李璐，羅建光，孔令義

(中國(guó)藥科大學(xué)天然藥化教研室，江蘇 南京 210009)

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

《中國(guó)藥典》2010年版一部品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂項(xiàng)目 (YS-234,236),國(guó)家重大科技專項(xiàng)(20092X09502-011)

*孔令義,E-mail：cpu_lykong@126.com

小薊炒炭前后蒙花苷的含量測(cè)定△

李璐，羅建光，孔令義*

(中國(guó)藥科大學(xué)天然藥化教研室，江蘇 南京210009)

目的比較小薊炒炭前后蒙花苷含量的變化。方法采用Agilent ZORBAX SB -C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱，柱溫30℃，流動(dòng)相為甲醇-0.5%醋酸(55∶45)，檢測(cè)波長(zhǎng)為326nm，流速為1.0mL·min-1。結(jié)果蒙花苷在0.01～1.00μg線性關(guān)系良好，r=1.000，平均回收率為98.6%,RSD=2.48%(n=6)。結(jié)論該方法方便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為小薊和小薊炭的質(zhì)量控制提供依據(jù)，并有助于小薊合理炮制工藝的制定。

小薊；炒炭；蒙花苷；高效液相色譜法

小薊為中醫(yī)臨床常用之涼血止血要藥，來源于菊科植物刺兒菜Cirsiumsetosum(Willd.) MB.的干燥地上部分。夏、秋二季花開時(shí)采割，除去雜質(zhì)，曬干。小薊具有清熱涼血、止血、祛瘀等功能，歷代臨床上有生用和炒炭用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,兩者均具有促進(jìn)血液凝固的作用[1]。小薊中止血有效成分主要為黃酮類成分[2]，包括蒙花苷(Linarin)、蘆丁(Rutin)、刺槐素(Acacetin)等。經(jīng)過對(duì)小薊的系統(tǒng)研究[3]，發(fā)現(xiàn)小薊所含黃酮類成分中，以蒙花苷的含量最高，為其主要成分。故本文選擇蒙花苷作為指標(biāo)成分，用HPLC法測(cè)定小薊藥材和小薊炭中蒙花苷的含量，為小薊和小薊炭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)，同時(shí)為小薊炭的炮制工藝研究提供監(jiān)測(cè)方法。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)，包括G1322A在線脫氣機(jī)，GB1312A二元泵，GB1329A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱，G1315DDAD檢測(cè)器，G1362ARID檢測(cè)器，ChemstationRevB.03.02工作站，ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；UP2200H型超聲波提取器 (40KHz，100W)，十萬分之一電子天平(METTLERTOLEDO)。

1.2試藥

蒙花苷為本實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)MS，1H-NMR，13C-NMR鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC測(cè)定純度達(dá)98.5%以上。水為純凈水(樂百氏食品飲料有限公司)，甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)為色譜純，冰醋酸(南京化學(xué)試劑有限公司)為分析純。10批小薊藥材樣品除江蘇、安徽定遠(yuǎn)兩地為浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠提供外，其余均購(gòu)自各地藥材公司。經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室張勉教授鑒定為菊科植物刺兒菜Cirsiumsetosum(Willd.) MB.的干燥地上部分。10批小薊炭為分別取以上10批小薊藥材，參照《中國(guó)藥典》2005版(附錄ⅡD)[4]炒炭法炒至外焦黑色，篩去灰屑獲得。

2 方法和結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸(55∶45)；流動(dòng)相流速：1mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：326nm。對(duì)照品與樣品的色譜圖見圖1。

圖1 小薊HPLC圖

2.2對(duì)照品溶液的制備

取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液。

2.3供試品溶液的制備

取本品粉末(過四號(hào)篩)約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察

精密稱取蒙花苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。上述儲(chǔ)備液分別進(jìn)樣0.10,0.50,2.00,6.00,8.00,10.00μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行HPLC分析，記錄峰面積，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸計(jì)算。結(jié)果表明，蒙花苷在檢測(cè)范圍內(nèi)顯示了良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=2 048.2X+3.361 6,r=1.000，線性范圍為0.01～1.00μg。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取小薊藥材粉末0.1g(過四號(hào)篩)，按2.3項(xiàng)制備供試樣品，分別于0，2，4，6，8，10，12h進(jìn)樣，蒙花苷的RSD=0.41%，結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各色譜峰峰面積，RSD=0.28%，表明儀器精密度良好。

