姜濤，孫晶晶

（吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033）

RP-HPLC測定鹿尾鞭酒中淫羊藿苷的含量

姜濤*，孫晶晶

（吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033）

目的：建立鹿尾鞭酒中淫羊藿苷的含量測定方法。方法：使用RP-HPLC對該制劑中淫羊藿苷進行含量測定，色譜柱：Agilent HC-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相：乙腈-水（23∶77），流速：1.0 mL·min－1，檢測波長：270 nm。結(jié)果：淫羊藿苷進樣量在0.177 12～0.619 92μg線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均回收率為96.62%，RSD＝1.39%（n＝6）。結(jié)論：本方法可有效控制鹿尾鞭酒質(zhì)量。

鹿尾鞭酒；淫羊藿苷；反相高效液相色譜法

鹿尾鞭酒是由中藥鹿尾、驢腎、狗腎、人參、熟地黃、淫羊藿、鹿茸、鎖陽、肉蓯蓉、補骨脂（鹽制）、當(dāng)歸、菟絲子、甘草經(jīng)現(xiàn)代工藝加工制成的中藥復(fù)方制劑。本品收載于 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第13冊，具有補腎壯陽，用于腎虛體弱，腰膝無力等癥［1］。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無定性、定量檢測方法，為了更好地控制藥品質(zhì)量，促進合理用藥，對鹿尾鞭酒中有效成分的質(zhì)量控制方法進行提高成為一項比較迫切的工作。淫羊藿為歷代常用的補益中藥，已有研究表明淫羊藿苷具有抗氧化、抗衰老、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗菌抗病毒、預(yù)防心腦血管疾病等多種生理功能［2］，是鹿尾鞭酒中淫羊藿的有效成分，可作為定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本實驗采用RPHPLC對淫羊藿苷進行含量測定，為該制劑質(zhì)量控制提供一種簡便、準(zhǔn)確的方法。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT高效液相色譜儀；AE-163電子天平（瑞士梅特勒）；島津UV-2201紫外-可見分光光度計；淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0737-200111，供含量測定用）。乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。鹿尾鞭酒（遼源譽隆亞東藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號050702，061201，061202）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-水（23∶77）；流速：0.8 mL·min－1；柱溫：35℃；檢測波長：270 nm；理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算，應(yīng)不低于5 000。

2.2 對照品溶液的制備

取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.045 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品25 mL，水浴濃縮至約5 mL，置D101大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，長12 cm）上，以1.5mL·min－1的流速，用水100 mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇洗脫，棄去初洗脫液5～8 mL，收集洗脫液100mL，蒸干，用70%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 陰性對照試驗

為進一步考察實驗設(shè)計的合理性，取不含淫羊藿的陰性對照樣品適量，依上述色譜條件測定，結(jié)果，在所得色譜圖中在與淫羊藿苷峰相應(yīng)的保留時間附近無干擾峰檢出，說明本法是合理可行的，見圖1。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.044 28 mg的溶液，分別精密吸取4，6，8，10，12，14μL，注入液相色譜儀，測定，以對照品的進樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積值為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y＝2 661 214X－828 2，r＝0.999 9。結(jié)果表明，淫羊藿苷進樣量在0.177 12～0.619 92μg有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣6次，測定其色譜峰面積值，RSD＝0.2%，結(jié)果表明所用儀器具良好的精密性。

圖1 鹿尾鞭酒對照品及供試品HPLC圖

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，在0，2，4，8，16，24 h按含量測定下色譜條件測定，RSD＝0.8%，結(jié)果表明24 h內(nèi)供試品溶液中淫羊藿苷的含量基本穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗

取同一供試品（批號050702），依含量測定方法獨立測定6次，計算供試品中淫羊藿苷的平均含量為0.016 9 mg·mL－1，RSD＝1.2%。結(jié)果表明，該方法重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取同法測定已知含量的供試品（批號050702，含量為0.016 9 mg·mL－1）6份，精密加入淫羊藿苷對照品溶液（0.073 8 mg·mL－1）2.5 mL，依法測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收率

2.10 樣品含量測定

取鹿尾鞭酒供試品050702，061201，061202 3批，按2.3方法制備后分別進樣，結(jié)果分別為0.017 4，0.012 2，0.012 0 mg·mL－1（n＝2）。

3 討論

3.1 耐用性試驗考察

采用Agilent HC-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）、Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5μm）、Agela C18（4.6 mm×250 mm，5μm）3根不同品牌色譜柱進行試驗，并參考 《中國藥典》2010年版一部 “淫羊藿”含量測定項下要求，確定本品理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于5 000。

3.2 測定波長的選擇

取淫羊藿苷對照品甲醇溶液，置島津UV-2201紫外-可見分光光度計上，在波長范圍200～320 nm測定，結(jié)果其最大吸收波長為270 nm，與 《中國藥典》2010年版一部淫羊藿項下的檢測波長相符。故選擇270 nm為測定波長。

3.3 流動相選擇

本品為酒劑，藥味組分多，成分復(fù)雜，相互干擾較多。曾參考 《中國藥典》淫羊藿藥材中淫羊藿苷的含量測定方法及其他文獻中淫羊藿苷的含量測定方法，均采用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量［3-5］，選用乙腈-水（30∶70）為流動相，分離效果不理想，調(diào)整比例為23∶77后，分離完全，故選擇乙腈-水（23∶77）為流動相。

3.4 層析條件的考察

D101大孔吸附樹脂柱層析條件的考察，是為了除去制劑中糖等水溶性雜質(zhì)。實驗將上樣后的水洗脫液蒸干，以甲醇定容至10 mL量瓶中，測定其色譜圖，結(jié)果無淫羊藿苷峰，表明該洗脫過程中，測定組分基本無損失，同時比較了收集70%乙醇洗脫液100，120 mL淫羊藿苷的量，結(jié)果100 mL和120 mL基本相同，故選擇了100 mL為本法的收集量。

本實驗為鹿尾鞭酒中淫羊藿苷的含量測定提供方法學(xué)依據(jù)，建立的方法科學(xué)可行，具有很好的重現(xiàn)性，為鹿尾鞭酒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供了科學(xué)依據(jù)。

［1］衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第13冊）［S］.1997：189.

［2］馬金秋，馬向前，張曉宇.淫羊藿黃酮抗運動性疲勞作用機制研究［J］.中國新藥雜志，2009，18（6）：553-559.

［3］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：306-308.

［4］王蕊，張峰，李長富，等.HPLC測定前列舒樂膠囊中淫羊藿苷的含量 ［J］.中國現(xiàn)代中藥，2006，8（4）：14-16.

［5］陳剛，彭艷，陳熙佳.高效液相色譜法測定男寶膠囊中淫羊藿苷含量 ［J］.中國藥業(yè)，2009，18（1）：13-14.

Determination of Icariin in Luweibian Wine by RP-HPLC

Jiang Tao，Sun Jingjing
（Jilin institute for food and drug control，Changchun Jilin130033，China）

Objective：To establish a determination method of Icariin in Luweibian wine.Methods：The Icariin was determined by RP-HPLC.Themobile phase was acetonitrile and water，the flow rate was1.0mL·min－1，the UV detection wavelength was at270 nm；Results：The linearity was obtained over the range of0.177 12～0.619 92μg（r＝0.999 9）for Icariin.The average recovery was 96.62%，RSD was 1.39% （n＝6）.Conclusion：The method can be used for the quality control of Luweibian wine.

Luweibian wine；Icariin；RP-HPLC

*姜濤，E-mail：tnt＿tao＠sina.com

2010-04-19）