河北省邢臺(tái)市眼科醫(yī)院制劑室 楊存愛 (邢臺(tái) 054001)

正交試驗(yàn)法優(yōu)選清熱明目顆粒的水提工藝

河北省邢臺(tái)市眼科醫(yī)院制劑室 楊存愛 (邢臺(tái) 054001)

目的:優(yōu)選清熱明目顆粒的最佳水提工藝。方法:應(yīng)用 L9(34)正交試驗(yàn),以浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素,每個(gè)因素取 3個(gè)水平,并以黃芩苷含量和干浸膏重量為考察指標(biāo),進(jìn)行回流提取,減壓濃縮,優(yōu)化提取條件。結(jié)果:3因素浸泡時(shí)間 A、加水量 B、提取時(shí)間 C影響顯著,而提取次數(shù) D影響不顯著。結(jié)論:清熱明目顆粒的最佳制粒工藝條件為 A1B2C2D2。即浸泡 1 h,加 8倍量水,回流提取 1.5 h,提取 2次。

清熱明目顆粒;正交試驗(yàn);黃芩苷;水提工藝

清熱明目顆粒為我院純中藥復(fù)方制劑,由龍膽、黃芩、地黃、大黃、石膏、知母、天花粉、蘆根、金銀花等多味中藥制成,具有清熱解毒,消翳明目的作用,用于治療急慢性葡萄膜炎、視網(wǎng)膜炎、急慢性結(jié)膜炎和各類角膜炎,療效顯著。其中黃芩為方中君藥,黃芩苷為其主要活性成分。本制劑采用水提取,減壓濃縮制備濃縮藥液,經(jīng)噴霧制粒而成。為發(fā)揮藥物的最佳療效,優(yōu)化制備工藝,本實(shí)驗(yàn)采用正交試驗(yàn)對(duì)其提取參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,以浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素,以黃芩苷含量和干浸膏重量為考察指標(biāo),從而確定了清熱明目顆粒的最佳水提工藝條件,為工業(yè)化大生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料

大連依利特高效液相色譜儀,十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱 (4.6 mm×200 mm,5μm);P230高壓恒流泵,UV230紫外 -可見檢測(cè)器;黃芩苷對(duì)照品 (中國藥品生物制品檢定所,批號(hào) 715-20001,供含量測(cè)定用);SNGT-12型全能真空干燥提取器 (湖南衡陽市雁翔制藥設(shè)備廠);101-1型電熱鼓風(fēng)干燥箱 (上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);中藥飲片 (邢臺(tái)百順康)甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素和水平的確定 根據(jù)浸提理論與預(yù)試驗(yàn),選定浸泡時(shí)間 (A)、加水量 (B)、提取時(shí)間 (C)、提取次數(shù)(D)為考察因素,每個(gè)因素取 3個(gè)水平,結(jié)果見表1,并以黃芩苷含量和干浸膏重量為綜合考察指標(biāo),設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)。

表1 因素水平表

2.2 提取工藝 根據(jù)因素水平表,采用 L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn),按處方比例稱取 9份藥材,分別用水提取,過濾除渣,減壓濃縮至適量,分別定容至 250mL,所得水煎液為供試品溶液。并測(cè)定供試品溶液黃芩苷的含量及干浸膏的重量。

2.3 干浸膏重量的計(jì)算 精密量取供試品溶液 50mL于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,再于 105℃烘箱中干燥 3 h,置干燥器中冷卻 30 min,迅速稱重,記錄干浸膏重量,結(jié)果見表2。

2.4 高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷的含量[3]

2.4.1 色譜條件:色譜柱:C18柱 (4.6 mm×200 mm,5 μm);檢測(cè)波長:280 nm,流速:1.0mL/min;流動(dòng)相:甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2);進(jìn)樣量:20μL。在上述色譜條件條件下,分別取對(duì)照品溶液和樣品溶液及陰性樣品溶液進(jìn)樣。所得色譜圖,黃芩苷與相鄰其他組分峰分離完全,分離度為 12.43,保留時(shí)間為 23.10 min,理論塔板數(shù)為 26 860.35,陰性樣品無干擾。

2.4.2 對(duì)照品溶液:精密稱取黃芩苷對(duì)照品 15 mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液,再精密量取 1mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得含黃芩苷為 30μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4.3 樣品溶液:精密量取供試品溶液 5mL(相當(dāng)于2.5 g顆粒)置 50mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用 0.45 nm膜過濾,作為樣品溶液。

