石建朋，賈宗菲，龐全海，韓一超

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷 030801）

1 引言

奶牛酮病是奶牛養(yǎng)殖業(yè)中常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)代謝病，是由于碳水化合物和揮發(fā)性脂肪酸的代謝紊亂而引起的一種群發(fā)性疾病[1、2]。奶牛酮病多發(fā)生在產(chǎn)后60d內(nèi)，發(fā)病高峰在產(chǎn)后10—30d，高產(chǎn)奶牛（年達(dá)8000kg以上）更易發(fā)病[4、5]。不僅如此，酮病奶牛還會(huì)增加乳房炎、子宮內(nèi)膜炎以及真胃變位發(fā)病的幾率，對(duì)奶牛的繁殖性能產(chǎn)生不良影響，造成更多的隱性損失[6、7、8]。因此，預(yù)防酮病，盡早發(fā)現(xiàn)和及時(shí)治療酮病顯得尤為重要，而作為臨床酮病潛伏期的亞臨床酮病的檢測(cè)則是重中之重。

目前對(duì)奶牛酮病治療方法多樣，不論治療奶牛消化型酮病還是神經(jīng)型酮病，有單用中藥療法治療的，也有單用西藥療法治療的，而王軍等[9]通過(guò)多年臨床治療實(shí)踐認(rèn)為中西醫(yī)結(jié)合治療奶牛酮病病程縮短，療效明顯。可大大減少奶牛酮病給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)以中西藥結(jié)合治療患酮病奶牛，進(jìn)一步提供了臨床實(shí)踐中的預(yù)防和治療的價(jià)值。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

山西晉南某奶牛場(chǎng)，以BHBA＞1.0mmolL-1為正常奶牛和亞臨床酮病奶牛的判定標(biāo)準(zhǔn)，選擇大于此值的24頭奶牛，平均分成4組，每組6頭，第一組給予西藥治療，第二組給予中藥治療，第三組給予中西藥治療，第四組不做處理，為空白組，另選小于此值的6頭正常奶牛為陽(yáng)性對(duì)照組。所選30頭奶牛均為產(chǎn)后60d內(nèi)，胎次為2-6胎，年產(chǎn)量為7500-8500kg。

2.2 試驗(yàn)器材與試劑

756型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華技術(shù)有限公司）、LD4—2型低速離心機(jī)（上海青浦瀘西儀器廠）、電器恒溫水浴鍋（上海一恒技術(shù)有限公司）；

β-羥丁酸檢測(cè)試劑盒、游離脂肪酸檢測(cè)試劑盒，購(gòu)置于上海滬尚生物科有限公司；

葡萄糖試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒，購(gòu)置于南京建成生物工程研究所；

亞硝基鐵氰化鈉、無(wú)水碳酸鈉、硫酸鈉、高錳酸鉀、四水合鉬酸銨、三氯乙酸、七水合硫酸亞鐵、冰乙酸、鄰甲苯胺、聚乙烯吡咯烷酮、8-羥基喹啉、濃鹽酸、濃硫酸、磷酸二氫鉀、甲基麝香草酚藍(lán)、葡萄糖、硼酸、二乙胺，以上均為分析純，購(gòu)置于北京化工廠；

當(dāng)歸、黨參、蒼術(shù)、神曲、熟地、砂仁、廣藿香、川芎、炙甘草、茯苓、山楂、陳皮、厚樸、黃芪、益母草、購(gòu)置于太谷廣譽(yù)遠(yuǎn)中藥廠；

葡萄糖、氯化鈣、地塞米松注射液、安鈉咖、硫酸鎂、葡萄糖、5%碳酸氫鈉等購(gòu)置于寧波長(zhǎng)富藥業(yè)有限公司

2.3 采樣及測(cè)定方法

分別于用藥前 1d、用藥后 1d、2d、3d、4d、5d 停藥后第 3d（8d），采集實(shí)驗(yàn)牛血樣。準(zhǔn)備好30支消毒好的50mL離心管，早晨清潔工趕牛之前進(jìn)入牛棚，當(dāng)牛開(kāi)始采食前，使用輸液針頭采血管于頸靜脈采集血樣，平放于試管架上，采集的血液于37℃溫箱中靜置三小時(shí)后，于2000r/min離心10min，分離出的血清移入2mL的離心管中，置于-20℃冰箱中保存待檢。

