高紅英，李國(guó)玉，2，王航宇，2，王金輝，2，3*

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832002；3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽的結(jié)構(gòu)確證研究△

高紅英1，李國(guó)玉1，2，王航宇1，2，王金輝1，2，3*

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 832002；3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

目的：對(duì)合成的新化合物丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，確定復(fù)鹽的組成。方法：采用薄層色譜分析、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振波譜、熱分析技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。結(jié)果：丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽分子中含一分子丹參酚酸B和一分子苦參堿。結(jié)論：該研究為丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽進(jìn)一步應(yīng)用于臨床研究提供理論依據(jù)。

丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽；熱分析；結(jié)構(gòu)確證

丹參為唇形科多年生草本植物丹參Salvia miltiorrhizaBge.的根［1］，全國(guó)大部分地區(qū)均有生產(chǎn)，主產(chǎn)于河北、安徽、江蘇、四川等地。其臨床應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)研究用藥的形式多種多樣，是中藥配方中應(yīng)用較廣的單味中藥之一。丹酚酸B是丹參水溶性成分中的酚酸類化合物，近年來(lái)倍受人們的關(guān)注。其分子中有兩個(gè)含有羧基的丹參素片斷，可與生物堿類形成復(fù)鹽，復(fù)合后有的可以使藥理作用加強(qiáng)，有的可以使副作用降低，有的還可以產(chǎn)生新的藥理作用。丹酚酸B的鹽類如丹參酚酸B鎂鹽的藥理作用已被廣泛研究［2］。

中藥苦參Sophora flavescensAit.具有清熱燥濕，殺蟲(chóng)，利尿的功能［3］?？鄥A是苦參中生物堿成分之一，具多種藥理作用（抗肝纖維化、保護(hù)細(xì)胞膜、抗腫瘤等作用），現(xiàn)已有多種苦參類制劑應(yīng)用于臨床。

本研究以丹酚酸B和苦參堿為原料，以制成工藝簡(jiǎn)單、可以大規(guī)模生產(chǎn)及質(zhì)量可控的鹽類，通過(guò)薄層色譜、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振波譜、熱分析技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，希望得到效果更好的治療肝纖維化的藥物。

1 材料與試劑

1.1 材料

丹酚酸B（自制，含量大于95%），苦參堿（含量大于98%，購(gòu)于陜西一星生物工程有限公司）；丙酮（天津化學(xué)試劑一廠）、甲醇、三氯甲烷、乙醇（萊陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠）為分析純，硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）。

1.2 儀器

791型磁力加熱攪拌器（南匯電訊器材廠）；X-6型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京泰克儀器廠，溫度未校正）；日本CA-11型EYELA循環(huán)冷凍泵，EYBLA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；SHZ-D9（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；DZKW型電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；SK 5200 HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲有限公司）；DzF型真空干燥箱（上海市精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；Bruker Avance 600型核磁共振波譜儀，Nicolet Nexus 470 FT-IR紅外分光光度計(jì)（溴化鉀壓片法測(cè)定）；UV-2490紫外分光光度計(jì)；ZF-C型三用紫外分析儀（上?？岛坦怆妰x器有限公司）；STA 409 PC phox熱分析儀（上海耐馳儀器有限公司）。

2 復(fù)鹽的制備

精密稱取丹酚酸B 2.969 4 g，苦參堿1.070 0 g，分別用少量水溶解，將苦參堿溶液緩緩加入到丹酚酸B溶液中并不斷攪拌，有黃色絮狀沉淀產(chǎn)生，緩緩加入適量乙醇使沉淀完全，繼續(xù)攪拌0.5 h，停止反應(yīng)，過(guò)濾，在50℃烘箱烘干。得淡黃色粉末丹酚酸B-苦參堿復(fù)鹽3.554 6 g，產(chǎn)率為88%。反應(yīng)式見(jiàn)圖1。

