王術(shù)華 齊艷麗 張俊毅 張清富 李海英 邱雪杉

轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2（metastasis-associated gene 2, MTA2）是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（MTAs）家族成員之一[1]，其編碼的蛋白MTA2（metastasis-associated protein 2）是具有核小體重塑活性的組蛋白去乙酰基酶（nuclesome remodeling deac-etylase, NuRD）的亞基，其參與組成的復(fù)合物具有相對保守的基因轉(zhuǎn)錄抑制功能，與生物個(gè)體發(fā)育有關(guān)。MTA2蛋白在多種上皮源性腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，如卵巢癌[2]、乳腺癌[3]、肝癌等[4]，并與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，但其在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的表達(dá)情況尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)方法觀察MTA2在NSCLC組織中的表達(dá)情況，分析MTA2的表達(dá)與肺癌臨床病理特征的關(guān)系，為NSCLC中MTA2的研究積累更多的資料。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 110例NSCLC組織來源于2006年1月-2007年12月中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)院手術(shù)切除的標(biāo)本，全部病例均有完整的臨床病理資料。其中男性57例，女性53例；年齡36歲-78歲，中位年齡57歲；根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（2002）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為I/II期65例，III/IV期45例；鱗癌48例，腺癌62例；高中分化46例，低分化64例。34例癌旁肺組織取自手術(shù)斷端，距癌灶邊緣＞5 cm。所有患者術(shù)前均未接受過任何放化療。

1.2 研究方法 采用免疫組織化學(xué)（SP）法。羊抗人MTA2多克隆抗體（SC-9446）購自美國Santa Cruz公司；二抗試劑盒（ZB-2306）、DAB顯色試劑盒（ZLI-9032）購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；SP超敏試劑盒（KIT-9709）購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 結(jié)果判定 所有切片均由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理研究者在不知道臨床參數(shù)的情況下獨(dú)立閱片并計(jì)數(shù)細(xì)胞，結(jié)果不統(tǒng)一時(shí)，采用兩位研究者的綜合分析意見。MTA2表達(dá)主要定位于癌細(xì)胞核中，部分胞質(zhì)略有表達(dá)，呈棕黃色顆粒狀。每張切片在200倍顯微鏡下隨機(jī)選取10個(gè)不同視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。切片內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)＞10%為MTA2陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，對MTA2表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 MTA2的表達(dá)情況 MTA2陽性信號主要表達(dá)于癌細(xì)胞核，陽性表達(dá)率為58.18%（64/110）。MTA2在癌旁細(xì)支氣管上皮和肺泡上皮中無表達(dá)，MTA2在高分化鱗癌和腺癌中低表達(dá)，在低分化鱗癌和腺癌中高表達(dá)（圖1）。

2.2 MTA2的表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系110例NSCLC組織中有64例MTA2陽性表達(dá)，其表達(dá)與NSCLC患者臨床病理特征之間的關(guān)系見表1。經(jīng)Pearson相關(guān)分析，結(jié)果顯示：MTA2的表達(dá)與NSCLC的分化程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.440, P＜0.001），與臨床分期（r=0.256,P=0.007）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（r=0.299, P=0.001）呈正相關(guān)，而與患者的年齡、性別、組織學(xué)分型無相關(guān)性。

圖 1 MTA2在NSCLC及其癌旁肺組織中的表達(dá)（SP法，×400）。A：高分化鱗癌；B：低分化鱗癌；C：高分化腺癌；D：低分化腺癌；E：癌旁細(xì)支氣管上皮；F：癌旁肺泡上皮。NSCLC：非小細(xì)胞肺癌。Fig 1 The expression of MTA2 in NSCLC and peficancerous lung tissues (SP, ×400). A: higher-differentiated squamous cell carcinoma; B: lowerdifferentiated squamous cell carcinoma; C: higher-differentiated adenocarcinoma; D: lower-differentiated adenocarcinoma; E: cancer collateral branch trachea epithelial; F: cancer collateral alveolar epithelial. NSCLC: non-small cell lung cancer.