檢測(cè)指標(biāo)包括：血清β-羥丁酸的測(cè)定（酶聯(lián)免疫法）；血清葡萄糖的測(cè)定（葡萄糖氧化酶法）；血清游離脂肪酸的測(cè)定（一次提取比色法）；血清總鈣含量的測(cè)定（甲基麝香草酚藍(lán)比色法）；血清谷草轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定（賴氏法）；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定（賴氏法）。

2.4 數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)

樣本間差異采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，對(duì)結(jié)果進(jìn)行因果方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用平均數(shù)（X±SD）標(biāo)準(zhǔn)差表示。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同組治療對(duì)奶牛β-羥丁酸含量的影響

表1 不同處理對(duì)β-羥丁酸的影響

由表1可知，在測(cè)得機(jī)體β-羥丁酸時(shí)，各組在用藥前1d、用藥后第1d以及第2d、3d測(cè)量值無(wú)顯著性差異（P＞0.05），直到在用藥后第3d治療組與正常組才有了顯著性差異（P＜0.05），在用藥第5d時(shí)，中西醫(yī)組與正常組無(wú)顯著差異（P＞0.05），與西醫(yī)組、中醫(yī)組有顯著性差異（P＜0.05）與空白組差異顯著（P＞0.01），在停藥后第3d，中西醫(yī)組與正常組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），西醫(yī)組、中醫(yī)組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），與空白組差異極顯著（P＜0.01）。

由圖1可知，各治療組在用藥期間隨著用藥天數(shù)的增加，在用藥第4d變化比較明顯，在用藥第5d用藥組與正常組之間差異減小，在停藥后3d，用藥組與正常組沒(méi)有明顯的差異。

圖1不同處理對(duì)β-羥丁酸的影響

3.2 不同組治療對(duì)奶牛血清GLU濃度的影響

由表2可知，GLU濃度在用藥前1d、用藥第1d和2d西醫(yī)組、中西組和中西醫(yī)組極顯著高于正常組（P＜0.01），在用藥后第3d中醫(yī)組和西醫(yī)組顯著高于正常組（P＜0.05），中西醫(yī)組與正常組差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明中西醫(yī)結(jié)合對(duì)奶牛酮病有一定的療效。在用藥后第4d和第5d中西醫(yī)組與正常組差異不顯著（P＞0.05），而與空白組差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明中西醫(yī)治療第4d以后產(chǎn)生了效果。在用藥后第3d，所有的用藥組與正常組差異均不顯著（P＞0.05），與空白組差異均極顯著（P＜0.01），說(shuō)明此時(shí)各用藥組均已產(chǎn)生明顯的治療效果。

表2 不同處理對(duì)葡萄糖的影響

注：同一行標(biāo)有不同小寫字母角標(biāo)的表示差異顯著（P＜0.05），標(biāo)有相同小寫字母角標(biāo)的表示差異不顯著（P＞0.05），標(biāo)有大、小寫字母角標(biāo)的表示差異極顯著（P＜0.01），以下各表均相同。

由圖2可知，不同的藥物、相同的時(shí)間間隔作用下檢查葡萄糖的結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析；中西醫(yī)組與中醫(yī)組、西醫(yī)組無(wú)差異顯著（P＞0.05）、與正常組差異顯著（P＜0.05）、與空白組差異極顯著（P＜0.01）

圖2不同處理對(duì)葡萄糖的影響

3.3 不同組治療對(duì)奶牛血清游離脂肪酸含量的影響

由表3可知，在測(cè)得機(jī)體游離脂肪酸時(shí)，各組在用藥前1d、用藥后第1d以及第2d、3d、4d測(cè)量值差異極顯著性（P＜0.01），直到在用藥后第5d治療組與正常組才有了顯著性差異（P＜0.05），并且各治療組之間差異不顯著（P＞0.05），在停藥后3d，正常組與中西醫(yī)組、中醫(yī)組無(wú)顯著性差異（P＞0.05），與西醫(yī)組有顯著性差異（P＜0.05）。

表3 不同處理對(duì)游離脂肪酸的影響

由圖3可知，不同的藥物、相同的時(shí)間間隔作用下檢查游離脂肪酸的結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析：中西醫(yī)組與中醫(yī)組及西醫(yī)組隨著藥物的實(shí)施，血液中的游離脂肪酸的含量也隨著減少，等到停藥時(shí)治療組接近于正常值，而空白組存在著不斷的變化，可能是機(jī)體在代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程中做斗爭(zhēng)。

