彭貴清 孫 鋼 指導(dǎo) 何煥榮 江蘇省蘇州市中醫(yī)院 (蘇州 215003)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的呼吸系統(tǒng)疾病,其發(fā)生發(fā)展是一復(fù)雜的、多因素綜合作用的過(guò)程,氧化-抗氧化失衡被認(rèn)為是 COPD發(fā)生的重要因素之一,并受到學(xué)者們的廣泛重視,成為研究熱點(diǎn)[1]。筆者多年應(yīng)用參蛤益肺膠囊治療 COPD穩(wěn)定期患者,在改善患者臨床癥狀,運(yùn)動(dòng)耐力和生活質(zhì)量方面都取得了很好的療效[2],動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也提示本方具有一定的抑制 COPD氣道炎癥的作用[3]。本研究通過(guò)觀(guān)察參蛤益肺膠囊對(duì) CO PD大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛 (M DA),肺組織勻漿谷胱酐肽 (GSH)的影響,進(jìn)一步探討參蛤益肺膠囊治療 CO PD的機(jī)理。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 動(dòng)物 清潔級(jí) SD大鼠,雄性,84只,體重 250±30g,由蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心提供。

1.2 藥物 參蛤益肺方(西洋參、蛤蚧、蟲(chóng)草菌絲、紫河車(chē)、川貝、參三七等組成),蘇州市中醫(yī)院藥劑科加工,用蒸餾水分別以 25、50、100g/L濃度配置成混懸液 ,金水寶膠囊藥粉用蒸餾水以 50g/L濃度配置成混懸液。

1.3 儀器與試劑 脂多糖(LPS)由美國(guó) Sigma公司提供。M DA、SOD、GSH、考馬斯亮蘭蛋白定量試劑盒,由南京建成生物工程有限公司生產(chǎn)。熏煙箱(自制,體積 60cm×40cm×35cm)。

2 實(shí)驗(yàn)方法 2.1 造模及給藥 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為六組,即正常對(duì)照組、COPD模型組、金水寶對(duì)照組、參蛤益肺 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)“參蛤組”)膠囊低、中、高劑量組,每組 14只,采用煙熏加氣道內(nèi)注入 LPS的造模方法建立 COPD模型[4]。除正常對(duì)照組外,其余各組大鼠分別在實(shí)驗(yàn)第 1d和第 14d氣管注入LPS0.2mL(1mg/1mL),在實(shí)驗(yàn)的第 2～13d和第 15～30d,在熏煙箱內(nèi)對(duì)動(dòng)物予大前門(mén)牌香煙煙熏,每箱 4支,持續(xù)熏煙30min。除第 1d和第 14d外,參蛤高中低各劑量組分別以上述25、50、100g/L濃度灌胃,金水寶組以上述濃度灌胃,灌胃量1mL/100g,正常組和模型組予等量蒸餾水灌胃。

2.2 取材處理及觀(guān)察指標(biāo) 2.2.1 實(shí)驗(yàn)第 30d,抽取大鼠腹主動(dòng)脈血 5mL,離心(4℃,3500r/min,10min)后,取上清液于-20℃冰箱中保存待檢 M DA、SOD,按試劑盒說(shuō)明操作。

2.2.2 剪開(kāi)大鼠胸腔 ,分離出肺臟,濾紙吸干肺臟,稱(chēng)重肺臟,檢測(cè)肺系數(shù)用。肺系數(shù)=肺重(g)/體重(Kg)

2.2.3 取右肺下葉組織 0.2～0.3g,制成 10%組織勻漿,離心 (4℃,5000r/min,10min)后,取上清液于 -20℃冰箱中保存待檢 GSH,按試劑盒說(shuō)明操作。