2.4.4 陰性樣品溶液:按處方比例制備缺黃芩的陰性樣品,依“2.4.3”項(xiàng)下制備陰性樣品溶液。

2.4.5 線性關(guān)系考察:分別精密量取對(duì)照品貯備液 0.6、1.0、1.4、1.8、2.2mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得每 1mL含黃芩苷 18、30、42、54、66μg的對(duì)照品溶液。各精密量取 20μL進(jìn)樣,以上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積 (Y)與對(duì)照品質(zhì)量 (X)進(jìn)行線性回歸,得黃芩苷的回歸方程為 Y=88.75X-136.8(r=0.9 994,n=5),線性范圍為 18～66μg/mL;結(jié)果表明,黃芩苷在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.6 精密度試驗(yàn):精密量取 “2.4.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣 5次,黃芩苷峰面積積分值的 RSD為 0.36%。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品溶液 6份,按 “2.4.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,以上述色譜條件測(cè)定黃芩苷的峰面積,計(jì)算含量,RSD分別為 0.38%。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一樣品溶液,分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣 1次,測(cè)定含量,結(jié)果表明,在10 h內(nèi)黃芩苷的含量均無明顯變化,RSD分別為 0.42%。

2.4.9 加樣回收率試驗(yàn):精密稱取黃芩苷對(duì)照品 183.5 mg置 50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取 5mL置 50mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度,搖勻,作為測(cè)回收率對(duì)照品溶液備用;精密量取已知含量的供試品溶液 2.5mL 9份,分別置 50mL量瓶中,再精密加入上述對(duì)照品溶液適量,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用 0.45 nm膜過濾,測(cè)定含量,進(jìn)行回收率試驗(yàn),結(jié)果平均回收率為 100.8%,RSD為 0.48%。

2.4.10 黃芩苷含量的計(jì)算:分別精密量取供試品溶液5mL,以 “2.4.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液,計(jì)算供試品溶液的黃芩苷含量,結(jié)果見表2。

2.5 結(jié)果 分別記錄黃芩苷含量和干浸膏重量,進(jìn)行綜合評(píng)分,對(duì)綜合評(píng)分結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果見表3。

表2 水提工藝正交試驗(yàn)結(jié)果分析表

表3 水提工藝方差分析

分析結(jié)果表明,各因素對(duì)水提工藝的影響程度依次為B>C>A>D,其中浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間對(duì)提取工藝有顯著影響,而提取次數(shù)提取結(jié)果無顯著影響。經(jīng)直觀比較分析,同時(shí)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際,優(yōu)選出最佳水提工藝為A1B2C2D2,即用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次1.5 h。

2.6 工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方稱取各藥材 3份,按選定的最佳工藝條件A1B2C2D2采用全能真空干燥提取器進(jìn)行提取中試,平行制備 3份樣品,測(cè)得黃芩苷的平均含量為 382 mg/mL,平均干浸膏重量為 2.75 g。可見,按最佳工藝提取有效成分含量處于較高水平,證明該工藝合理,重復(fù)性強(qiáng)。

3 討論

①評(píng)價(jià)指標(biāo)[2-3]:因黃芩為清熱明目顆粒的君藥,黃芩苷為其有效成分,是主要指標(biāo)成分,所以在綜合評(píng)分中,黃芩苷含量與干浸膏重量按 7∶3權(quán)重比來考察提取效果。并且評(píng)分時(shí)以各指標(biāo)最大值為參數(shù)將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化,采用加權(quán)方式綜合評(píng)定,使評(píng)價(jià)指標(biāo)更趨于合理化。②色譜條件:本實(shí)驗(yàn)以甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2)為流動(dòng)相測(cè)定黃芩苷含量,峰形好,分離度好,簡單易行。③優(yōu)選工藝:本實(shí)驗(yàn)采用L9(34)正交設(shè)計(jì)優(yōu)選出清熱明目顆粒的最佳水提工藝為:用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次 1.5 h。該工藝穩(wěn)定可靠,可作為該制劑工業(yè)化生產(chǎn)的依據(jù)。

[1]中華人民共和國藥典委員會(huì) .中國藥典 (一部) [S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.318

[2]周瀅,張勝,曹佩雪,等 .石斛明目膠囊藥材水煎醇沉工藝的正交試驗(yàn) [J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(10):785-787

[3]樊莉,周世文,李聃丹,等 .正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃芪天麻膠囊的提取工藝 [J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2009,29(7):525-528

(2010-02-26 收稿)

R 284.2

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1007-5615(2010)02-0037-02