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(河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，河北保定 071002)

高效液相色譜法測(cè)定金蔥粉中的羅丹明B含量

郝燕花 閆正 鄧?yán)?/p>

(河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，河北保定 071002)

建立了金蔥粉中羅丹明B的提取、富集凈化和測(cè)定的方法。樣品經(jīng)加熱萃取、聚酰胺吸附羅丹明B、堿液解吸、蒸發(fā)、定容，用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定條件：色譜柱為ODS C18；流動(dòng)相為甲醇-水(體積比為70∶30)；流速為1.5 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為550 nm。羅丹明B在0.14～22 μg／mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.999 8)。方法的回收率為91.7%～104.7%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.46%～1.45%(n=5)。方法的檢出限(S／N=3)為0.033 μg／mL，定量限(S／N=10)為0.11 μg／mL。該方法適用于測(cè)定金蔥粉中的羅丹明B含量。

高效液相色譜法 金蔥粉 羅丹明B

金蔥粉作為一種效果獨(dú)特的表層處理材料，廣泛用于工藝品、化妝品、高檔裝潢、油漆、服飾、玻璃工藝及皮革加工等領(lǐng)域，其特點(diǎn)在于增強(qiáng)產(chǎn)品的視覺(jué)效果，使裝飾部分凹凸有層次，更具立體感。羅丹明B(Rhodamine B)又稱玫瑰紅B，亮綠色結(jié)晶粉末，是一種具有鮮桃紅色的人工合成色素。若將羅丹明B加到金蔥粉中用于化妝行業(yè)則對(duì)人體有潛在的致癌和致突變危害性，國(guó)家禁止使用。目前，還未見有金蔥粉中的人工合成色素的處理和檢驗(yàn)方法。筆者參照食品中人工合成色素的測(cè)定方法［1-3］，建立了金蔥粉中羅丹明B的測(cè)定方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-10A型，SPD-10A紫外可見檢測(cè)器，日本島津（蘇州）公司；

紫外可見分光光度計(jì)：UV-4802H型，尤尼柯(上海)公司；

電子天平：AG245型，瑞士Mettler Toledo公司；

自動(dòng)雙重純水蒸餾器：SZ-93型，上海亞榮生化儀器廠；

甲醇：色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

鹽酸：AR，天津開發(fā)區(qū)跨躍工貿(mào)有限公司；

聚酰胺：74～150 μm(100～200 目 )，色譜級(jí)，上海天蓮精細(xì)化工有限公司；

乙醇：AR，天津市進(jìn)豐化工有限公司；

氨水：AR，天津市華東試劑廠；

鹽酸溶液：體積分?jǐn)?shù)為10%；

無(wú)水乙醇-氨水-水：體積比為7∶2∶1；

羅丹明B：AR，上海源葉生物科技有限公司；

實(shí)驗(yàn)用水：二次水。

1.2 樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取0.02～0.03 g樣品于燒杯中，加入100 mL二次水，加入2～3 mL鹽酸溶液，將燒杯置于加熱套上加熱提取2 h，加熱過(guò)程中補(bǔ)充二次水以防蒸干。過(guò)濾提取液，剩余殘?jiān)貜?fù)提取一次。合并提取液，加熱蒸至20 mL左右，加入1 mL鹽酸溶液，停止加熱，冷卻。稱取2～4 g聚酰胺粉末于提取液燒杯中，將提取液調(diào)成糊狀。用G3垂融漏斗抽濾，用二次水沖洗3次，棄去濾液。用無(wú)水乙醇-氨水-水?dāng)嚢杞馕?～5次(每次10 mL)，抽濾，收集濾液于燒杯中，于加熱套上加熱蒸發(fā)至近干，冷卻后用二次水溶解，定量轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，備用。上機(jī)測(cè)試前用0.22 μm水系微孔濾膜過(guò)濾。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取0.02 g羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)樣品于100 mL容量瓶中，制成羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。按1.2方法處理，制成 22、8.8、4.4、1.1、0.14 μg／mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，迪馬科技公司)；流動(dòng)相：甲醇-水(體積比為70∶30)；流速：1.5 mL／min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：550 nm。

1.5 色譜圖

在1.4色譜條件下，羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖見圖1。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品處理?xiàng)l件的選擇

以甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙腈等溶劑超聲萃取樣品，發(fā)現(xiàn)甲醇、二氯甲烷萃取樣品中的色素較完全；乙腈、丙酮可部分萃??；正己烷和乙酸乙酯萃取率極低。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲醇萃取液的測(cè)定峰形很好，而二氯甲烷萃取液的峰形很差，表明甲醇作為萃取液的選擇性優(yōu)于二氯甲烷。采取加入鹽酸溶液并加熱的方式萃取樣品時(shí)，萃取率高。考慮到甲醇有毒，且成本較高，故選擇加入鹽酸溶液并加熱的方式萃取樣品。鹽酸溶液濃度過(guò)大，則樣品萃取溶液變黃，無(wú)羅丹明B色譜峰，經(jīng)試驗(yàn)，確定用體積比為10%的鹽酸溶液，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酸化變色的樣品，加堿后恢復(fù)原色，上機(jī)測(cè)試有羅丹明B峰。樣品的解吸液中含有無(wú)水乙醇和氨水，可直接采用加熱蒸干法除去。

2.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)了不同比例的乙腈與水、甲醇與水及甲醇與0.02 mol／L乙酸銨溶液作流動(dòng)相的效果。發(fā)現(xiàn)乙腈與水作流動(dòng)相時(shí)，羅丹明B的色譜峰變寬，拖尾較嚴(yán)重，且響應(yīng)信號(hào)低，信噪比小。流動(dòng)相為甲醇-水(體積比為75∶25)時(shí)，雜質(zhì)峰與羅丹明B峰未完全分離；甲醇-水(體積比為70∶30)時(shí)，干擾峰與羅丹明B峰能完全分離，峰形好。甲醇與0.02 mol／L乙酸銨溶液為流動(dòng)相時(shí)，乙酸銨溶液-甲醇(體積比為25∶75)能將測(cè)定峰和干擾峰分離開，分離效果和峰形都很好，但和甲醇-水為流動(dòng)相相比，響應(yīng)信號(hào)和信噪比沒(méi)有顯著變化。綜合考慮，選擇甲醇-水(體積比為70∶30)為流動(dòng)相。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

將羅丹明B的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品分別用紫外-可見分光光度計(jì)掃描，發(fā)現(xiàn)在550 nm左右有最大吸收。試驗(yàn)了500～600 nm波長(zhǎng)對(duì)信噪比的影響，結(jié)果見圖2。由圖2可知，550 nm處羅丹明B信噪比最大，故選擇550 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 線性范圍、檢出限和定量限

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)1.3羅丹明B系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行HPLC分析，以羅丹明B的峰面積(y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(x，μg／mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為y=7 711.1+85 757.9x。在0.14～22 μg／mL濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 8。以信噪比(S／N)為3和10時(shí)，分別測(cè)得方法的檢出限為0.033 μg／mL，定量限為 0.11 μg／mL。

2.5 方法的回收率和精密度

按1.2處理樣品并進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，回收率為91.7%～104.7%，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度較高；測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.46%～1.45%之間，說(shuō)明方法的精密度良好。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.6 樣品的測(cè)定

采用建立的方法對(duì)8個(gè)樣品進(jìn)行分析測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品中羅丹明B含量的測(cè)定(n=5)

3 結(jié)語(yǔ)

建立了高效液相色譜法測(cè)定金蔥粉中羅丹明B的方法，對(duì)樣品預(yù)處理?xiàng)l件、流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)等條件的選擇進(jìn)行了研究。該方法的靈敏度和準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，為化妝品用金蔥粉中違禁色素羅丹明B的測(cè)定提供了較好的分析方法。

［1］陳毓芳，林海丹，李為鵬，等.高效液相色譜法測(cè)定果汁和果蔬中柑橘紅 2 號(hào)染料［J］.理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2011，47(5)： 536-538.

［2］陳青川，于文蓮，王靜.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定多種食品添加劑［J］.色譜，2001，19 (2)： 105-108.

［3］楊聞翰，董媚嬌，杜振霞.飲料中紅花黃色素的固相萃?。咝б合嗌V-質(zhì)譜測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2010，29(5)： 455-459.

DETERMINATION OF RHODAMINE B IN GLITTER POWDER BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY

Hao Yanhua，Yan Zheng，Deng Li
(College of Chemistry and Environment Science，Hebei University，Baoding 071002，China)

A method for the extraction，purification，enrichment and determination of the rhodamine B in glitter powder was established. The sample was extracted by heating，rhodamine B in it was adsorbed by polyamide，resolved by lye，evaporated，diluted to volume and determined by high performance liquid chromatography-UV detector. Measurement conditions： column was ODS C18，mobile phase was methanol-water(volume ratio was 70∶30)，flow rate was 1.5 mL／min，detection wavelength was 550 nm. Rhodamine B had good linear relationship with the peak area in the range of 0.14-22 μg／mL(r=0.999 8). Recovery was 91.7%-104.7%. The RSD was 0.46%-1.45(n=5)%. Detection limit(S／N=3) was 0.033 μg／mL，and the limit of quantification(S／N=10) was 0.11 μg／mL. This method is suitable for determining the content of rhodamine B in glitter powder.

high performance liquid chromatography(HPLC)， glitter powder， rhodamine B

2011-08-12