滕 坤,徐建娜

(通化師范學(xué)院 制藥與食品科學(xué)系,吉林 通化134002)

中藥由于成分復(fù)雜，因而常常是一藥多效，但中醫(yī)治病往往又不是要利用藥物的所有作用，而是根據(jù)病情有所選擇，需要通過(guò)炮制對(duì)藥物原有的性能予以取舍，權(quán)衡損益，使某些作用突出，某些作用減弱，力求符合疾病的實(shí)際治療要求.

大黃為臨床常用中藥，藥用歷史悠久，功效獨(dú)特，對(duì)消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等均呈現(xiàn)出良好的治療作用，而其中的大黃多糖有抗心肌缺血、抗心律失常、抗腫瘤、免疫增強(qiáng)及腸上皮損傷修復(fù)作用[1]，對(duì)TNBS誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎有治療作用，還對(duì)腦損傷后大鼠腦皮熱休克蛋白70有影響[2].而不同的炮制方法對(duì)其成分的影響也不一樣，因而通過(guò)比較研究生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭、醋大黃對(duì)大黃多糖的影響，為將來(lái)研究大黃多糖以及將其更好的運(yùn)用于臨床奠定一定的理論基礎(chǔ).

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

722光柵分光光度儀

電子分析天平(METTLERAE-240)瑞士產(chǎn)品

1.2 材料與試劑

大黃藥材(購(gòu)自通化市醫(yī)藥大廈)

葡萄糖，苯酚，硫酸等均為分析純(沈陽(yáng)市華東試劑廠)

2 方法與結(jié)果

2.1 大黃的炮制方法

(1)大黃.取原材料，除去雜質(zhì)，大小分開(kāi)，洗凈，撈出，潤(rùn)淋至軟后，切厚片或小方塊，晾干或低溫干燥，篩去碎屑.

(2)酒大黃.取大黃片或塊，用黃酒噴潤(rùn)攪勻，稍悶潤(rùn)，待酒被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火炒干，色澤加深，取出晾涼，篩去碎屑.大黃片或塊每100kg，用黃酒10kg.

(3)熟大黃.取大黃片或塊，置木甑、籠屜或其他容器內(nèi)，隔水蒸至大黃內(nèi)外均呈黑色為度，取出，干燥;取大黃片或塊，用黃酒攪勻，悶約1～2小時(shí)至酒被吸進(jìn)，裝入燉藥罐內(nèi)或適宜容器內(nèi)，密閉，隔水燉約24～32小時(shí)至大黃均呈黑色時(shí)取出，干燥.

大黃片或塊每100kg，用黃酒30kg.

(4)大黃炭.取大黃片或塊，置炒制容器內(nèi)，用武火加熱，炒至外表呈焦黑色時(shí)，取出，晾涼.

(5)醋大黃.取大黃片或塊，用米醋攪勻，稍悶潤(rùn)，待醋被吸進(jìn)后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，取出，晾涼，篩去碎屑.大黃片或塊每100kg，用米醋15kg.

2.2 大黃多糖的提取

將大黃粉碎成粗粉，用80%乙醇回流提取2次，每次2h.殘?jiān)谒∩蠐]干溶劑，用600mL水回流提取，每次 2h，共3次.合并提取液，在濃縮過(guò)程中溶液漸變成淺黃色.濃縮后加95%乙醇醇沉，使含醇量達(dá)80%，沉淀用水溶解濃縮，用氯仿-正丁醇(4:1)多次萃取，除去蛋白質(zhì)，再經(jīng)無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚相繼洗滌，對(duì)水透析72h，低溫干燥得大黃多糖[3].

2.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精確稱取于105℃干燥至恒重的葡萄糖250mg，置100mL容量瓶中，定容，搖勻.取1mL溶液，置50mL容量瓶中定容，搖勻(含葡萄糖50ug)，備用.

