肖琛聞，鮑國連，韋 強(qiáng)，劉 燕，季權(quán)安

（浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州石橋路145號310021）

鴨疫里氏桿菌病是由鴨疫里氏桿菌引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。該病呈急性或慢性敗血癥過程，以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征。1-8周齡鴨敏感，惡劣環(huán)境條件可以促發(fā)感染。發(fā)病率為5%一90%，病死率高達(dá)80%，慢性耐過鴨主要表現(xiàn)神經(jīng)性癥狀，導(dǎo)致殘鴨和僵鴨。RA血清型較多，全菌疫苗存在著較大的局限性，該病的疫苗目前還沒有獲得國家批文。對于鴨傳染性漿膜炎治療現(xiàn)在多采用抗生素治療，但效果不十分理想，容易產(chǎn)生耐藥性，危害人類健康。

中藥防治疾病作為動物疫病防治手段越來越受到重視和青睞。天然藥物具有綠色，環(huán)保，無藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)。本研究室在前期已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)中藥對于防治鴨疫里氏桿菌病有較好效果。本研究將在此基礎(chǔ)上研究中藥對鴨疫里氏桿菌病的防治效果，同時對中藥的抗菌機(jī)理作一些研究。

1 材料和方法

1．1 材料

1．1．1 藥物

黃連、黃柏、甘草、白頭翁、秦皮等中藥，均購自杭州武林藥店。

1．1．2 實(shí)驗(yàn)動物

10日齡櫻桃谷非免疫鴨由浙江省桐鄉(xiāng)市某鴨場提供，出生后至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，飼喂不含抗生素的配合飼料。在本實(shí)驗(yàn)室動物房適應(yīng)飼養(yǎng)

1天后用于實(shí)驗(yàn)。

1．1．3 菌種和培養(yǎng)基

鴨疫里氏桿菌II型菌種由本實(shí)驗(yàn)室保存，馬丁瓊脂和肉湯培養(yǎng)基由本實(shí)驗(yàn)室配制。

1．2 方法

1．2．1 實(shí)驗(yàn)一

1.2.1.1 中藥方劑口服用藥

由于鴨疫里氏桿菌病的臨床癥狀呈急性或慢性敗血過程，以纖維性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎為特征。根據(jù)中醫(yī)診斷判斷其急性病程特征為熱證特征，根據(jù)中醫(yī)辨證論治方法，需以清熱涼血藥治療。結(jié)合前期本實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果，擬出2個方劑，分別是黃連漿膜湯：黃連 1g，黃柏 1g，甘草 2g；白頭翁湯：白頭翁 2g，黃連 1g，黃柏 1g，秦皮 1g。各組方用100ml水煎制，共煎制兩次，合并煎液為100m1。每羽鴨每次喝5m1藥液，喝時摻水5ml。每天早晚各一次。

1.2.1.2 試管體外抑菌法及OD值測定

另外采用水煎法制備生藥濃度為1g／ml的白頭翁湯，過0．22μm濾膜待用。取試管8支，分別加入肉湯2m1TSB肉湯，50μl細(xì)菌菌液，200μ1白頭翁原液或不同稀釋倍數(shù) (用TSB對倍稀釋)的白頭翁湯，搖床培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果，并且在OD570nm下測吸光值。

1.2.1.3 動物分組與處理

將60只鴨子隨機(jī)分為5組，每組12只。具體分組情況見下表1。

表1 動物分組與處理

1．2．1．1 人工發(fā)病治療試驗(yàn)

根據(jù)已有的試驗(yàn)結(jié)果，給各小組的小鴨注射II型RA細(xì)菌0.15ml/只，（II型RA含菌量均為 1.5×109cfu/ml，使用平板計(jì)數(shù)法）。各組鴨的臨床癥狀和死亡情況連續(xù)觀察6天。記錄鴨健康變化情況。

1．2．2 實(shí)驗(yàn)二

1．2．2．1 中藥方劑口服用藥白頭翁湯：白頭翁2g，黃連1g，黃柏1g，秦皮1g。

表2 動物分組與處理

各組方用100ml水煎制，共煎制兩次，合并煎液為100ml。每羽鴨每次喝5ml藥液，喝時摻水5ml。每天早晚各一次。

1．2．2．2 動物分組與處理

將40只鴨子隨機(jī)分為5組，每組8只。具體分組情況見下表2。

1．2．2．3 人工發(fā)病治療試驗(yàn)

根據(jù)已有的試驗(yàn)結(jié)果，給各小組的小鴨注射II型RA細(xì)菌0.15ml/只，（II型RA含菌量均為 1.5×109cfu/ml，使用平板計(jì)數(shù)法）。各組鴨的臨床癥狀和死亡情況連續(xù)觀察6天。記錄鴨健康變化情況。