圖1 丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽的反應(yīng)式

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 理化性質(zhì)鑒別

淡黃色粉末，mp 201.5～205.6℃，溶于水，略溶于甲醇，微溶于乙醇，不溶于丙酮、三氯甲烷、乙醚、石油醚等有機(jī)溶劑。

3.2 薄層鑒別

取0.6 mg丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽粉末，加甲醇10 mL，超聲10 min，作為供試品溶液。另取丹參酚酸B、苦參堿對(duì)照品，加甲醇制成0.5mg·mL－1的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法試驗(yàn)［4］，吸上述3種溶液各1.0μL，分別點(diǎn)于兩塊硅膠薄層板上，分別以三氯甲烷－甲醇－濃氨水（5∶0.6∶0.3）；三氯甲烷－甲醇－甲酸（10∶2∶1.5）為展開(kāi)劑于密閉容器中上行展開(kāi)10 cm，取出，晾干，置紫外燈下檢視，并分別以碘化鉍鉀和硫酸香草醛為顯色劑。結(jié)果顯示，復(fù)鹽中不含其他雜質(zhì)，為一純凈物。由復(fù)鹽TLC圖可看出，成鹽后復(fù)鹽的Rf值與單體一致，說(shuō)明成鹽后各自的母環(huán)并沒(méi)受到影響。

3.3 紫外光譜分析

將丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽溶于甲醇中，以甲醇溶液作參比，分別測(cè)定丹參酚酸B、苦參堿和復(fù)鹽的紫外光譜，見(jiàn)圖2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參酚酸B在286 nm處有最大吸收峰，苦參堿在205 nm處有最大吸收，而丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽溶液在205 nm及286 nm處都有最大吸收峰，與丹參酚酸B對(duì)比紫外吸收并沒(méi)有明顯改變，根據(jù)復(fù)鹽的分子結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生紫外吸收是分子中苯環(huán)及共軛碳基的電子躍遷，說(shuō)明在成鹽后化合物各自的母環(huán)未發(fā)生變化，故吸收光譜為兩者的疊加。

圖2 紫外光譜圖

3.4 紅外光譜分析

采用溴化鉀壓片，其譜圖如圖3。在苦參堿的紅外圖譜中，2 934，2 886 cm－1為C-H的伸縮振動(dòng)，2 756 cm－1，1 651 cm－1為苦參堿分子內(nèi)不飽和內(nèi)酰胺的振動(dòng)峰信號(hào)。丹參酚酸B的紅外圖譜中，處在高頻處的3 386 cm－1為丹參酚酸B分子中酚羥基的信號(hào)峰，另外在1 714 cm－1，1 611 cm－1處顯示分別為分子中羧基及酯鍵中的羰基信號(hào)峰，在低頻處的信號(hào)峰為分子中苯環(huán)上的C-H伸縮振動(dòng)及彎曲振動(dòng)所引起。成鹽后在丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽的紅外圖譜中，可以看出與成鹽前相比，OH、COOH、C＝O信號(hào)向低波數(shù)移動(dòng)，這主要是與形成氫鍵有關(guān)。1 714 cm－1和1 611 cm－1附近的信號(hào)，呈現(xiàn)出分子型和鹽型兩種羧基形式，且成鹽后1 714 cm－1的羰基信號(hào)峰明顯比成鹽前信號(hào)強(qiáng)度降低，說(shuō)明丹參酚酸B分子中的兩個(gè)羧基并沒(méi)有完全發(fā)生反應(yīng)，僅有一個(gè)發(fā)生了反應(yīng)。因丹參酚酸B分子中的兩個(gè)羧基的Pka相近，酸性幾乎相同，故反應(yīng)無(wú)選擇性。

