厲偉蘭，陳國明，邵 華

（東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院臨床藥學(xué)室，南京市 210009）

二甲雙胍與消渴熱清丸合用對模型大鼠胰島素抵抗的影響

厲偉蘭＊，陳國明，邵 華

（東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院臨床藥學(xué)室，南京市 210009）

目的：研究二甲雙胍與消渴熱清丸合用對模型大鼠胰島素抵抗的影響。方法：選取體重180～200g的雄性Wistar大鼠60只，隨機均分為正常對照、模型、二甲雙胍、消渴熱清丸和二甲雙胍+消渴熱清丸組。各組大鼠給藥第6周后，取血分別檢測空腹血糖（FBG）、血清胰島素（FIns）、血清游離脂肪酸（FFA）、血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平與胰島素敏感性指數(shù)（ISI）。結(jié)果：經(jīng)10%果糖水喂養(yǎng)5周后，模型組大鼠FBG、FIns、FFA、TNF-α均較正常對照組顯著增高（P＜0.01），ISI較正常對照組顯著降低（P＜0.01），大鼠有明顯的胰島素抵抗；各給藥組大鼠上述各項指標(biāo)與模型組比較顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），胰島素敏感指數(shù)顯著升高（P＜0.01）；且二甲雙胍+消渴熱清丸組比單獨給予二甲雙胍的大鼠效果更好。結(jié)論：二甲雙胍與中藥復(fù)方消渴熱清丸合用有明顯的協(xié)同作用，并且能在劑量上降低西藥二甲雙胍的用量，從而減輕二甲雙胍的毒副作用。

二甲雙胍；消渴熱清丸；中西藥合用；胰島素抵抗；協(xié)同作用

胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)病的重要機制之一，也是臨床常見的一種代謝異常綜合征，貫穿于2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過程的始終。近年來眾多研究提示，中藥及天然藥物在治療2型糖尿病方面具有療效顯著、副作用小的特點，并在改善胰島素抵抗方面有獨特的優(yōu)勢[1～3]。但中醫(yī)中藥在治療2型糖尿病時，降糖效果不如西藥快速顯著，因此在臨床應(yīng)用時多與西藥合用。本研究中的消渴熱清丸為名中醫(yī)經(jīng)驗方，作為醫(yī)院制劑應(yīng)用于臨床已有多年的歷史。筆者通過研究中藥復(fù)方消渴熱清丸和西藥二甲雙胍分別單用及二者合用后對胰島素抵抗大鼠模型的作用，為臨床中西醫(yī)結(jié)合治療2型糖尿病提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SN-695智能型放免測量儀（上海日環(huán)儀器廠）；7060型全自動生化分析儀（日本日立公司）；MK-3型全自動酶標(biāo)儀（芬蘭雷柏公司）。

1.2 試藥

生化測定試劑盒、葡萄糖（Glu）測定試劑盒（上海榮盛生物技術(shù)有限公司）；游離脂肪酸（FFA）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測試盒（上海森雄科技實業(yè)有限公司）；鹽酸二甲雙胍片（昆山培力藥品有限公司，批號：090330）；消渴熱清丸（由東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院制備，用時加適量蒸餾水配成適宜濃度的混懸液）。

1.3 動物

Wistar大鼠60只，♂，體重180～200g，購于南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場（動物生產(chǎn)合格證號：SCXK（蘇）2009-0018）。

2 方法

2.1 復(fù)制模型

參照Vasdev S等人方法[4～6]，在給予普通飼料喂養(yǎng)的同時，飼以10%果糖水，喂養(yǎng)5周。

2.2 分組及處理

實驗分為5組，即正常對照、模型、二甲雙胍（0.1g·kg-1）、消渴熱清丸（10.0g·kg-1）和二甲雙胍（0.05g·kg-1）+消渴熱清丸（10.0g·kg-1）組，每組12只。ig給藥，每天1次，連續(xù)42d，給藥期間繼續(xù)喂養(yǎng)10%果糖水。

2.3 檢測項目及方法

給藥42d后，分別取血，分離血清，用全自動生化分析儀檢測空腹血糖（FBG），放射免疫法檢測血清胰島素（FIns）水平，分光光度法檢測血清FFA水平，酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清TNF-α水平。并以FBG水平和FIns水平乘積之倒數(shù)的自然對數(shù)作為胰島素敏感指數(shù)（ISI）。比較各組間在以上幾項指標(biāo)的差異，判定不同藥物對大鼠胰島素抵抗的防治作用。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較采用t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)制模型后大鼠FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α水平的變化

經(jīng)10%果糖水喂養(yǎng)5周后，模型組大鼠FBG、FIns、FFA、TNF-α水平均較正常對照組顯著增高（P＜0.01），ISI較正常對照組顯著降低（P＜0.01），表明經(jīng)復(fù)制模型后，大鼠有明顯的胰島素抵抗。復(fù)制模型后大鼠FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的變化見表1。

