摘要:選用ECLIPSE 50試劑盒檢測(cè)生鮮牛乳中抗生素殘留，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生鮮牛乳pH值下降對(duì)抗生素殘留接近試劑盒檢出限時(shí)易產(chǎn)生假陰性結(jié)果，初乳易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，是否預(yù)熱處理對(duì)檢測(cè)結(jié)果無直接影響。

關(guān)鍵詞:生鮮牛乳;抗生素;ECLIPSE 50試劑盒;結(jié)果誤判

中圖分類號(hào):TS252.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1007-273X(2010)10-0011-02

牛奶和奶制品中含有抗生素，人們長(zhǎng)期食用危害人體健康，其危害主要有:①使人體產(chǎn)生耐藥性，給今后患病使用抗生素治療帶來不良影響;②抗生素對(duì)過敏體質(zhì)的人會(huì)出現(xiàn)過敏反應(yīng)，危害健康;③破壞人體內(nèi)正常菌群的平衡狀態(tài)，使菌群失調(diào)[1]。原料乳中殘留抗生素影響乳制品加工，如發(fā)酵奶制品(酸奶和干酪)的生產(chǎn)依賴于乳酸菌的生長(zhǎng)，而乳酸菌的生長(zhǎng)受抗生素的強(qiáng)烈抑制，易導(dǎo)致發(fā)酵失敗。牛奶中抗生素殘留問題日益受到社會(huì)各界的重視。

我國(guó)原料乳及乳制品中抗生素殘留嚴(yán)重，乳中抗生素檢測(cè)是我國(guó)乳品加工過程中至為關(guān)注的問題。目前，牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法大致分三類:生物法、免疫法、儀器分析法[2～4]。不同方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，而目前對(duì)于原料乳來說，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏性高的微生物檢測(cè)方法應(yīng)用甚廣。ECLIPSE 50試劑盒是一種微孔板，利用微生物學(xué)原理，每個(gè)微孔中含有嗜熱脂肪芽孢桿菌菌種的瓊脂培養(yǎng)基和pH指示劑。當(dāng)微孔板在65℃培養(yǎng)時(shí)，孢子發(fā)育生長(zhǎng)代謝產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基的pH值降低，在pH指示劑的作用下原來的藍(lán)紫色將會(huì)變?yōu)辄S色、黃綠色。ECLIPSE 50是一種適合于牧場(chǎng)定性檢測(cè)抗生素的試劑盒，特點(diǎn)是快速、安全、精確、穩(wěn)定。本文主要對(duì)ECLIPSE 50試劑盒在實(shí)際檢測(cè)過程中常出現(xiàn)的結(jié)果誤判現(xiàn)象進(jìn)行分析研究，為相關(guān)微生物檢測(cè)抗生素方法提供理論參考。

1材料與方法

1.1材料和儀器

生鮮牛乳、無抗的生鮮牛乳、初乳、末乳(均來源于貴陽市周邊某養(yǎng)殖小區(qū));市售獸用80萬IU青霉素G(哈藥集團(tuán)制藥總廠);ECLIPSE 50試劑盒;恒溫水浴鍋。

1.2檢驗(yàn)方法

1.2.1試劑盒檢測(cè)步驟和結(jié)果判讀根據(jù)待檢樣品的數(shù)量用刀從微孔板上裁下所需的微孔，注意不要?jiǎng)濋_其他微孔上的金屬膜以防微孔內(nèi)培養(yǎng)基揮發(fā)以致干結(jié)。裁下的微孔放入空的塑料架上，揭去微孔上的金屬薄膜，用微量取樣器在每個(gè)微孔中加入50μL牛奶樣品(同時(shí)用已知無抗奶做陰性對(duì)照，用已加入0.5IU青霉素的奶樣做陽性對(duì)照;取樣頭應(yīng)取一個(gè)樣換一個(gè))，再用黏膠薄膜小心地密封好微孔板，置于 (65±2)℃的水浴鍋中恒溫培養(yǎng)2.5～3.0h。從微孔側(cè)面觀察結(jié)果，黃綠色或者黃色表示抗生素不存在(陰性);藍(lán)、紫色表示抗生素存在(陽性)。