2.4 波長(zhǎng)選擇

精密吸取葡萄糖溶液1.0mL，置10mL量瓶中，用純水補(bǔ)充至2.0mL，加入1.0mL苯酚試劑，混勻，迅速加入濃硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱15min，取出置冷水浴中冷卻至室溫.另以純水2mL同法操作，為空白對(duì)照.用722光柵分光光度儀在480～520nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，確定最大吸收波長(zhǎng)為(492±1)nm.

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL用純水補(bǔ)充至2.0mL，按上法顯色，于492nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，求得回歸方程A=0.1205C-0.0849(r=0.9961)，式中A表示吸光度，C為葡萄糖質(zhì)量濃度.結(jié)果表明，葡萄糖質(zhì)量濃度在10～60ug范圍內(nèi)與吸光度成一條不通過(guò)原點(diǎn)的直線L，故供試品溶液測(cè)定用外標(biāo)兩點(diǎn)法定量.

2.6 換算因子測(cè)定

精密稱取干燥至恒重的大黃多糖20mg，加水適量溶解，置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為貯備液.精密吸取多糖貯備液0.4mL，加入蒸餾水1.6mL，按2.5項(xiàng)下操作方法，自“加苯酚試劑1.0mL…”起，測(cè)定吸光度，從回歸方程中求出供試液中葡萄糖質(zhì)量濃度(C)，計(jì)算換算因子F，F(xiàn)=W/CD，W為多糖質(zhì)量，C為多糖液中葡萄糖質(zhì)量濃度(ug/mL)，D為多糖溶液稀釋因子，結(jié)果F=1.869.

2.7 樣品含量測(cè)定

精密稱取干燥至恒重的生大黃粉末及酒大黃、熟大黃、大黃炭及醋大黃[4]粉末各1g，分別置圓底燒瓶中，各加入80%乙醇200mL，回流提取2次，每次1.5h，趁熱過(guò)濾，藥渣揮干溶劑，加入蒸餾水200mL，提取2次，每次2h，合并400mL提取液于500mL容量瓶中，定容.接著用吸管吸取5mL，加水定容至50mL容量瓶中，作為供試液[5].精密吸取各供試液2mL，置試管中，按2.5項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度.按公式多糖含量(%)=CDF/W·100%計(jì)算含量.結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 不同炮制方法炮制后大黃中多糖的含量測(cè)定結(jié)果

由上述測(cè)定結(jié)果表明，經(jīng)酒大黃和熟大黃炮制后的大黃中多糖的含量較生大黃中大黃多糖含量有所增加，且酒大黃的炮制方法對(duì)大黃多糖的含量影響較大；而經(jīng)大黃炭和醋大黃炮制后的大黃多糖含量較生大黃中大黃多糖含量有所減少，且醋大黃的炮制方法對(duì)大黃多糖的含量影響較大.

3 結(jié)論

通過(guò)研究不同的炮制方法對(duì)大黃中多糖含量的影響，為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)大黃多糖及其將來(lái)更加合理的應(yīng)用于臨床提供了一定的理論依據(jù).

[1]王志鵬,張若,劉莉,等.大黃多糖對(duì)潰瘍性腸上皮細(xì)胞和外周血中性粒細(xì)胞凋亡的影響[J].世界華人消化雜志,2006,14(1):29-34.

[2]王志鵬,劉莉,梅其炳，等.大黃多糖對(duì)腦損傷后大鼠腦皮層熱休克70表達(dá)的影響[J].中國(guó)臨床康復(fù).2002,22(6):17-18.

[3]倪受東,嚴(yán)得江,徐先祥.大黃多糖的提取及含量測(cè)定[J].藥物鑒定,2007(16):10-11.

[4]程廷仁.大黃的炮制方法與使用[J].山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,15(3):36-37.

[5]田芹,傅鑫,干盈盈,等.大黃多糖的提取和理化性質(zhì)的研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2007,23(2):17-18.