表 1 MTA2表達(dá)與NSCLC患者臨床病理因素之間的關(guān)系Tab 1 Relationship between expression of MTA2 and clinico-pathological factors in NSCLC

3 討論

MTA2是Zhang等[1]于1999年發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，定位于染色體11q1213.1，其編碼的蛋白質(zhì)MTA2含668個(gè)氨基酸，分子量為70 kDa。與MTA1蛋白有65%的同源性，N端高度相似，但C端的不同之處在于MTA2蛋白缺少myb區(qū)和SH3結(jié)合區(qū)[5]。MTA1組成的復(fù)合體包含HDAC1/2、RbAp46/48和MBD3等組件，而MTA2組成的復(fù)合體則包括Sin3和Mi2組件，此外，MTA2組成的復(fù)合體與HDAC1復(fù)合體較相似，提示MTA2可能具有內(nèi)部處理作用[6,7]。MTA2蛋白也是核小體重塑活性的NuRD的亞基[7]。目前認(rèn)為MTA2可通過調(diào)節(jié)雌激素通路[8-10]、細(xì)胞骨架[11]和細(xì)胞凋亡[12]等途徑促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。

已有研究[2,3,10]證實(shí)，MTA2在惡性腫瘤和其來源的正常組織中的表達(dá)存在差異，在同種腫瘤中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)存在差異。Ji等[2]利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測了不同分組的卵巢癌標(biāo)本中MTA2的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)臨床分期III/IV期的組織表達(dá)水平高于I/II期；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組；低分化組表達(dá)水平高于高分化組。RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測也有相同趨勢，證明MTA2的表達(dá)水平與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理學(xué)分級相關(guān)。Cui等[3]發(fā)現(xiàn)MTA2還可促進(jìn)雌激素受體依賴的乳腺癌細(xì)胞的生長。最新研究[13]表明MTA2與EGFR、IRAK-1、IkappaBalpha、NF-kappaB等因子之間存在交叉對話，其作為轉(zhuǎn)錄因子，可參與調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。此外，Luo等[12]采用p53和MTA2共轉(zhuǎn)染技術(shù)揭示：MTA2以劑量依賴性方式抑制了p53介導(dǎo)的p21基因轉(zhuǎn)錄激活作用，MTA2影響了p53誘導(dǎo)的細(xì)胞生長停止和凋亡的發(fā)生。用組蛋白去乙?；笍?fù)合物（histone deacetylases, HDAC）抑制劑毛癬素A（trichostatin A, TSA）處理可逆轉(zhuǎn)MTA2引起的細(xì)胞凋亡的下降，證明MTA2與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。

Fujitat等[14]在研究乳腺癌過程中發(fā)現(xiàn)了MTA1、雌激素受體（estrogen receptor, ER）、MTA3、Snail、E-鈣粘素通路，在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高表達(dá)的MTA1蛋白和HDAC一起，通過與存在于MTA3啟動子近端的雌激素反應(yīng)元件半位點(diǎn)相作用，影響了ER對MTA3的轉(zhuǎn)錄激活，下調(diào)的MTA3又使得其對Snail的轉(zhuǎn)錄抑制作用下降，增多的Snail蛋白最終引起E-鈣粘素的表達(dá)減少，癌細(xì)胞間的粘連減弱易于脫落形成轉(zhuǎn)移。我們對110例NSCLC中MTA2的表達(dá)情況及其與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)MTA2在部分NSCLC中呈陽性表達(dá)，表達(dá)率為58.18%（64/110）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析證實(shí)MTA2的表達(dá)與患者的年齡、性別、NSCLC的組織分型無明顯關(guān)系，而與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（r=0.299, P=0.001）、臨床分期（r=0.256,P=0.007）正相關(guān)，與分化程度負(fù)相關(guān)（r=-0.440,P＜0.001）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與我們課題組前期實(shí)驗(yàn)所證實(shí)的MTA1在NSCLC中的表達(dá)相類似。因此，推測MTA2可能通過與MTA1相同的作用途徑促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。

綜上所述，MTA2與NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性密切相關(guān)。進(jìn)一步深入研究MTA2的作用底物，阻斷其作用途徑以及發(fā)展MTA2的特異性抑制劑來控制腫瘤的發(fā)展，將有可能成為臨床治療NSCLC的新靶點(diǎn)。