田富饒 楊蘭花 王旭強(qiáng)

(義烏出入境檢驗(yàn)檢疫局，義烏 322000)

氫醌和苯酚具有一定的滲透力和美白功效，常被添加于美白類化妝品中。由于氫醌、苯酚對人體均有毒性，被國家明令禁止在護(hù)膚類化妝品中使用，可是現(xiàn)在很多美容院為了爭取顧客，迎合其快速祛斑的心理需求，四處尋找一涂即白的“神奇水”、“魔力膏”，一些不法廠商為了牟取暴利，投其所好，無視國家法規(guī)，在化妝品中加入大量的違禁物質(zhì)。

氫醌(對苯二酚)屬于超抑制酪氨酸酶和黑色素細(xì)胞毒劑，它通常以2%～4% 的濃度作為工業(yè)生產(chǎn)中的脫色劑使用，后來有人把它用在治療黃褐斑上，確實(shí)很有效。于是“氫醌霜”就盛行起來了，并一度被認(rèn)為是祛斑的首選產(chǎn)品。但后來人們發(fā)現(xiàn)，長期使用“氫醌霜”會導(dǎo)致黑色素細(xì)胞死亡，使色素脫失，發(fā)生白斑，或引起褐黃病(oehronosis)。倘若大面積使用，還會引起全身中毒，使肝、腎功能受到嚴(yán)重的傷害，甚至導(dǎo)致死亡。因此目前美國、法國的祛斑產(chǎn)品中禁止使用氫醌，而且在產(chǎn)品包裝盒的顯著位置還明確標(biāo)明“本品中不含氫醌”的字樣。我國強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)GB 7916-1987《化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定了化妝品中禁用及限用物質(zhì)，其中對氫醌及苯酚作了明確規(guī)定：氫醌可以在染發(fā)類化妝品中作氧化著色劑，苯酚也只能在洗發(fā)類化妝品中限量使用，禁止加在其它類化妝品中。

近幾年來，國內(nèi)美白、祛斑產(chǎn)品市場發(fā)展十分迅速，這些產(chǎn)品在給人們帶來皮膚白皙、色斑淡化、祛除色素沉著的同時，給消費(fèi)者造成傷害的問題也比比皆是，如皮膚紅腫、脫皮等現(xiàn)象時有發(fā)生。所以監(jiān)測檢驗(yàn)祛斑美白類化妝品的質(zhì)量，保證消費(fèi)者用到衛(wèi)生、安全的化妝品已成為當(dāng)前檢驗(yàn)檢疫工作的重點(diǎn)。

目前，氫醌、苯酚的檢測方法有分光光度法、氣相色譜法[1]、液相色譜法[2，3]、氣質(zhì)聯(lián)用法[4]。筆者建立了二極管陣列檢測器的高效液相色譜法，該方法具有樣品前處理簡單、快速、靈敏度高、成本低、測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠等特點(diǎn)，為美白類、祛斑類化妝品和香波等日用化學(xué)品中氫醌和苯酚的檢測提供了一種有效的分析手段。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，附帶DAD二極管陣列檢測器，美國安捷倫公司；

超聲波清洗器：D-78224型，德國Elma公司；

高速離心機(jī)：3-30K型，德國Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；

超純水儀：Milli-Q型，美國密理博公司；

有機(jī)性樣品濾膜：0.45 μm；

甲醇：色譜純；

氫醌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：Lot 00526，純度99.0%，德國Dr．Ehrenstorfer公司；

苯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)： Lot 80428，純度 99.5%，德國Dr．Ehrenstorfer公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配制

分別精密稱取氫醌、苯酚標(biāo)準(zhǔn)品0.099、0.1212 g，用甲醇溶解后定容至100 mL棕色容量瓶中，分別得到0.990、1.212 mg/mL的氫醌、苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于4℃暗處保存。臨用時將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成所需濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取試樣1.00 g于具塞比色管中，必要時在水浴上餾除乙醇等揮發(fā)性有機(jī)溶劑，用甲醇定容至10 mL，充分振蕩，于超聲波清洗器中常溫超聲提取15 min，離心，取上清液過0.45 μm濾膜后備用，同時做試劑空白。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN (250 mm×4.6 mm, 5-Micron )；流動相：水-甲醇(體積比為75∶25),等度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測器：二極管陣列(DAD)檢測器，檢測波長為280 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長

