孫國華，韓 青，孫芹敏

(大連醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116011)

全自動生化分析儀檢測系統(tǒng)經(jīng)過幾十年的發(fā)展越來越趨向于大型化、規(guī)模化，由于自身具有功能強、檢測項目多、速度快、靈活度高、成本低等優(yōu)點，適合大批量的標本檢測；但是同一實驗室不同的全自動生化分析儀檢測出的同一項目的結(jié)果存在一定的差異。不同全自動生化分析儀之間，由于檢測系統(tǒng)配置的不一致，常導(dǎo)致檢測結(jié)果的不一致。這種在不同實驗室之間，或在同一實驗室不同儀器之間所存在的差別，常被人們所忽略，從而使檢驗的結(jié)果具有不確定性，常會給臨床帶來混亂。因此，為了驗證同一項目在不同全自動生化分析儀上測定結(jié)果是否一致，本文按照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)的EP9-A文件要求[1]，對實驗室兩臺全自動生化分析儀上的血清肌酐(CREA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測定結(jié)果進行比對分析和偏倚評估。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 儀器：日本日立7600-110型及7170s型全自動生化分析儀。

1.1.2 試劑：CREA試劑由上海申索佑福醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司提供，ALT由日本世諾臨床診斷制品株式會社提供。

1.1.3 校準品：Roche公司生產(chǎn)的c.f.a.s校準品。

1.1.4 質(zhì)控品：由RANDOX公司提供，批號為608UN和403UE。

1.1.5 樣本：采集樣本為當日臨床患者血清，其濃度選擇嚴格按照EP9-A文件中的方法比對實驗數(shù)據(jù)的分布建議要求(質(zhì)量濃度)，采集標本時濃度盡可能在檢測范圍內(nèi)。

1.2 方 法

1.2.1 方法的選擇：因日立7600-110全自動生化分析儀參加室間質(zhì)評成績合格，室內(nèi)質(zhì)控CV值均小于CLIA’88規(guī)定的室間質(zhì)量評價標準允許誤差范圍的1/2，因此以日立7600-110全自動生化分析儀為參比方法(X)，以日立7170s全自動生化分析儀為實驗方法(Y)；試劑的線性范圍是CREA 0～3500 μmol/L,ALT 可達1000 U/L。

1.2.2 儀器校準：常規(guī)開機，使用上述兩種儀器的校準品進行校準。

1.2.3 質(zhì)控：使用RANOX正常水平和病理水平的質(zhì)控血清在兩臺日立全自動生化分析儀上做日常質(zhì)控。

1.2.4 樣品的測定：對選好的標本進行排序，在7600-110全自動生化分析儀(X)和日立7170s全自動生化分析儀(Y)上，分別對標本進行CREA和ALT的測定，每天測定8份樣本(測定順序為1、2、3、4、5、6、7、8，8、7、6、5、4、3、2、1，做雙份平行測定)，連續(xù)測定5 d，共得到40組數(shù)據(jù)。對于每天特定樣本參比方法(X)和實驗方法(Y)測定的時間差要在2 h內(nèi)完成，每個項目的檢測嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)方法

不同檢測系統(tǒng)新鮮血清測定結(jié)果的統(tǒng)計采用隨機區(qū)組設(shè)計資料的方差分析、相關(guān)分析和回歸分析。所有數(shù)據(jù)均在Excel 2000和SPSS13.0統(tǒng)計軟件上進行統(tǒng)計分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CERA的結(jié)果

CREA在7600-110(X)和7170s(Y)全自動生化分析儀上進行雙份平行測定數(shù)據(jù)繪制散點圖和偏倚圖。平行測定CREA雙份值均值的散點圖見圖1，偏倚圖見圖2。雙份平行測定CREA全部數(shù)據(jù)的散點圖見圖3，偏倚圖見圖4。

圖1 CREA雙份值均值的散點圖

以參比方法(X)的測定值為x，以實驗方法(Y)的測定值為y，CREA均值和雙份值的相關(guān)系數(shù)(r)，決定系數(shù)為(r2)和直線回歸方程(y=kx+b)如表1所示。CREA在3個醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)、預(yù)期偏倚的估計值、預(yù)期偏倚95%可信區(qū)間的上限及下限、1/ 2 CLIA’88允許誤差(%)、允許誤差范圍的上限及下限見表2。

圖2 CREA雙份值均值的偏倚圖

圖3 CREA雙份值全部數(shù)據(jù)散點圖

圖4 CREA雙份值全部數(shù)據(jù)偏倚圖

2.2 ALT的結(jié)果

ALT在7600-110(X)和7170s(Y)全自動生化分析儀上進行雙份平行測定的數(shù)據(jù)繪制成散點圖和偏倚圖。平行測定ALT雙份值均值的散點圖見圖5，偏倚圖見圖6。雙份平行測定ALT全部數(shù)據(jù)的散點圖見圖7，偏倚圖見圖8。

以參比方法的測定值為x，以實驗方法測定值為y，ALT均值和雙份值的相關(guān)系數(shù)(r)，決定系數(shù)為(r2)和直線回歸方程(y=kx+b)如表3。ALT在3個醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)、預(yù)期偏倚的估計值、預(yù)期偏倚95%可信區(qū)間的上限及下限、1/ 2 CLIA’88允許誤差(%)、允許誤差范圍的上限及下限如表4。