2 結(jié)果

2．1 白頭翁湯體外最小抑菌濃度

白頭翁湯體外最小抑菌濃度為0.125g/ml。見圖1

2．2 中藥方劑對于鴨疫里氏桿菌病治療效果（實(shí)驗(yàn)一）

攻毒后鴨群精神萎靡、食欲減退或廢絕、縮頸嗜睡，眼瞼和鼻孔處附粘性分泌物，病死鴨剖檢呈典型傳染性漿膜炎癥狀，心臟，肝臟被膜，心包炎等癥狀。白頭翁組鴨精神較好于其他組，存活率最高。經(jīng)2d治療，白頭翁組病情得到控制，經(jīng)卡方統(tǒng)計(jì)表明，白頭翁組與對照組比，差異顯著（P＜0.01）。

表3 中藥方劑對于鴨疫里氏桿菌病治療效果（一）

2．3白頭翁湯對于鴨疫里氏桿菌病治療效果 （實(shí)驗(yàn)二）

攻毒后鴨群精神萎靡、食欲減退或廢絕、縮頸嗜睡，眼瞼和鼻孔處附粘性分泌物，病死鴨剖檢呈典型傳染性漿膜炎癥狀，心臟、肝臟被膜，心包炎等癥狀。白頭翁組鴨精神較好于其他組，存活率最高。經(jīng)2d治療，白頭翁湯3組與對照組對比，差異顯著（P＜0.01）。

表4 中藥方劑對于鴨疫里氏桿菌病治療效果（二）

3 討論

隨著規(guī)模養(yǎng)鴨業(yè)的不斷擴(kuò)大和區(qū)域養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)成片爆發(fā)鴨病時有發(fā)生。浙江省近年爆發(fā)的鴨疫里氏桿菌病主要以Ⅰ型和Ⅱ型居多，其中又以Ⅱ型更為急性?？股刂委熾m然短期可以治愈該病，但長期使用會造成耐藥菌株的出現(xiàn)，反而使疫病更難控制，另外抗生素治療會造成鴨體內(nèi)大量抗生素殘留進(jìn)而危害人類健康。因此迫切需要一種環(huán)保綠色的方法控制該病。

中藥治療一些動物疫病已有成功案例[1-3]。本研究中使用黃連漿膜湯以及白頭翁湯進(jìn)行對于鴨疫里氏桿菌II型病的治療研究。發(fā)現(xiàn)白頭翁湯連用2天可以提高鴨群較好的抵抗RAII型攻擊。

方中黃連、黃柏對大腸桿菌、金葡菌、鏈球菌、肺炎球菌等皆有較強(qiáng)的抗菌作用[4]。白頭翁鮮汁、煎劑及乙醇提取物，體外實(shí)驗(yàn)對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、痢疾桿菌、枯草桿菌、傷寒桿菌、沙門氏桿菌等都有明顯抑制作用[5]。曹景花等[6]研究發(fā)現(xiàn)，100%白頭翁水浸出液濾紙片對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、炭疽桿菌、傷寒桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌等均有明顯抑菌作用。白頭翁及其復(fù)方對皮膚真菌、酵母菌、錐蟲、白色念珠菌等均有抑制作用；白頭翁素還具有很強(qiáng)的殺真菌作用[7]。此外，白頭翁對小白鼠流感病毒有輕微抑制作用[7]。本研究中的白頭翁湯可以使患病鴨群死亡率降低至50%。治療效果顯著，可以為鴨疫里氏桿菌病的防治提供一種新的治療手段。

[1]姚林宇.中藥治療鴨病毒性肝炎[J].畜牧與獸醫(yī)，2004，6：45.

[2]陳功義，何志生.自擬清瘟解毒飲治療鴨病毒性肝炎[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2005，（04）：19.

[3]季權(quán)安，韋強(qiáng)，鮑國連，張先福，蔡翼虎，俞堅(jiān)群，俞乾挺.中藥防治野鴨大腸桿菌病的臨床效果試驗(yàn)[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2007，（02）：5-6.

[4]魯華柏，陳坤.中藥治療鴨出敗[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2004，5：38.

[5]韓進(jìn)庭.白頭翁的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，14（23）：2123-2124.

[6]曹景花，李玉蘭，邱世翠.白頭翁的體外抑菌作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2003，14（9）：528.

[7]王本祥.新編中藥學(xué)辭典[M].天津：科學(xué)技術(shù)出版社，1996，p361.