在190～370 nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，氫醌、苯酚均在222、280 nm處有特征吸收，氫醌、苯酚在222 nm 處有一最大吸收峰，在此波長下測定氫醌、苯酚具有較高的靈敏度，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在此條件下樣品中許多組分都有吸收，對測定產(chǎn)生干擾。為保證二者同時測定，選擇280 nm作為檢測波長。在此條件下氫醌、苯酚有較好的分離效果，干擾少，靈敏度高，分析速度快。

2.2 提取溶劑

根據(jù)各個物質(zhì)的理化性質(zhì)，選擇了甲醇、甲醇-水、乙腈作為提取溶劑，結(jié)果表明，乙腈的提取效果最差且毒性大；甲醇-水系統(tǒng)引入了大量的水溶性雜質(zhì)；甲醇對各物質(zhì)的提取效果最好，是理想的提取溶劑，且毒性相對較小，操作簡單。

2.3 提取時間

按照1.3樣品前處理方法，分別在10、 15、 20、 25、 30 min測定提取物的峰面積，結(jié)果見表1。由表1可知，最佳提取時間為15 min。

表1 提取時間試驗(yàn)結(jié)果

2.4 色譜柱及流動相

選擇Agilent ZORBAXEclipse XDB -Cl8( 150 mm×4.6 mm, 5-Micron )和Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN ( 250 mm×4.6 mm, 5-Micron )色譜柱及甲醇、不同比例的甲醇-水為流動相，分別進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，在Agilent ZORBAX Eclipse XDB- CN柱上以甲醇-水 (體積比為25∶75)為流動相，分析時間短，峰型好，靈敏度高，符合分析要求。在此條件下，氫醌和苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及洗發(fā)香波樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液后的色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 氫醌和苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 洗發(fā)香波樣品中添加了氫醌和苯酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

2.5 線性方程和檢出限

利用氫醌和苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制成氫醌濃度依次為7.920、15.840、31.680、39.600、79.200 mg/L，苯酚濃度依次為9.696、19.392、38.784、48.480、96.960 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)混合工作溶液。按照1.4的條件分別進(jìn)行測定，以氫醌或苯酚的濃度(x)對相應(yīng)的峰面積(y)進(jìn)行線性回歸，在7.920～79.200 mg/L范圍內(nèi)氫醌線性方程為y= 10.370 75x-1.156 02，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；在9.696～96.960 mg/L范圍內(nèi)，苯酚的線性方程為y=4.176 40x+0.172 47，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99。以3倍信噪比計(jì)算氫醌和苯酚的檢出限分別為0.049 29、0.125 8 mg/kg。

2.6 精密度試驗(yàn)

對氫醌濃度為7.920 mg/L和苯酚濃度為9.696 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測定結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收試驗(yàn)

對不含氫醌和苯酚的洗發(fā)香波樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加入3個不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度平行測定6次，按1.3方法進(jìn)行樣品處理，在1.4條件下進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。由表3可知，加標(biāo)回收率為99.05%～100.90%。

表3 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3 結(jié)論

建立的美白類、祛斑類化妝品和香波中氫醌和苯酚的高效液相色譜-二極管陣列檢測器測定方法，樣品前處理簡單，操作方便，線性范圍較寬，檢出限低，精密度和準(zhǔn)確度高，同時檢測成本較低，可滿足用戶的實(shí)際需要，也為化妝品質(zhì)量監(jiān)督提供有力的技術(shù)支撐。

[1] 劉秋華,趙晶,賀勇,等.市售美白祛斑化妝品氫醌、苯酚含量調(diào)查[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2003, 13(2):212.

[2] 楊紅,劉秋華.化妝品中的氫醌、苯酚確認(rèn)方法[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2005, 15(5):550-553.

[3] 張玉黔,李宏志,賈薇,等.高效液相色譜法同時測定化妝品中氫醌、苯酚、抗生素和防腐劑等11種物質(zhì)[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2008, 18(8):1 548-1 550.

[4] 趙同剛.化妝品衛(wèi)生規(guī)范[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2007.