圖3不同處理對(duì)游離脂肪酸的影響

3.4 不同組治療對(duì)奶牛血清總鈣濃度的影響

由表4可知，血清總Ca濃度在用藥前1d、用藥第1d、第2d和第3d西醫(yī)組、中醫(yī)組和中西醫(yī)組極顯著高于正常組（P＜0.01），而與空白組差異不顯著（P＞0.05）；在用藥后第4d中西醫(yī)組與正常組差異不顯著（P＞0.05），而與空白組差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明中西醫(yī)治療第4d以后產(chǎn)生效果，在用藥后第5d和第8d所有的用藥組與正常組差異均不顯著（P＞0.05），與空白組差異均極顯著（P＜0.01），說(shuō)明此時(shí)各用藥組均已產(chǎn)生明顯的治療效果。

表4 中醫(yī)、西醫(yī)、中西醫(yī)對(duì)血鈣的治療對(duì)比

由圖4可知，中醫(yī)組、西醫(yī)組、中西醫(yī)組在用藥后的第2d的治療效果要比其它幾天的幅度高，而停藥后第3d，各治療組治療以后測(cè)得數(shù)值都接近于正常。

圖4不同處理對(duì)血鈣濃度的影響

3.5 不同組治療對(duì)奶牛GOT活力的影響

由表5可知，血清GOT活力在用藥前1d到用藥后第4d西醫(yī)組、中醫(yī)組和中西醫(yī)組極顯著高于正常組（P＜0.01），而與空白組差異不顯著（P＞0.05）；在用藥后第5d中西醫(yī)組與正常組差異顯著（P＜0.05），而與空白組差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明中西醫(yī)治療第5d開(kāi)始產(chǎn)生效果；在停藥后第3d中西醫(yī)組與正常組差異不顯著（P＞0.05），與空白組差異顯著（P＜0.01）說(shuō)明停藥后第3d中西醫(yī)組產(chǎn)生明顯的治療效果，但西醫(yī)組和中醫(yī)組與正常組差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明西醫(yī)和中醫(yī)治療產(chǎn)生顯著效果。

表5 中醫(yī)、西醫(yī)、中西醫(yī)對(duì)GOT的治療對(duì)比

圖5不同處理對(duì)GOT的影響

由圖5可知，各藥組隨著用藥的天數(shù)，血液中GOT的活力逐漸降低，在用藥第4d時(shí)，血液中的GOT的測(cè)量值有明顯的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。

3.6 不同組治療對(duì)奶牛GPT活力的影響

由表6可知，測(cè)得機(jī)體GPT時(shí)，各組在用藥前1d、用藥后第1d以及第2d、3d測(cè)量值無(wú)顯著性差異（P＞0.05）直到在用藥后第4d治療組與中西組有了顯著性差異（P＜0.05），中醫(yī)組與西醫(yī)組差異不顯著（P＞0.05），在用藥第5d時(shí)，正常組與各治療組無(wú)差異性顯著（P＞0.05），在停藥第3d時(shí)，正常組與中西組、西醫(yī)組無(wú)差異性顯著（P＞0.05），與中醫(yī)組差異顯著（P＜0.05）。

表6中醫(yī)、西醫(yī)、中西醫(yī)對(duì)GPT的治療對(duì)比

由圖6可知，各用藥組隨著用藥的天數(shù)，血液中GPT逐漸降低，在用第5d時(shí)，血液中的GPT的測(cè)量值有明顯的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。

圖6不同處理對(duì)谷草轉(zhuǎn)氨酶（GPT）的影響

4 討論

4.1 不同組藥方對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)膛＆?羥丁酸濃度變化的影響

本試驗(yàn)以β-羥丁酸含量在1.0mmol.L-1以上的奶牛為隱性酮病試驗(yàn)?zāi)膛＃⒁驭?羥丁酸含量變化作為衡量酮病病情的標(biāo)準(zhǔn)之一。通過(guò)BHBA的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中西藥結(jié)合可以顯著降低亞臨床酮病奶血液中BHBA的濃度，表明該中西藥組方對(duì)奶牛酮病有一定的防治的效果。由表1和圖1可知，治療組在用藥以后，測(cè)定β-羥丁酸時(shí)濃度明顯降低。其中，中西醫(yī)組在用藥第5d與正常組無(wú)顯著性差異，在停藥后第3d中西組測(cè)得的小值小于1.0mmol.L-1趨于正常水平，而中西醫(yī)組測(cè)的值接近于1.0mmol.L-1，正處于臨界值狀態(tài)，說(shuō)明中藥治療的慢，西醫(yī)組大于1.0mmol.L-1說(shuō)明西醫(yī)組對(duì)臨床酮病的防治并沒(méi)有起到更有效的作用，有關(guān)該西藥組方抗酮的具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。馬洪武[4]通過(guò)研究證明中西醫(yī)結(jié)合可以大大的縮短病程，療效明顯使病畜康復(fù)較快。張富林[10]也通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明了中西醫(yī)結(jié)合對(duì)牛酮病有極明顯的治療效果，本研究發(fā)現(xiàn)，中西醫(yī)結(jié)合藥方較單獨(dú)運(yùn)用中藥或西藥有明顯的治療效果，并且治療β-羥丁酸縮短到5d。

