曾長(zhǎng)立,伍曉明

（1.江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,武漢430056;2.中國(guó)農(nóng)科院油料作物研究所,武漢替換為 430078）

外源NO對(duì)鹽脅迫下雪里蕻種子萌發(fā)及抗氧化酶的影響

曾長(zhǎng)立1,2＊,伍曉明2

（1.江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,武漢430056;2.中國(guó)農(nóng)科院油料作物研究所,武漢替換為 430078）

研究了不同濃度的NO供體硝普鈉（SNP）對(duì)鹽脅迫下雪里蕻種子萌發(fā)及抗氧化酶的影響.結(jié)果表明,不同濃度的SNP對(duì)雪里蕻種子萌發(fā)影響差異顯著.SNP濃度為0.1～0.2 mmo/L時(shí)能明顯促進(jìn)雪里蕻種子的發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù),顯著提高下胚軸及子葉中超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化物酶（POD）活性,而低于或高于此濃度各指標(biāo)則顯著下降.

SNP;雪里蕻;種子萌發(fā)生理;抗氧化酶

據(jù)聯(lián)合國(guó)教科文組織和糧農(nóng)組織不完全統(tǒng)計(jì),世界鹽堿地面積為9.543 8億hm2,約占可耕地面積的10%,其中我國(guó)為9 913萬(wàn)hm2,約占全國(guó)可耕地面積的25%,而約80%左右的鹽堿地未得到有效治理與合理開(kāi)發(fā)利用,有著巨大的發(fā)展?jié)摿1].鹽漬土在我國(guó)具有分布廣、類型多、對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)影響較大等特點(diǎn),是我國(guó)一種典型的低產(chǎn)土壤,同時(shí)又是我國(guó)北方地區(qū)的一種重要土壤資源.因此,如何進(jìn)行鹽漬土的生物治理和綜合開(kāi)發(fā),提高作物耐鹽性是未來(lái)農(nóng)業(yè)發(fā)展的重大課題[2-3].雪里蕻（B rassica juncea（L.）Czern.et Coss.var.Crispifolia Bailey）屬于十字花科蕓薹屬芥菜種,是分蘗芥的一個(gè)變種,別名雪菜、春不老、霜不老等.雪里蕻葉質(zhì)脆嫩,風(fēng)味鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,既可鮮食也可腌制,含有豐富的維生素,具有滋陰開(kāi)胃,化痰利膈等功效,同時(shí)也是我國(guó)一種重要的葉菜類蔬菜[4].盡管目前在雪里蕻栽培方面有很多研究報(bào)道[5-6],但對(duì)于其耐鹽生理及采用化學(xué)誘抗劑增加其耐鹽能力的研究非常缺乏[7].在植物中,NO是作為一種廣泛的胞內(nèi)與胞間專遞的信號(hào)分子,在抵抗病菌、氣孔開(kāi)閉、種子萌發(fā)、根發(fā)育、葉發(fā)育、花發(fā)育和凋亡、延緩果實(shí)、蔬菜和切花的衰老等方面扮演了重要的角色,從而近來(lái)成為研究的熱點(diǎn)而受到廣泛關(guān)注[8].本試驗(yàn)以NaCl作為鹽脅迫因子,以外源SNP作為NO的供體進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn),重點(diǎn)探討外源NO在降低雪里蕻種子萌發(fā)期的鹽害效應(yīng),從而為充分利用鹽堿地種植雪里蕻,培養(yǎng)健壯幼苗并提高其耐鹽性等方面提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與處理

選取籽粒飽滿及大小一致的雪里蕻種子,經(jīng)0.1%HgCl2消毒10 min,漂洗干凈后,在墊有2層濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行常規(guī)發(fā)芽實(shí)驗(yàn),每皿放置50粒種子.分別用含150 mmol/L NaCl的 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液配制 0.05、0.1、0.2、0.3、0.5 mmol/L SNP溶液進(jìn)行澆灌,另以含150 mmol/L NaCl的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液為對(duì)照（表1）,置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng).每天更換澆灌液.設(shè)置5個(gè)重復(fù),培養(yǎng)第7天時(shí)取10粒萌發(fā)種子測(cè)定其根活力、下胚軸及子葉中的SOD與POD活性.

1.2 指標(biāo)測(cè)定方法

種子發(fā)芽勢(shì) （%）以3 d后所有萌發(fā)的種子數(shù)占總數(shù)的百分比進(jìn)行計(jì)算;種子發(fā)芽率 （%）則以7 d后所有萌發(fā)的種子數(shù)占總數(shù)的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì).發(fā)芽指數(shù) （GI）=∑Gt/Dt,公式中 Gt為在t日的發(fā)芽數(shù),Dt為發(fā)芽天數(shù);活力指數(shù) （VI）=GI×W,公式中的 GI為發(fā)芽指數(shù),W為幼苗單株平均重量 （g）;根系活力采用氯化三苯基四氮唑（TTC）法進(jìn)行測(cè)定[9];SOD活性測(cè)定采用NBT光還原法[10];POD活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚比色法[11].