3.5 熱分析

以α-A12O3作參比，在氮?dú)庵袑?duì)丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽進(jìn)行熱分析，升溫速度10℃·min－1，從室溫升至400℃。復(fù)鹽在氮?dú)庵械腡G-DSC及DTG曲線見(jiàn)圖4，DSC曲線上顯示出一個(gè)放熱峰和兩個(gè)吸熱峰，結(jié)合TG曲線和DTG曲線可判定在175℃左右的放熱峰為復(fù)鹽晶形的轉(zhuǎn)變峰，208.1℃的吸熱峰為復(fù)鹽的熔化峰，246.7℃的吸熱峰為復(fù)鹽的分解峰，并伴隨著失重的過(guò)程。對(duì)復(fù)鹽、丹參酚酸B、苦參堿的DSC曲線進(jìn)行對(duì)比，可明顯看出成鹽后，化合物的熔點(diǎn)升高，穩(wěn)定性增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果在熱重曲線上未出現(xiàn)脫結(jié)晶水的失重峰，結(jié)果表明復(fù)鹽分子不含結(jié)晶水。另外，DTG曲線與TG曲線所得各分解階段反應(yīng)的溫度范圍比較一致，這也說(shuō)明得到了純凈的丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽。

圖3 紅外光譜圖

3.6 核磁共振波譜分析

圖4 熱分析圖

以DMSO為溶劑的1H-NMR中，δ6.27～7.54中有13個(gè)氫信號(hào)為丹參酚酸B苯環(huán)上H-C1、H-C4、H-C5、 H-C21、 H-C24、 H-C25、 H-C12、 H-C13、 HC31、H-C34、H-C35、雙 鍵 H-C15、H-C16的 信 號(hào)；δ5.67為丹參酚酸B上H-C7信號(hào)；δ5.00的兩個(gè)氫為丹參酚酸B上H-C28和H-C18的兩個(gè)信號(hào)；δ4.38為 H-C8信號(hào)；δ3.45和 δ2.89為 H-C29信號(hào)；δ3.43和δ2.89為H-C18信號(hào)；其余sp3氫信號(hào)均為苦參堿上氫信號(hào)。由于該復(fù)鹽所含氫原子較多，且成鹽后分子內(nèi)易形成氫鍵，信號(hào)重疊，歸屬較困難。

根據(jù)13C-NMR譜圖可分析出 δ165.8～171.1 5個(gè)碳信號(hào)為丹參酚酸B上 C（17）、C（26）、C（27）、C（36）位4個(gè)羰基信號(hào)和苦參堿的 C（15′）位上1個(gè)羰基信號(hào)；δ144.0～147.2的9個(gè)信號(hào)為丹參酚酸B上苯環(huán)連 OH的 C（2）、C（3）、C（10）、C（15）、C（22）、C（23）、C（32）、C（33）位的 8個(gè)碳信號(hào)和 C（15）位雙鍵上的一個(gè)碳信號(hào)；δ122.7～131.3的5個(gè)信號(hào)為丹參酚酸B苯環(huán)上C（6）、C（9）、C（14）、C（20）、C（30）位的碳信號(hào)；δ120.1～121.2的4個(gè)信號(hào)為丹參酚酸B苯環(huán)上C（5）、C（13）、C（25）、C（35）位的碳信號(hào)；δ112.6～117.3的8個(gè)信號(hào)分別為丹參酚酸B苯環(huán)上 C（1）、C（4）、C（12）、C（21）、C（24）、C（31）、C（34）位的7個(gè)碳信號(hào)和雙鍵C（16）位1個(gè)碳信號(hào)；δ86.0為丹參酚酸 B上 C（7）位碳信號(hào)；δ74.5和δ73.6為丹參酚酸 B上 C（18）和 C（28）的碳信號(hào)；δ63.1的2個(gè)碳信號(hào)分別為丹參酚酸B上C（8）位的碳信號(hào)和苦參堿上 C（6′）的碳信號(hào)；δ56.2、56.1、52.4為苦參堿上 C（2′）、C（10′）、C（11′）的碳信號(hào)；δ42.1和溶劑δ38.8～40.4中覆蓋的一個(gè)碳信號(hào)分別為苦參堿上 C（17′）、C（7′）位碳信號(hào)；δ32.5～36.3的4個(gè)碳信號(hào)為丹參酚酸B上C（18）、C（29）位和苦參堿上 C（5′）、C（14′）位上碳信號(hào)；δ27.0、26.5、25.5、20.3、19.8、18.6的6個(gè)碳信號(hào)分別為苦參堿上 C（12′）、C（4′）、C（8′）、C（3′）、C（9′）、C（13′）位的碳信號(hào)。結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖5。