1.2.2試劑盒檢出限的確定以市售獸用80萬IU青霉素G作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別稀釋至0.050、0.020、0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL，按1.2.1操作。

1.2.3 牛乳pH值對(duì)結(jié)果的影響筆者曾經(jīng)對(duì)30份生鮮牛乳進(jìn)行pH值測(cè)定，初始時(shí)pH值為6.30～6.75，在4℃溫度下保存48h后，其pH值下降為4.50～6.40?？紤]此種情況，調(diào)節(jié)已知無抗生鮮牛乳的pH值分別為7.0、6.8、6.5、6.0、5.8、5.5、5.0、4.6時(shí)，加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)青霉素G，使其含量分別為0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL時(shí)按1.2.1操作。

1.2.4牛乳預(yù)熱對(duì)結(jié)果的影響取1份牛乳加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)青霉素G，使其含量分別為0.010、0.008、0.006、0.004、0.003、0.002、0.001IU/mL，將以上6份不同青霉素G濃度的牛乳一分為二，其中一份在80℃加熱5min，快速冷卻至室溫后按1.2.1操作;另一份直接按1.2.1操作。

1.2.5初乳和末乳對(duì)結(jié)果的影響分別取未使用抗生素的奶牛不同時(shí)間段的初乳和末乳進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2結(jié)果與討論

2.1試劑盒檢出限

不同濃度的青霉素G的檢測(cè)結(jié)果如表1所示，ECLIPSE 50試劑盒對(duì)青霉素G的檢出限為0.004 IU/mL。

2.2pH值對(duì)結(jié)果的影響

如表2所示，由表2可見，牛乳pH值高于5.8時(shí)，ECLIPSE 50試劑盒對(duì)青霉素G的檢測(cè)結(jié)果不變，當(dāng)牛乳pH值為5.5時(shí)，試劑盒對(duì)青霉素G的檢出限有所上升，為0.006IU/mL，而當(dāng)pH值下降到5.0時(shí)，試劑盒對(duì)青霉素G的檢出限變?yōu)?.008IU/mL。也就是說當(dāng)牛乳本身抗生素含量接近試劑盒檢出限時(shí)，隨著牛乳保存時(shí)間的延長(zhǎng)，牛乳內(nèi)微生物代謝產(chǎn)酸pH值下降，試劑盒檢出限有所上升，可能造成假陰性結(jié)果。

2.3牛乳預(yù)熱對(duì)結(jié)果的影響

預(yù)熱處理的目的是為了殺滅牛乳中所含的微生物，消除此類微生物因生長(zhǎng)代謝對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。由表3可見，牛乳預(yù)熱處理并未造成ECLIPSE 50試劑盒對(duì)青霉素G的檢出限發(fā)生變化。說明樣品含有一定雜菌對(duì)檢測(cè)結(jié)果不影響，分析原因應(yīng)該是ECLIPSE 50試劑盒選用的菌種是嗜熱脂肪芽孢桿菌，該菌生長(zhǎng)的最適溫度是65℃，該溫度下大多數(shù)微生物不能生長(zhǎng)，甚至已經(jīng)被殺死，因而不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。

2.4初乳和末乳

不同時(shí)間段的初乳和末乳的抗生素檢測(cè)結(jié)果如表4。由表4可見，除了2d的初乳產(chǎn)生假陽性結(jié)果外，其他均未發(fā)現(xiàn)異常。

3結(jié)論

通過以青霉素G作為標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)ECLIPSE 50試劑盒檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)預(yù)熱處理不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，牛乳本身的pH值在樣品抗生素含量接近檢出限時(shí)易產(chǎn)生誤判，另外初乳也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響。因此，生鮮牛乳抗生素殘留時(shí)最好應(yīng)在2h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，存放時(shí)間過長(zhǎng)不利于檢測(cè)，初乳、末乳不能用于檢測(cè)。

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