表1 鹽脅迫下不同濃度SNP處理設(shè)計(jì)方案Tab.1 The desighs of diffevent concentrations of SNP under salt stress

1.3 數(shù)據(jù)分析

將獲得的數(shù)據(jù)用DPS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與處理,顯著性比較分析采用Duncan's多重比較法進(jìn)行.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度SNP對(duì)雪里蕻種子萌發(fā)的影響

從圖1可知,鹽脅迫下雪里蕻種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)均呈現(xiàn)出隨SNP濃度升高而先升高、后降低趨勢(shì).雪里蕻種子在鹽脅迫下其發(fā)芽率只有51.4%,嚴(yán)重抑制了種子的萌發(fā).當(dāng)SNP濃度為0.1～0.2 mmol/L時(shí),發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)均明顯高于CK.同時(shí),顯著性差異比較分析表明,該濃度處理與其它處理相比差異均達(dá)到顯著水平.SNP對(duì)種子發(fā)芽率與發(fā)芽勢(shì)的影響基本相同,說(shuō)明SNP減輕鹽脅迫的抑制作用并沒(méi)有隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而降低.值得注意的是,當(dāng)SNP濃度為超過(guò)0.2 mmol/L時(shí),其減輕效應(yīng)顯著降低.如0.2 mmol/L和0.5 mmol/L SNP的處理其發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)與種子活力指數(shù)與對(duì)照相比差異并不顯著.在種子活力指數(shù)上,0.1 mmol/LSNP處理與0.2 mmol/LSNP處理間差異達(dá)到顯著水平,表明前者濃度在減輕鹽脅迫對(duì)種子活力影響上效果更突出.總之,在鹽脅迫下,通過(guò)使用合理濃度的化學(xué)誘抗劑SNP可以顯著減輕其抑制作用.

2.2 不同濃度SNP對(duì)雪里蕻根系活力的影響

根系活力是反映作物根系生長(zhǎng)發(fā)育狀況的一個(gè)重要指標(biāo).從圖2可以看出,雪里蕻根系活力在鹽脅迫下隨SNP濃度增加而逐步上升,當(dāng)SNP濃度為0.1mmol/L時(shí),根系活力達(dá)到最大,超過(guò)該濃度,根系活力則呈下降趨勢(shì).顯著性分析說(shuō)明不同濃度SNP處理間差異均達(dá)到了顯著水平.與CK相比,0.05 mmol/L～0.2mmol/LSNP處理的雪里蕻根系活力都要高,但是當(dāng) SNP濃度超過(guò)0.2mmol/L時(shí),其根系活力顯著降低.該結(jié)果與上面SNP對(duì)種子活力指數(shù)的影響基本一致.這充分表明過(guò)高濃度的SNP不僅不能緩解鹽脅迫對(duì)雪里蕻根系生長(zhǎng)發(fā)育的危害,反而加重了鹽傷害.

圖1 不同濃度SNP處理對(duì)鹽脅迫下雪里蕻種子萌發(fā)的影響Fig.1 The effect of different concentrations of SNP on seed germination in potherb mustard.

圖2 不同濃度的SNP對(duì)雪里蕻根系活力的影響Fig.2 The effect of different concentrations of SNP on root vigor in potherb mustard

2.3 不同濃度SNP對(duì)雪里蕻種子抗氧化酶活性的影響

鹽脅迫下不同濃度SNP對(duì)雪里蕻種子抗氧化酶活性的影響見(jiàn)圖3.從圖中可得知,使用SNP可以顯著提高雪里蕻種子下胚軸及子葉中SOD與POD活性.CK的SOD與POD活性顯著低于不同濃度的 SNP處理,其中,0.1～0.2 mmol/L SNP處理的SOD與POD活性較高.但是當(dāng)SNP濃度進(jìn)一步提高時(shí),SOD與POD活性變化表現(xiàn)出明顯的差異.如對(duì)于SOD活性變化而言,處理2與3之間、處理3與4之間差異并不顯著,但這些處理與處理5之間比較則差異顯著;而對(duì)于POD而言,處理 2、3與處理 4、5之間差異達(dá)到顯著水平,但4、5之間差異不顯著（圖3）.這充分說(shuō)明,在鹽脅迫下,SOD對(duì)SNP處理的響應(yīng)比POD更敏感.