表1 CREA均值和雙份值的相關(guān)系數(shù)及回歸方程

表2 CREA在3個醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)處的各項指標

圖5 ALT雙份值均值的散點圖

圖6 ALT雙份值均值的偏倚圖

圖7 ALT雙份值全部數(shù)據(jù)散點圖

圖8 ALT雙份值全部數(shù)據(jù)偏倚圖

表3 ALT均值和雙份值的相關(guān)系數(shù)及回歸方程

表4 ALT在3個醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)處的各項指標

3 討 論

本實驗中的散點圖，在標度上的差別可以用來決定非線性關(guān)系，在全部測定范圍內(nèi)，檢查參比方法(X)和實驗方法(Y)的數(shù)據(jù)圖是否有線性關(guān)系，測定CREA、ALT的結(jié)果在兩方法間呈良好的直線相關(guān)，可以進行下一步檢驗。本實驗中的偏倚圖，在標度上的差別可以用來決定非線性關(guān)系，在全部測定范圍內(nèi)，兩方法間CREA、ALT的均值和雙份值之差在實驗方法間在線性范圍內(nèi)，并且分布在X=0的中線附近。

參比方法(X)的測定范圍可以用相關(guān)系數(shù)r做估計，如果r≥0.975(或r2≥0.95)則可以認為參比方法(X)分布范圍合適，如表1和表3，兩方法間CREA、ALT的均值和雙份值的相關(guān)系數(shù)r都滿足條件，說明數(shù)據(jù)的分布范圍合適，可以用統(tǒng)計學(xué)的方法分析各實驗方法(Y)與參比方法(X)之間的系統(tǒng)誤差，兩檢測系統(tǒng)是從統(tǒng)計學(xué)和臨床標準判斷分析本實驗的，避免了比對實驗的差異有顯著性意義，得不出可比性的結(jié)論。CREA、ALT在3個醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的估計值、可信限、允許誤差等見表2和表4，從表中給定的3個醫(yī)學(xué)決定水平Xc范圍可以看出，估計值在可信限和允許誤差范圍內(nèi)均符合要求。

EP9-A文件是美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS) 在1995年出臺的標準化系列文件之一。文件中提供了實驗比對的方法，并且適用于同一標本采取不同方法(儀器或試劑) 檢測的結(jié)果進行比對分析和偏倚評估，其評價的結(jié)果確保真實可靠[2]。文件中還規(guī)定，根據(jù)計算出的最后結(jié)果，判斷可接受誤差與預(yù)期偏差95%可信區(qū)間的關(guān)系，具體內(nèi)容可以有以下3種情況：(1)可接受誤差落在預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間范圍內(nèi)，表示兩種檢測系統(tǒng)的偏倚可以接受；(2)可接受誤差落在大于預(yù)期偏差95%的可信區(qū)間上限，則表示有97.5%的概率得出兩系統(tǒng)的結(jié)果具有一致性，兩種檢測系統(tǒng)的偏倚可以接受；(3)可接受誤差落在小于預(yù)期偏差95%可信區(qū)間下限，則表示有97.5%的概率得出結(jié)果不具有一致性，兩種檢測系統(tǒng)的偏倚不可以接受[3]。本實驗采用的允許誤差判斷標準為1/2CLIA’88，是中國衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦并使用的標準[4]。由于CLIA’88應(yīng)用范圍比較廣泛，是室間質(zhì)量評價的標準之一，其體現(xiàn)的是可接受方法誤差的總誤差(隨機誤差+系統(tǒng)誤差) 的最低水平，而且EP9-A 文件提供的方法只是從引入系統(tǒng)誤差大小上考慮，并沒有將隨機誤差考慮在內(nèi)，所以本實驗將CLIA’88允許誤差的1/ 2 作為方法比對檢測系統(tǒng)的結(jié)果系統(tǒng)誤差的允許限值，以使其結(jié)果更具有說服力[5]。CREA、ALT在兩檢測系統(tǒng)的測定結(jié)果在比較范圍內(nèi)與參比方法(X)均具有可比性。臨床可接受性能的評價未超過1/2 CLIA’88規(guī)定允許誤差，說明可比性符合臨床要求。

檢測系統(tǒng)是指完成一個檢驗項目所涉及的儀器、校準品、試劑、保養(yǎng)計劃、檢驗程序等的組合[6]。本文對兩臺分析儀及所用的不同試劑的兩個不同檢測系統(tǒng)作了比對分析，從結(jié)果中看出，兩臺分析儀重復(fù)性及相關(guān)性均符合儀器的要求。

本文研究表明，在兩種全自動生化分析儀上CREA、ALT的測定結(jié)果具有可比性，差別無顯著性意義。在不同實驗室之間，或在同一實驗室不同儀器之間所存在的差別，應(yīng)對其進行方法學(xué)比對研究，這樣才能保證檢測結(jié)果的準確性與可靠性，從而為臨床提供一組可靠的檢測結(jié)果，滿足臨床診斷的需要。

[1] National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples,approved guideline[S].EP9-2A,Pennsylvania. NCCLS,1986.

[2] 許靜，王偉祥，金慧萍，等.干、濕生化分析儀部分測定值的比對分析和偏倚評估[J]. 檢驗醫(yī)學(xué),2010，3(25)：207-209.

[3] 初開秋,任立晟,田清武.同種項目在不同生化分析儀測定結(jié)果的偏倚評估與可比性研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2008,9(29):853-854.

[4] 張傳寶,張克堅. 方法對比及偏差評估的方法—介紹NCCLS 文件EP9-2A[J]. 江西醫(yī)學(xué)檢驗,2000,18 (2):108-109.

[5] National Committee for Clinical Laboratory Standards[S].Continuous quality improvement: Essential management approaches. Wayne PA:NCCLS,1999.

[6] 張秀明，鄭松柏，孫蕾，等．應(yīng)用Westgard方法評價決定圖判斷生化檢測系統(tǒng)性能的可接受性[J]．中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(1)：86-97.

[7] 梁瑞蓮，周遠青，謝麗明，等. 同室不同生化檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的比對和偏倚評估[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2009,14(6):1159-1162.