2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同批次小薊藥材粉末0.1g(過四號(hào)篩)6份，按2.3項(xiàng)制備供試樣品并分析，以蒙花苷的含量為考察指標(biāo)，蒙花苷的RSD=1.44%，表明重現(xiàn)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的藥材粉末0.05g，共6份，精密加入對(duì)照品溶液適量，按2.3項(xiàng)制備供試品溶液，計(jì)算蒙花苷的加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 蒙花苷加樣回收率試驗(yàn)

2.9樣品測(cè)定

分別取10個(gè)批次小薊藥材和對(duì)應(yīng)的小薊炭粉末(過四號(hào)篩)，按2.3項(xiàng)制成供試品溶液。小薊藥材含量測(cè)定為取小薊藥材供試品溶液5μL，小薊炭含量測(cè)定為取小薊炭供試品溶液10μL，分別在2.1項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，記錄各色譜峰的峰面積，每個(gè)樣品重復(fù)3次。含量測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果表明小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低。

表2 小薊和小薊炭中蒙花苷的含量 /%

3 討論

蒙花苷為小薊的主要成分，為小薊的有效成分之一，其含量測(cè)定方法較多,有紫外分光光度法、薄層掃描法、高效液相法，其中以高效液相法居多，文獻(xiàn)中曾有人采用乙腈-水系統(tǒng)用HPLC法測(cè)定小薊中蒙花苷的含量[5]。本文考察了不同濃度的甲醇-水和乙腈-水系統(tǒng)，并考察了不同的酸濃度，結(jié)果表明采用甲醇-0.5%醋酸(55∶45)，蒙花苷和其他成分能達(dá)到很好的分離，并且出峰時(shí)間較早(約7min)，是一種比較經(jīng)濟(jì)省時(shí)的方法。供試品溶液的制備方法，我們考察了不同的提取溶劑和提取方式，結(jié)果表明取0.1g藥材加甲醇10mL超聲15min，能將小薊中的蒙花苷提取完全，并且操作簡(jiǎn)便易行。

小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低，為小薊藥材蒙花苷含量的十分之一到幾十分之一，說明炒炭過程對(duì)黃酮類成分有很明顯的破壞性作用，炒炭后黃酮類成分含量明顯降低。因各產(chǎn)地小薊的生長(zhǎng)環(huán)境和采收時(shí)節(jié)的差異，小薊藥材的外觀和質(zhì)地等存在著一些差別，因此導(dǎo)致炒炭后蒙花苷含量的變化程度并不一致，并且炮制火候和時(shí)間的差別等對(duì)蒙花苷含量變化程度也有很大的影響?？偟膩碚f，小薊炒炭后蒙花苷含量明顯降低。

[1] 山東省中醫(yī)藥研究所藥理組.30種中藥炒炭前后止血的研究[J].藥學(xué)通報(bào)，1965,11(12)：562.

[2] 樓之芩，秦波.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1995：711.

[3] 潘珂，尹永芹，孔令義.小薊化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006,8(4)：7-9.

[4] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄20.

[5] 劉翔.小薊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006,22(4)：263-264.

DeterminationofLinarininHerbaCirsiiandItsCarbonizedProduct

Li Lu, Luo Jianguang, Kong Lingyi

(DepartmentofNaturalMedicinalChemistry,ChinaPharmaceuticalUniversity,NanjingJiangsu210009,China)

Objective: To compare the Linarin contents of Herba Cirsii and its carbonized product.MethodsAnalyzing by Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm) column, at30℃, methanol-0.5% acetic acid (55∶45) was used as the mobile phase, and the detection wavelength and the flow rate were326nm and1.0mL·min-1, respectively.ResultsIn the concentration range of0.01～1.00μg, the calibration curve revealed a good linearity relationship (r=1.000), and the average recovery rate was98.6% with RSD=2.48% (n=6).ConclusionThe proposed method was found to be relatively simple, precise and reproducible, which provided an basis for the quality control of Herba Cirsii and its carbonized product, and the method can be used to formulate the reasonable technology of processing.

Herba Cirsii; Carbonizing, Linarin; HPLC

2010-02-25)