1.5g，共6份，分別準確加入黃芪甲苷對照品溶液0.5mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表2。

3 討論

試驗表明，鮮切法和傳統(tǒng)干切法得到的飲片中黃芪甲苷含量均超過2005年版《中國藥典》標準，黃芪鮮切品中的黃芪甲苷含量為0.072%，高于黃芪傳統(tǒng)干切品的含量（0.046%）。本試驗選擇HPLC-ELSD法對不同加工炮制方法得到的黃芪飲片中有效成分黃芪甲苷含量進行測定，方法簡便、精確、穩(wěn)定、重復性好。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab2 Results of recovery test（n＝6）

結(jié)合陜西省黃芪藥材種植情況，可考慮采收新鮮黃芪藥材晾曬2d后趁藥材未干透心，直接進行切片。這樣既可減少傳統(tǒng)加工炮制工藝中新鮮藥材干燥后經(jīng)水浸潤再切片浸泡的環(huán)節(jié)，又可減少藥材晾曬時間，降低從藥材到飲片的加工成本及藥材耗損，為保證藥材臨床療效、實現(xiàn)產(chǎn)地加工一體化提供科學依據(jù)。

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[2] 馬 玲，王 坤，張?zhí)J燕，等.HPLC-ELSD法測定不同栽培年限黃芪中黃芪甲苷的含量[A].首屆中國中西部地區(qū)色譜學術(shù)交流會[C].2006：211.

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Improvement of Processing Technology of Astragali Radix

SUN Jing，WANG Chang-li，ZHANG Pei-ye
（Shannxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China）
SUN Jing
（Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410208，China）

OBJECTIVE：To study the effects of different processing technologies on the content of astragalosideⅣ in Astragali Radix，and to improve processing technology.METHODS：Astragali Radix decoction pieces were prepared using improvement technology fresh-cutting method and traditional processing.The content of astragalosideⅣin 2kinds of decoction pieces was determined by HPLC-ELSD then compared RESULTS：The content of astragalosideⅣ in piece by fresh-cutting method was 0.072%，which was higher than the other of 0.046%.CONCLUSION：Fresh-cutting method is better than traditional processing.The method is simple,accurate，reproducible for the content determination of astragalosideⅣ in Astragali Radix.

Astragali Radix；AstragalosideⅣ；HPLC-ELSD；Processing technology

R282.710.2；R283.1

A

1001-0408（2011）19-1759-02

Δ國家科技支撐計劃子課題（2006BAI06A07-01）；陜西省重大科技創(chuàng)新項目（2008ZKC05-19）

＊講師，博士研究生。研究方向：中藥制劑。電話：029-38185175。E-mail：ph.175@163.com

2010-09-06

2010-10-29）