4.2 不同組藥方對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)膛Ｑ菨舛茸兓挠绊?/p>

本試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)血糖濃度的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中西藥結(jié)合可以顯著升高亞臨床酮病奶牛血液中GLU的濃度，表明該中西藥組方對(duì)奶牛酮病有一定的防治效果。由表2和圖2可知，治療組在用藥以后，測(cè)定血糖濃度時(shí)濃度明顯升高，并且三個(gè)治療組與正常組沒(méi)有顯著性差異，這可能是由于健康奶牛血糖的調(diào)節(jié)功能良好，使血糖始終維持在一個(gè)平衡的狀態(tài)，因此很難檢測(cè)到藥物對(duì)健康牛的影響作用。其可能的機(jī)制為補(bǔ)充了生糖先質(zhì)，并在奶牛體內(nèi)通過(guò)各種生化途徑轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟牵a(bǔ)充機(jī)體對(duì)糖的需要。及時(shí)緩解能量負(fù)平衡。此外，在西藥與中西藥的配方中，高錳酸鉀可以通過(guò)其殺菌作用，可能影響瘤胃纖毛蟲數(shù)量及其活性從而對(duì)碳水化合物代謝起到一定影響[11]。其中的錳成分也可能通過(guò)對(duì)胰島素的調(diào)節(jié)對(duì)糖代謝產(chǎn)生影響[12]。本試驗(yàn)中，用中西藥治療，機(jī)體內(nèi)的葡萄糖在第3d提高到正常值范圍。

4.3 不同組藥方對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ}濃度變化的影響

鈣是動(dòng)物是體內(nèi)最重要的礦物質(zhì)元素，在泌乳早期，幾乎所有的奶牛都處于鈣的負(fù)平衡狀態(tài)[13]。Ramberg曾報(bào)道奶牛在泌乳頭10d最容易發(fā)生鈣的負(fù)平衡[14]。在此期間，一些奶牛會(huì)出現(xiàn)癥狀不明的低鈣血癥，隨著采食量及鈣進(jìn)食量的增加，大多數(shù)奶牛在泌乳6—8w左右的時(shí)間，進(jìn)入鈣的正平衡[13]。鈣的參考范圍2.05—2.50mmol.L-1

本試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)血鈣濃度的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中西藥結(jié)合可以顯著升高亞臨床酮病奶牛血液中血鈣的濃度，表明該中西藥組方、中醫(yī)組、西醫(yī)組對(duì)奶牛酮病有一定的防治效果。由表3和圖3可知，治療組在用藥以后，測(cè)定血鈣濃度明顯升高，并且3個(gè)治療組與正常組沒(méi)有顯著性差異，試驗(yàn)期間血鈣水平變化幅度不大，本研究發(fā)現(xiàn)，中西醫(yī)組在用藥第4d與正常組沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明治療已達(dá)到正常效果，而中醫(yī)組和西醫(yī)組都在用藥后第5d達(dá)到正常效果。以上各試驗(yàn)組血鈣的變化結(jié)果表明各組藥方對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ}水平均有顯著的影響。但中西醫(yī)結(jié)合組比其它兩組影響速度明顯，并且在第4d把機(jī)體內(nèi)的血鈣濃度提供到正常值范圍內(nèi)。

4.4 不同組藥方對(duì)試驗(yàn)牛游離脂肪酸變化的影響

NEFA與奶牛的能量平衡狀況密切關(guān)，有人認(rèn)為[16]，NEFA與能量平衡狀況為負(fù)相關(guān)，血中NEFA濃度可作為牛體能量平衡狀況的指標(biāo)。