3.2 給藥后各組大鼠FBG、FIns水平與ISI的變化

各給藥組大鼠的FBG、FIns水平和ISI與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）；而同時給予二甲雙胍與消渴熱清丸的給藥組大鼠，其FIns水平和ISI與單獨給予二甲雙胍的大鼠比較均有顯著性差異。大鼠FBG、FIns水平與ISI的變化見表2。

3.3 各組大鼠血清FFA、TNF-α水平的變化

各給藥組大鼠連續(xù)給藥42d后血清中FFA和TNF-α水平與模型組比較顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），而同時給予二甲雙胍和消渴熱清丸的給藥組大鼠FFA和TNF-α水平與單獨給予二甲雙胍的大鼠比較，均有顯著性差異。大鼠血清FFA、TNF-α的變化見表3。

表 1復(fù)制模型后大鼠 FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的變化（±s，n＝12）Tab1 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index，free fat acid and tumor necrosis factor-α in rats after dupicatting mode（l±s，n＝12）

表 1復(fù)制模型后大鼠 FBG、FIns、ISI、FFA、TNF-α的變化（±s，n＝12）Tab1 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index，free fat acid and tumor necrosis factor-α in rats after dupicatting mode（l±s，n＝12）

與正常對照組比較：＊P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01

組別正常對照組模型組FBG/mmol·L-1 4.25±1.2310.67±1.21＊FIns/ng·mL-1 38.91±8.6553.90±7.43＊ISI-5.0±0.39-6.34±0.16＊FFA/μmol·L-1 839.±45.41421.8±88.7＊TNF-α/pg·mL-1 18.86±5.2632.07±5.70＊

表2 給藥后大鼠FBG、FIns水平與ISI的變化（±s，n＝12）Tab2 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index in rats after treatmen（t±s，n＝12）

表2 給藥后大鼠FBG、FIns水平與ISI的變化（±s，n＝12）Tab2 Changes of fasting blood glucose，serum insulin，insulin sensitivity index in rats after treatmen（t±s，n＝12）

與模型組比較：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

組別模型組二甲雙胍組二甲雙胍+消渴熱清丸組消渴熱清丸組劑量/g·kg-1-0.10.05+10.010.0FBG/mmol·L-1 10.67±1.214.47±0.53＊4.18±0.92＊7.70±1.65＊FIns/ng·mL-1 53.90±7.4344.89±4.74＊38.65±6.25＊43.76±5.42＊ISI-6.34±0.16-5.29±0.17＊-5.05±0.28＊-5.79±0.31＊

表3 大鼠血清FFA、TNF-α的變化（±s，n＝12）Tab3 Changes of free fat acid and tumor necrosis factor-α in rat（s±s，n＝12）

表3 大鼠血清FFA、TNF-α的變化（±s，n＝12）Tab3 Changes of free fat acid and tumor necrosis factor-α in rat（s±s，n＝12）

與模型組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型組二甲雙胍組二甲雙胍+消渴熱清丸組消渴熱清丸組劑量/g·kg-1-0.10.05+10.010.0FFA/μmol·L-1 1421.8±88.7971.6±47.1＊＊900.7±69.7＊＊995.1±107.8＊＊TNF-α/pg·mL-1 32.07±5.7026.26±2.99＊20.22±4.66＊24.98±7.91＊

4 討論

在2型糖尿病發(fā)病過程中，胰島素抵抗與其有著密切的關(guān)系，74%的2型糖尿病患者可發(fā)生胰島素抵抗。胰島素抵抗的病因目前尚不清楚，近年來的研究表明，F(xiàn)FA與TNF-α對胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展起著重要作用[7～9]。FFA可通過影響葡萄糖轉(zhuǎn)運和葡萄糖磷酸化而抑制胰島素作用下的葡萄糖攝取、糖原合成及葡萄糖氧化，增加肝糖輸出而導(dǎo)致機體產(chǎn)生胰島素抵抗。TNF-α則可干擾周圍組織的胰島素作用而導(dǎo)致胰島素抵抗，其機制可能是：（1）TNF-α致胰島素受體底物中絲氨酸磷酸化而抑制了受體酪氨酸激酶的活性；（2）TNF-α致血FFA增高，干擾了周圍組織對葡萄糖的攝取；（3）TNF-α抑制脂肪細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運體4（GLUT4）的表達，從而抑制脂肪細胞攝取葡萄糖。

消渴熱清丸為東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院名醫(yī)之經(jīng)驗方，方由生地、黃連、葛根、花粉、知母、黃芩、丹參等十余味藥組成。方中以生地滋陰清熱涼血為君藥；黃連清熱散郁火、燥濕防滋膩太過，為治療消渴之要藥，葛根生津止渴、去煩熱、散郁火，二者共為臣藥；佐以黃芩增黃連清熱之功，花粉增葛根生津止渴之能。諸藥合用，攻補兼用，潤燥結(jié)合，共奏滋陰清熱、生津止渴之效。

