首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院（100050） 鐘萌

北京市海淀區(qū)藥品檢驗所（100083） 李東輝 楊帆

丹參是唇形科植物丹參的根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通絡(luò)、清心除煩的功效。丹參的有效成分包括脂溶性成分（二萜醌類）和水溶性成分（酚酸類），均具有一定的生理活性。由于受產(chǎn)地、品種、氣候和生態(tài)環(huán)境及炮制方法等的影響，不同丹參飲片所含主要活性成分差異較大，《中華人民共和國藥典》丹參項下脂溶性成分以丹參酮ⅡA作為質(zhì)控指標(biāo)[1]。近年來的研究表明，丹參脂溶性成分還包括隱丹參酮、丹參酮Ⅰ等，且含量較高，活性較強[2] [3]。

筆者收集了河北、山東、江蘇、河南和安徽等主產(chǎn)地的丹參飲片，包括不同栽培方法的丹參飲片，用反相高效液相色譜法對其進行了隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量測定和比較，為丹參飲片的選優(yōu)及臨床用藥提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-2010高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-20A紫外可見檢測器，CLASS-VP色譜工作站。KQ118超聲波清洗器，BP211 1/10萬電子分析天平。隱丹參酮（中國藥品生物制品檢定所，批號110852-200305，供含量測定用）；丹參酮Ⅰ（中國藥品生物制品檢定所，批號0867-200205，供含量測定用）；丹參酮ⅡA（中國藥品生物制品檢定所，批號110766-200417，供含量測定用）；丹參飲片（購于不同飲片廠，1、2號:河北；3、4號：山東；5、6號:江蘇；7、8號：河南；9、10號：安徽；丹參飲片均經(jīng)北京市海淀區(qū)藥品檢驗所韓杰副主任中藥師鑒定）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 色譜柱：kromasilTMC18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相甲醇-水（75：25），流速1ml·min-1，檢測波長270nm，柱溫30℃，進樣量10μl[4][5]。在該色譜條件下，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的保留時間分別為15.9min、17.3min和27.4min。

隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA與樣品中其他組分分離良好，理論板數(shù)按隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA對照品峰計均大于5000。缺隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA陰性對照無干擾（結(jié)果見附圖1，附圖2）。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA對照品適量，加甲醇制成每毫升含隱丹參酮85μg、丹參酮Ⅰ102μg和丹參酮ⅡA107μg的混合溶液，然后至棕色瓶中，作為對照品儲備溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品（丹參藥材和飲片）粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率200W，頻率40kHz），超聲提取10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[2]。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA混合對照品溶液2、4、6、8、10、12μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以對照品的進樣量X（μg）對峰面積的積分值Y進行線性回歸。

隱丹參酮：Y＝5.2×105X+1.8×105，線性范圍：1.45～10.19μg，R＝0.9998；丹參酮Ⅰ：Y＝5.3×105X-2.7×105，線性范圍為2.16～15.12μg，R＝0.9996；丹參酮ⅡA：Y＝5.7×105X+1.0×105，線性范圍為3.15～22.06μg，R＝0.9997。

2.5 精密度試驗 取隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA混合對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，結(jié)果隱丹參酮的RSD為0.98%，丹參酮Ⅰ的RSD為1.08%，丹參酮ⅡA的RSD為0.86%，精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性實驗 取同一供試品，按2.3項下操作制備供試品溶液6份，按2.1項下色譜條件測定，結(jié)果隱丹參酮的RSD為1.13%，丹參酮Ⅰ的RSD為0.95%，丹參酮ⅡA的RSD為1.25%，重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，室溫放置，分別在0、1、2、4、8、12、24 h進樣，按2.1項下色譜條件測定，結(jié)果隱丹參酮的RSD為1.05%，丹參酮Ⅰ的RSD為0.85%，丹參酮ⅡA的RSD為1.15%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗 取已知隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量的供試品（批號6174241）0.5g，6份，各加入一定量的隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA對照品。

按2.1項下色譜條件測定，計算隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA回收率分別為99.12%、98.96%、99.23%，RSD分別為1.21%、0.98%、1.05%。

2.9 樣品測定 取不同產(chǎn)地的丹參飲片，按2.3項下操作制備供試品溶液，按2.1項下測定，結(jié)果見附表。

3 討論

3.1 系統(tǒng)適用性試驗 本試驗曾參考中國藥典2005年版一部丹參藥材[2]項下含量測定方法，發(fā)現(xiàn)供試品色譜不僅有丹參酮ⅡA色譜峰，而且還有隱丹參酮、丹參酮Ⅰ色譜峰，通過查閱文獻[2]，確立了本試驗的方法。

3.2 供試品溶液制備方法 供試品超聲提取時間的考察，以甲醇為提取溶劑，實驗結(jié)果表明，超聲提取40分鐘，隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA的含量已基本保持不變，故確定超聲提取時間為40分鐘。

3.3 不同產(chǎn)地丹參飲片的隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA含量差別較大，山東的野生丹參飲片含量最高，安徽的栽培丹參飲片含量最低，而同一地區(qū)中野生品的含量普遍高于栽培品。這與丹參飲片的產(chǎn)地與加工方法有關(guān)，所以應(yīng)對丹參藥材的產(chǎn)地加以分類，同時飲片的加工方法應(yīng)規(guī)范統(tǒng)一。

附表 不同產(chǎn)地丹參飲片中的隱丹參酮、丹參酮Ⅰ和丹參酮ⅡA（n=3）