晏 麗,高中松
(吉首大學城鄉(xiāng)資源與規(guī)劃學院,湖南張家界427000)
楓香(Liquidambar formosana Hance)為金縷梅科楓香亞科楓香屬的高大落葉喬木,別名為楓木、黑飯木、香楓等,是我國重要的鄉(xiāng)土樹種,也是亞熱帶地區(qū)的優(yōu)良速生落葉闊葉樹種[1],主要分布于我國黃河流域及其以南地帶,主產(chǎn)于江蘇、浙江、安徽、湖南、湖北、江西、福建、臺灣、廣西等?。▍^(qū))[2]。楓香全株均可入藥[3],但近年,許多學者對其栽培技術及園林應用進行了研究,對其藥用價值的開發(fā)利用較少,尤其是對其黃酮類化合物藥用價值的研究目前尚處于空白。黃酮類化合物廣泛存在于植物界,在花類藥材中種類及含量尤其豐富,生理活性多樣,引起國內(nèi)外的廣泛重視[4]。近年來,超聲技術廣泛應用于黃酮類化合物的提取研究,如對大蒜黃酮、茉莉花黃酮、洋蔥黃酮、石榴黃酮等的提取[5-10]。超聲技術應用于提取楓香葉中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報道。
本研究利用超聲技術,以楓香葉為原料,乙醇水溶液為溶劑,考察乙醇濃度、提取時間和料液比對總黃酮提取率的影響,通過正交試驗對提取工藝進行優(yōu)化,用紫外分光光度法測定提取物中總黃酮的含量。楓香葉總黃酮的提取,可為楓香資源的高效開發(fā)和綜合利用提供參考依據(jù)。
楓香葉采自吉首大學張家界校園,采集時間:為2009年7月7日。主要試劑:乙醇(分析純)、總黃酮對照品蘆丁(中國藥品生物制品檢定所)。主要儀器:SB5200DT型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)、SHZ-D循環(huán)水式真空泵(河南省鞏義市英峪予華儀器廠)、UV757CRT紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市富華儀器有限公司)、DHG-9240A型電熱恒溫鼓風干燥箱。
1.2.1 繪制標準工作曲線 用十萬分之一天平精密稱取烘干2 h的蘆丁對照品13.4 mg,用60%乙醇溶解,定容于50 mL容量瓶中,搖勻,得到0.268 mg/mL的標準母液。精密吸取該標準溶液0,1,2,4,6,8 mL,分別置于 25 mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉0.7 mL,混勻,放置5 min,加10%硝酸鋁0.7 mL,混勻,放置6 min,加5%氫氧化鈉5 mL,用30%乙醇定容至刻度,搖勻,放置10 min后比色,用紫外分光光度計在200~800 nm范圍進行光譜掃描,得到標樣的光譜圖。由光譜圖可知,在507 nm處有最大吸收峰,得到質(zhì)量濃度X與吸光度Y的標準曲線為Y=0.011 3X+0.007 4,R2=0.999 5(圖 1)。
1.2.2 提取楓香葉總黃酮的正交試驗 采用超聲波提取法,以乙醇濃度(A)、提取時間(B)、料液比(C)3個提取因素為考察對象(表1),按L9(34)正交表設計試驗方案進行正交試驗,按標準曲線的測定方法測定提取液的吸光度,并根據(jù)線性回歸方程計算總黃酮提取率,以總黃酮得率為考察指標,確定提取楓香葉總黃酮的最佳工藝。
表1 正交試驗因素與水平
每次稱取0.1 g楓香葉干燥粉,選取乙醇濃度、料液比和提取時間3個因素進行正交試驗,結果如表2所示。對結果進行方差分析(表3)。試驗結果表明,乙醇濃度和提取時間對楓香葉總黃酮的提取效果有顯著影響,料液比對總黃酮提取的影響較小,3個因素對總黃酮提取率的影響大小依次為:乙醇濃度>提取時間>料液比,提取楓香葉總黃酮的最佳工藝條件為A3B2C1,即乙醇濃度80%,提取時間60 min,料液比1∶10。
表2 正交試驗結果
表3 方差分析
以乙醇溶液為提取劑,用超聲波法進行楓香葉總黃酮的提取,試驗結果表明,影響超聲波法提取楓香葉總黃酮的主次因素為:乙醇濃度>提取時間>料液比。最佳提取工藝為A3B2C1,即乙醇濃度80%,提取時間60 min,料液比1∶10。與傳統(tǒng)浸提法相比,超聲波法的提取時間較短,從節(jié)約能源和技術經(jīng)濟性的角度來看,超聲波提取法優(yōu)于傳統(tǒng)浸提法。因此,超聲波提取楓香葉總黃酮具有提取速度快、節(jié)約能源等優(yōu)勢,是一種比較理想的方法。
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