權(quán)中會,陰明亮,魏揀選,張國士,馬保華

(1.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院西安寵物醫(yī)院,陜西西安710065;2.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)院,陜西楊凌712100)

豬瘟(CSF)是嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一,在臨床上豬瘟常表現(xiàn)典型和非典型發(fā)病特征,因此及時準確的實驗室診斷尤為重要。免疫膠體金層析診斷法近年來在生物醫(yī)學各領域得到廣泛應用,在動物醫(yī)學臨床診斷方面的應用起步較晚,最近幾年才見到相應報道。該技術(shù)的基本原理是將配體(抗體或抗原)以線狀包被于硝酸纖維素膜等微孔薄膜上,并用膠體金標記另一配體或其他物質(zhì)以干態(tài)固定在吸水材料上。當加入待檢樣品時,通過毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動,當泳動至膠體金標記處時,如樣品中含有待檢受體,則發(fā)生第一步特異性免疫反應。第一步特異性免疫反應形成的免疫復合物繼續(xù)泳動至線狀包被區(qū)時,發(fā)生第二步特異性免疫反應,所形成的免疫復合物被截留在包被的線狀區(qū),通過標記的膠體金而顯紫紅色條帶(檢測帶),而游離標記物則越過檢測帶,與結(jié)合標記物自動分離[1]。該診斷技術(shù)操作簡單、特異性強,用時較短(可在15～25min獲得直觀判斷結(jié)果),特別適合于廣大基層獸醫(yī)人員以及大批量檢測和大面積普查等[2]。2008年1～7月,我們應用豬瘟病毒抗原快速金標檢測卡對西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)院收治的臨床疑似豬瘟或無名高熱的134頭病豬進行了豬瘟病毒抗原檢測。

1 材料

1.1 豬瘟病毒抗原快速金標檢測卡 深圳市康百得生物科技有限公司出品,批號20071020。

1.2 待檢樣品 臨床疑似豬瘟病豬或無名高熱病豬的血液樣本共134頭份,其中哺乳仔豬23頭份,斷奶豬89頭份,母豬22頭份;樣品均為來本院就診的近15d內(nèi)未接種過豬瘟疫苗的病豬,主要來自當?shù)剞r(nóng)村散養(yǎng)戶和小養(yǎng)豬場。從病豬耳靜脈、前腔靜脈或從病死豬心臟采血,分離血清,或者用EDTAK2抗凝,離心分離血漿。根據(jù)病豬臨床癥狀和病理變化的不同,將樣本分為兩類：(1)臨床癥狀和病理變化較典型的疑似豬瘟病例,其樣本55頭份。急性型病豬體溫41℃～42℃,高熱稽留;白細胞數(shù)降低至10×109以下;眼結(jié)膜潮紅,兩眼有多量黏液、膿性分泌物;皮膚有出血點或斑;初便秘后腹瀉,糞便惡臭;常并發(fā)肺炎和纖維素性壞死性腸炎。慢性型病豬的體溫稽留在 40℃左右;精神委頓,消瘦,貧血,衰弱,病情時輕時重,食欲時好時壞,糞便時干時稀;病程較長者,皮膚出現(xiàn)淤血斑和壞死塊,以腹下部為多見,有時也出現(xiàn)紫耳朵、干尾巴、紫斑蹄。病理變化：急性型呈現(xiàn)以多發(fā)性出血為特征的敗血癥變化,皮膚、黏膜、漿膜廣泛出血,血液凝固不良,消化道、呼吸道和泌尿生殖道有卡他性、纖維素性和出血性炎癥反應。淋巴結(jié)水腫、出血,呈暗紅色,切面呈大理石樣色彩;腎臟有針尖狀出血點或大的出血斑,呈現(xiàn)所謂的“雀斑腎”外觀;脾臟邊緣梗死;膀胱、喉頭黏膜及會厭軟骨上有程度不同的出血點;大腸的回盲瓣附近淋巴濾泡腫大隆起、有出血和壞死;病程稍久的病例,可見纖維素性肺炎或壞死性化膿性肺炎,肺胸膜粗糙。慢性型的出血病變輕微,但在回盲口附近及結(jié)腸常有特征性的偽膜性壞死和潰瘍,呈紐扣狀;斷奶仔豬的肋骨末端與軟骨交界處發(fā)生鈣化,可見有黃色骨化線。(2)臨床癥狀和病理變化不典型或無名高熱病豬,其樣本79頭份。病豬臨床癥狀較輕,體溫一般在40℃～41℃左右;有的病豬耳、尾、四肢末端皮膚壞死,發(fā)育停滯,到后期站立不穩(wěn)、后肢癱瘓,部分跗關節(jié)腫大。病理變化不典型,淋巴結(jié)水腫,輕度出血或不出血;腎出血點不一致;脾稍腫,有1～2處梗死灶;回盲瓣很少出現(xiàn)紐扣狀潰瘍,但有潰瘍和壞死病理變化。