本研究通過觀察該方與二甲雙胍單用及合用對實驗性糖尿病大鼠FBG、FIns、ISI、TNF-α和血清FFA的影響，結(jié)果顯示，該方具有一定的改善機體胰島素抵抗的作用，其作用機制部分可能是通過抑制機體FFA和TNF-α水平而發(fā)揮作用。至于其對胰島素受體后信號傳導(dǎo)通路具體環(huán)節(jié)的影響，還有待于進一步深入研究。本方與0.05g·kg-1劑量的二甲雙胍合用時，對大鼠胰島素抵抗的改善作用與單獨給予0.1g·kg-1劑量的二甲雙胍比較，作用優(yōu)于單用二甲雙胍組。結(jié)果表明，中藥復(fù)方消渴熱清丸與二甲雙胍合用有較明顯的協(xié)同作用，并且能在劑量上降低西藥二甲雙胍的用量，從而減輕二甲雙胍的毒副作用，同時為中醫(yī)經(jīng)驗方應(yīng)用于臨床治療2型糖尿病提供了一些理論依據(jù)。

[1] 金 川.中藥辨證治療2型糖尿病對胰島素抵抗指數(shù)的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19（10）：1222.

[2] 呂 剛，李 坦，申 野，等.中藥治療Ⅱ型糖尿病研究進展[J].吉林化工學(xué)院學(xué)報，2008，25（2）：31.

[3] 楊宏莉，王 燕，王 宇，等.本草消渴丹對2型糖尿病大鼠血糖和血清胰島素含量的影響[J].中國藥房，2010，21（27）：2506.

[4] Vasdev S，F(xiàn)ord CA，Longrich L.Role of aldehydes in fructose induced hypertension[J].Mol Cell Biochem，1998，181（1）：1.

[5] 程海波，司曉晨，尚文斌，等.高果糖餐誘導(dǎo)實驗性胰島素抵抗綜合征大鼠模型[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2006，22（1）：31.

[6] 楊 曄，王志國，王 浩，等.金芪降糖片對胰島素抵抗和高血壓的影響[J].天津醫(yī)藥，2005，33（5）：298.

[7] 潘佳秋，劉麗娟，田建武，等.新診斷2型糖尿病血漿內(nèi)脂素及FFA的水平變化及與ISI的關(guān)系[J].實用糖尿病雜志，2010，6（1）：52.

[8] Miura A，Ishizuka T，Kanoh Y，et al.Effect of tumor necrosis factor-alpha on insulin signal transduction in rat adipocytes：relation to PKC beta zeta translocation[J].Biochem Biophys Acta，1999，449：227.

[9] Amer P.Insulin resistance in type 2diabetes：role of fatty acids[J].Diabetes Metab Res Rev，2002，18（2）：55.

Effect of Metformin Combined with Xiaoke Reqing Pills on Insulin Resistance in Model Rats

LI Wei-lan，CHEN Guo-ming，SHAO Hua
（Dept.of Clinical Pharmacology，The Affiliated Zhongda Hospital of Southeast University，Nanjing 210009，China）

OBJECTIVE：To study the effect of metformin combined with Xiaoke reqing pills on insulin resistance of model rats.METHODS：60male Wistar rats with body weight of 180～200g were randomly divided into five groups：normal control group，model group，metformin group，Xiaoke reqing pills group and Metformin combined with Xiaoke reqing pills group.6weeks after treatment，the levels of fasting blood glucose（FBG），fasting insulin（FIns），free fat acid（FFA），tumor necrosis factor-α（TNF-α）and insulin sensitivity index（ISI）were determined.RESULTS：After 5weeks of fructose feeding，the levels of FBG，F(xiàn)Ins，F(xiàn)FA and TNF-α of model group were significantly higher than those of normal control group（P＜0.01）.The ISI of model group was significantly lower than that of normal control group（P＜0.01）.Above results proved that the insulin resistance model was successfully made.Indexes of every treatment group decreased significantly，compared with model group（P＜0.01orP＜0.05）.ISI of treatment group was significantly higher than that of model group（P＜0.01）.Metformin combined with Xiaoke reqing pills was better than metformin alone.CONCLUSION：Metformin combined with Xiaoke reqing pills show synergistic effect.The dosage of metformin has been reduced then the toxic and side effects of metformin could be lowered.

Metformin；Xiaoke reqing pills；Western medicine combined with traditional Chinese medicine；Insulin resistance；Synergistic effect

R285；R587

A

1001-0408（2011）19-1749-03

＊主管藥師，碩士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：025-83272127。E-mail：cixilwl@sina.com

2010-08-12

2011-02-26）