圖3 不同濃度的SNP對(duì)雪里蕻種子細(xì)胞保護(hù)酶活性的影響Fig.3 The effect of different concentrations of SNP on the activity of cell protective enzyme in potherb mustard seed

3 討論

NO作為植物的一種關(guān)鍵信號(hào)分子廣泛存在于植物組織中,不僅能促進(jìn)種子萌發(fā)和植物生長(zhǎng)發(fā)育,而且在逆境脅迫中通過(guò)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活性氧清除作用而減輕脅迫因子對(duì)植物的危害方面扮演了重要角色[12-13].鹽脅迫作為我國(guó)一種重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)限制因子,嚴(yán)重影響了作物的生長(zhǎng)發(fā)育,在對(duì)種子萌發(fā)的影響上主要是延遲出苗時(shí)間,降低發(fā)芽率[14].近年來(lái),眾多學(xué)者開(kāi)展了NO在作物鹽脅迫上的研究,得出NO提高植物耐鹽性的機(jī)理主要表現(xiàn):NO能夠提高植株的抗氧化能力[15]以及調(diào)節(jié)植物體內(nèi)離子平衡,尤其是關(guān)鍵信使Ca2+緩解鹽脅迫對(duì)細(xì)胞中離子穩(wěn)態(tài)的破壞與代謝紊亂等[16].盡管目前已有許多文獻(xiàn)報(bào)道了外源NO對(duì)在正常條件下對(duì)植物種子萌發(fā)的影響[17-18],但是卻極少有人研究逆境脅迫下外源NO對(duì)種子萌發(fā)的生理生化效應(yīng)[19-20].因此,本文開(kāi)展了NO緩解鹽脅迫對(duì)雪里蕻種子萌發(fā)期的影響效應(yīng)研究.結(jié)果表明,外源NO能顯著提高鹽脅迫下雪里蕻種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù),增加根系活力,顯著提高種子下胚軸及子葉中SOD與POD活性.該結(jié)果與湯紹虎等人（2007）在滲透脅迫下研究外源NO對(duì)黃瓜種子萌發(fā)的報(bào)道基本一致[19].值得一提的是,NO對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響具有雙重性,表現(xiàn)為當(dāng) NO濃度較低時(shí),對(duì)植物細(xì)胞具有保護(hù)作用[21],而NO濃度較高時(shí),則可能具有毒害作用[22].本實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了該結(jié)果,如當(dāng)NO供體SNP的濃度為0.1～0.2 mmol/L時(shí),雪里蕻種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)與活力指數(shù)均明顯高于CK.但是當(dāng) SNP濃度為超過(guò)0.2 mmol/L時(shí),上述各項(xiàng)指標(biāo)顯著降低（圖1）.另外,在根系活力（圖2）、抗氧化酶 SOD與 POD（圖3）上,也存在類似的規(guī)律.鹽害對(duì)植物所造成的多方面損傷的結(jié)果是產(chǎn)生大量具有氧化傷害的活性氧（ROS）,進(jìn)而對(duì)鹽脅迫下植物生長(zhǎng)和發(fā)育造成次生氧化危機(jī)[23],而SOD、POD、過(guò)氧化氫酶（CA T）和抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）等則是植物細(xì)胞中重要的活性氧清除酶[24].本實(shí)驗(yàn)中,外源NO能顯著提高雪里蕻種子中SOD、POD活性,從而能快速清除種子萌發(fā)過(guò)程中由于NaCl脅迫所產(chǎn)生的O2和 H2O2等活性氧,減輕其對(duì)種子細(xì)胞的危害,從而降低鹽脅迫對(duì)種子萌發(fā)的抑制作用,明顯提高種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)及活力指數(shù).

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Abstract:In this paper,effects of different concentrations of SNP（as a NO donor）on seed germination and anti-Oxidation System of Potherb Mustard were studied.The results indicated that there was significant difference among different concentrations of SNP.0.1～0.2 mmol/L of SNP could markedly promote seed germination viability and seed germination percentage,seed germination index,and seed activity index,and significantly enhance superoxide dismutase（SOD）and peroxidase（POD）activity of seed hypocotyl and cotyledon.However,all indexes of lower or higher concentrations than 0.1～0.2 mmol/L of SNP showed markedly decrease trends.

Key words:Sodium nitroprussiate;Potherb Mustard;seed germination physiology;anti-Oxidation Enzyme

The effect of exogenous nitric oxide on seed germination and anti-oxidation enzyme ofPotherb Mustardunder salt stress

ZEN G Changli1,2,WU Xiaoming2
（1.School of Life Sciences,Jianghan University,Wuhan 430056;2.Instituet of Oil Crop Research,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Wuhan 430078）

Q945

A

1000-1190（2010）04-0644-04

2010-05-10.

湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2008CDB087）;中國(guó)博士后科學(xué)基金項(xiàng)目（20100470417）.

＊E-mail:Zeng changLi 6111@Tom.com.