本試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)游離脂肪酸濃度的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中西藥結(jié)合可以顯著降低亞臨床酮病奶牛血液中游脂肪酸的濃度，表明該中西藥組方、中醫(yī)組、西醫(yī)組對(duì)奶牛酮病有一定的防治效果。由表4圖4可知，試驗(yàn)前，各組血漿游脂肪酸含量與正常組差異均顯著，但到試驗(yàn)后，各治療組游離脂肪含量呈下降趨勢(shì)，在停藥后3d，中西醫(yī)組、中醫(yī)組與正常組沒(méi)有顯著性差異，趨于正常組，西醫(yī)組與正常組有顯著性差異，說(shuō)明西醫(yī)對(duì)臨床酮病的防治并沒(méi)有起到有效的作用，有關(guān)該西藥組方抗酮病的具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。通過(guò)對(duì)比說(shuō)明，本研究發(fā)現(xiàn)，中西醫(yī)結(jié)合藥方較單獨(dú)運(yùn)用中藥或西藥有明顯的治療效果，但是游離脂肪酸是在停藥后3d恢復(fù)到正常值范圍，機(jī)理尚待探索。

4.5 不同組藥方對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ獫{GOTGPT活性變化影響

動(dòng)物體內(nèi)有大量的生糖氨基酸，這些生糖氮基酸在GOT和GPT的作用下，使其發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)。生成的a-酮酸通過(guò)檸檬酸循環(huán)生成葡萄糖[12]，從而緩解了動(dòng)物的低血糖。GOT和GPT的主要存在于細(xì)胞中，在肝臟中的活性最高，而在血清中的活性很胝。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，可有大量的GOT和GPT進(jìn)入血液,從而導(dǎo)致血清中的GOT和GPT含量升高。因此可根據(jù)血清中GOT和GPT變化判斷肝臟功能狀況。在SevincM等[16]的研究中卻發(fā)現(xiàn)，亞臨床酮病奶牛血清蛋白含量要比正常奶牛高，而血清AST和ALT含量卻比正常牛低。

本試驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)GOT和GPT活力的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)中西藥結(jié)合可以降低亞臨床酮病奶牛血液中GOT的活力，表明該中西藥組方對(duì)奶牛酮病有一定的防治效果。由表5、表6和圖5、圖6可知，治療組在用藥以后，測(cè)定GOT、GPT的活力明顯降低。其中，在測(cè)GOT的活力的實(shí)驗(yàn)時(shí)，中西醫(yī)組在停藥后第3d與正常組沒(méi)有顯著性差異，與中醫(yī)組、西醫(yī)組有顯著性差異，在測(cè)GPT的活力的實(shí)驗(yàn)時(shí)，中西醫(yī)組與西醫(yī)組、正常組無(wú)顯著性差異，與中藥組有顯著性差異。通過(guò)對(duì)比說(shuō)明，本研究發(fā)現(xiàn)，在測(cè)量GOT時(shí)，中西醫(yī)結(jié)合在停藥后第3d產(chǎn)生效果，中醫(yī)組、西醫(yī)組在停藥后第3d與正常組有顯著性差異，有關(guān)該中藥組、西藥組方降低GOT和GPT活力具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

5.1 奶牛發(fā)生亞臨床酮病時(shí)，中藥治療β-羥丁酸、游離脂肪酸的復(fù)發(fā)率比西藥治療的要低，而西藥的葡萄糖和血清Ca2+濃度比中醫(yī)的快。

5.2 在本實(shí)驗(yàn)中，中西藥是治療亞臨床酮病較佳的藥方，最佳給藥天數(shù)是5d。

5.3 高錳酸鉀和煙酸等西藥成分能夠調(diào)節(jié)瘤胃微生物的發(fā)酵，改變游離脂肪酸的含量及其組成比例，一定濃度的高錳酸鉀起健胃的作用，幫助微生物分解飼料以及草料，煙酸參與酮體及游離脂肪酸的代謝調(diào)節(jié)。

5.4 本實(shí)驗(yàn)證明：中藥成分可顯著升高血糖濃度，降低血酮。但對(duì)血清Ca2+濃度沒(méi)有明顯的變化。

5.5 在治療奶牛亞臨床酮病時(shí)，血清中的β-羥丁酸可以作為檢測(cè)指標(biāo)，血清中的葡萄糖、非酯化脂肪酸、Ca2+等的含量以及GOT、GPT活力的檢測(cè)結(jié)果均可作為參考。

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