圖5 丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽的理化性質(zhì)及采用薄層色譜分析、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振波譜、熱分析等技術(shù)對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，結(jié)果顯示，本方法所合成的丹參酚酸B苦參堿復(fù)鹽為預(yù)期所設(shè)計(jì)的丹參酚酸B與苦參堿1∶1的成鹽，且結(jié)果顯示復(fù)鹽具有較好的穩(wěn)定性，有效地防止了丹參酚酸B、苦參堿易氧化的性質(zhì)，解決了分子的穩(wěn)定性問(wèn)題，為能夠更好地將此化合物應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：70.

［2］Zhang J.Inhibitory action of salvianolic acid B on the contraction of hepatic stellate cells induced by endothelin and its mechanism［D］.Shanghai： Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，2004.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：188-189.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34.

《中國(guó)藥用植物種子原色圖鑒》

《中國(guó)藥用植物種子原色圖鑒》由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)郭巧生教授主編，該書利用現(xiàn)代生物實(shí)體攝影技術(shù)制作的藥用植物種子原色圖譜再配以簡(jiǎn)要的文字，直觀、形象地介紹了106科434種常用藥用植物的種子實(shí)物的外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)形態(tài)及習(xí)性，填補(bǔ)了我國(guó)藥用植物種子原色圖鑒方面研究的空白。

全書有插圖572幅，其中果實(shí)和種子外形群體圖436幅，個(gè)體和解剖圖136幅。所用藥用植物種子（含果實(shí)，下同）皆在成熟后采收，并選擇有代表性的完整種子標(biāo)本，對(duì)其主要形狀特征進(jìn)行實(shí)體原色拍攝，根據(jù)鑒定研究等工作的實(shí)際需要，對(duì)部分種子進(jìn)行相關(guān)縱、橫切面剖視圖像攝影，制作成直觀、原色彩色圖，每一種藥用植物的彩色照片都附有簡(jiǎn)要文字說(shuō)明。

該書是我國(guó)藥用植物種子學(xué)研究方面的一本專著，對(duì)于從事藥用植物教學(xué)、科研及生產(chǎn)管理人員來(lái)說(shuō)又是一本實(shí)用工具書，也可作為在藥用植物研究方面進(jìn)行國(guó)際交流或合作的重要資料。

Structure Identification of Matrine Salvianolic acid B Salt Gao Hongying1，Li Guoyu1，2，Wang Hangyu1，2，Wang Jinhui1，2，3

（1.School of Pharmacy，Shihezi University，Shihezi Xinjiang832002，China；2.Key Laboratory of Phytomedicine Resources＆Modernization of TCM，Shihezi Xinjiang832002，China；3.School of Traditional Chinese Materica Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang Liaoning110016，China）

Objective：To identify the structure of new compound Matrine Salvianolic acid B salt.Methods：The structure of Matrine Salvianolic acid B salt was analyzed by means of TLC，UV，IR，NMR and TG-DSC.Results：The salt containing onemolecular Salvianolic acid B and one molecular alkaloids.Conclusion：The work is useful for further study on this new compound.

Matrine Salvianolic acid B salt；Thermal analysis；Structure identification

中國(guó)科學(xué)院西部之光課題（RCPY 200707）；國(guó)家重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目（2010ZX09401-304）

*王金輝，E-mail：wangjh1972＠vip.sina.com

2010-04-23）