2.2.4 從右肺中葉相同部位取材約 0.5g,10%甲醛溶液固定,經(jīng)梯度乙醇脫水,二甲苯透明 ,常規(guī)石蠟包埋,切片,蘇木精-伊紅(HE)染色,應(yīng)用瑯珈病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)量細(xì)支氣管內(nèi)徑:每只大鼠選取直徑約 200-400μm的小支氣管,采用瑯珈病理圖像分析系統(tǒng)之測(cè)微尺測(cè)量其內(nèi)徑。

3 結(jié)果 3.1 參蛤益肺膠囊對(duì)大鼠氧化、抗氧化相關(guān)指標(biāo)的影響。肺系數(shù)、病理定量分析見(jiàn)表 2,表 3。

4 討 論 由于肺部通過(guò)呼吸和外界的氧化劑、煙霧、微塵直接接觸,因此肺是氧化劑破壞的主要目標(biāo)。過(guò)多的氧化物一方面直接引起氣道和肺部的損傷;另一方面,通過(guò)氧化應(yīng)激加劇肺部炎癥。越來(lái)越多的研究證明氧化/抗氧化失衡與COPD發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[5]。MDA是體內(nèi)自由基脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終末產(chǎn)物,其含量高低可反應(yīng)體內(nèi)自由基氧化損傷反應(yīng)的強(qiáng)度[6]。SOD是機(jī)體清除 O2-的唯一抗氧化酶,在一定程度上代表了機(jī)體的抗氧化能力;另一重要的抗氧化劑 GSH是細(xì)胞內(nèi)外消除氧化應(yīng)激最主要的物質(zhì)[7]。體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)研究顯示GSH作為一種重要的抗氧化劑,在保持氣道上皮細(xì)胞完整性,抵御肺部損傷與炎癥等方面起到了重要的作用[8]。GSH在遠(yuǎn)端氣道肺上皮細(xì)胞內(nèi)襯液中濃度比血漿中的濃度要高出許多,表明測(cè)定肺組織勻漿中 GSH含量較血液中更有價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)參蛤益肺膠囊能降低 CO PD大鼠血清 M DA含量,提高 SOD活力及肺組織勻漿中 GSH水平。提示參蛤益肺膠囊治療COPD療效與其一定的抗氧化作用有關(guān)。同時(shí),通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠肺系數(shù)和支氣管內(nèi)徑的觀(guān)察,表明該方能夠減輕 CO PD大鼠支氣管及其周?chē)装Y,減輕肺泡氣腫及支氣管阻塞程度。與正常組相比:△P＜0.05;與模型組相比:▲P＜0.05。病理定量分析

表1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清 SOD、MDA及肺組織勻漿 GSH統(tǒng)計(jì)表

表1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清 SOD、MDA及肺組織勻漿 GSH統(tǒng)計(jì)表

與正常組相比:△P＜0.05;與模型組相比,▲P＜0.05。肺系數(shù)

表2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠肺系數(shù)統(tǒng)計(jì)表

表2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠肺系數(shù)統(tǒng)計(jì)表

表3 實(shí)驗(yàn)大鼠細(xì)支氣管內(nèi)徑統(tǒng)計(jì)表

表3 實(shí)驗(yàn)大鼠細(xì)支氣管內(nèi)徑統(tǒng)計(jì)表

與正常組相比:△P＜0.01;與模型組相比:▲P＜0.01。

中醫(yī)藥對(duì) COPD的治療已有悠久的歷史,尤其對(duì)穩(wěn)定期的治療具有一定的療效和獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。參蛤益肺膠囊是我們經(jīng)多年臨床觀(guān)察,療效確切的中藥復(fù)方?，F(xiàn)代藥理研究也表明,其組成藥物西洋參、蛤蚧、紫河車(chē)、蟲(chóng)草菌絲均具有抗氧化的作用。結(jié)合以往研究,表明參蛤益肺膠囊多方面的綜合作用可以減緩病情發(fā)展,改善患者臨床癥狀,提高生活質(zhì)量,其作用機(jī)理值得進(jìn)一步研究。

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