2 方法

將檢測卡水平放置,做好標記,在檢測卡的加樣孔內(nèi)加入2滴(70～100μL)待檢血清/血漿樣品,室溫下靜置,20min內(nèi)判定結(jié)果。陽性：在觀察孔內(nèi),檢測線區(qū)(T)及對照線區(qū)(C)同時出現(xiàn)紫紅色線。陰性：在觀察孔內(nèi),只有對照線區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色線。失效：在觀察孔內(nèi),對照線區(qū)(C)和檢測線區(qū)(T)都不出現(xiàn)紫紅色線;或僅檢測線區(qū)(T)出現(xiàn)紫紅色線。

3 結(jié)果

應用豬瘟抗原金標檢測卡共檢測病豬樣本134頭份,總陽性率為67.16%(90/134);其中哺乳仔豬陽性率21.74%(5/23);斷奶豬陽性率77.53%(69/89);母豬陽性率72.72%(16/22)。檢測臨床癥狀和病理變化較典型的疑似豬瘟病例樣本55頭份,陽性符合率為89.10%(49/55);檢測臨床癥狀和病理變化不典型或無名高熱病豬樣本79頭份,陽性檢出率為51.90%(41/79),檢測結(jié)果見表1。

表1 豬瘟病毒抗原金標檢測卡檢測結(jié)果

4 小結(jié)及討論

檢測結(jié)果顯示,哺乳仔豬的豬瘟病毒陽性率最低,這可能與哺乳仔豬受母源抗體的保護以及與外界環(huán)境接觸時間相對較短有關。斷奶豬的豬瘟病毒陽性率最高,可能是由于斷奶后的豬失去母源抗體的保護,有些豬尚未及時接種豬瘟疫苗,或已接種疫苗,但因各種原因豬體免疫力不強,加之此時正值仔豬出售、販運高峰,從而增加了豬感染豬瘟病毒的可能。母豬的豬瘟病毒抗原陽性率也比較高,可能是由于近來仔豬市場價格上漲,這些豬多是農(nóng)村散養(yǎng)戶新留的母豬,疫苗注射率較低;或者是經(jīng)產(chǎn)母豬,但近年未加強免疫;而且病豬多是在發(fā)病后經(jīng)多方治療未有明顯效果的情況下來我院就診的,感染豬瘟病毒的可能性增大。近年來,豬的高熱病發(fā)病率較高,據(jù)報道有高致病性藍耳病、附紅細胞體病、豬瘟、無名高熱等[3]。此外,豬鏈球菌病、弓形體病、圓環(huán)病毒感染、豬肺疫、傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌病等也時有發(fā)生。這些疾病的某些癥狀和部分病變與豬瘟有相似之處,臨床上容易造成誤診。檢測結(jié)果顯示,豬瘟仍然是當?shù)刎i的重要疾病之一,所以必須十分重視豬瘟的防制。

我們應用豬瘟病毒抗原金標卡檢測臨床癥狀和病理變化較典型的疑似豬瘟病例,二者陽性符合率為89.09%,結(jié)果證實該金標檢測卡在豬瘟的快速診斷中具有一定的應用價值。應用豬瘟病毒抗原金標檢測卡,極大的方便了豬瘟的診斷,取得了明顯的效果。

[1]許保疆,郭成留.免疫層析快速診斷試紙條的制備及在動物疫病診斷上的應用[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(3)：48-51.

[2]陳龍賓,王愛華,蘇小庚,等.豬瘟病毒膠體金免疫層析檢測方法的建立及應用[J].中國獸醫(yī)科學,2007,37(6)：496-499.

[3]鄧銜柏,廖明,李玉谷,等.我國南方部分豬場發(fā)生高熱病的疫情調(diào)查初報[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(9)：40-41.