陳 江 劉 凱 肖 引 曹 銳 劉華為 武警陜西總隊醫(yī)院藥劑科(西安 710054)

清肺止咳糖漿為本院制劑,處方組成為麻黃、薄荷、杏仁、川貝母、桔梗、黃芩等 13味中藥材,具有清肺潤燥,止咳化痰的功效,深受患者喜愛,尤其適于兒童。為提高產(chǎn)品質(zhì)量,我們用薄層層析法對桔梗、黃芩進行定性鑒別;HPLC法對黃芩苷進行定量分析。操作方法簡便,專屬性強。

1 儀器與試藥 1.1 儀器島津高效液相色譜儀(ShimadzuLC-10Atvp輸液泵,ShimadzuSPDM10Avp二極管陣列檢測器,Class-vp工作站),三用紫外線儀 UV-8(BEI JING XING CHENG)。

1.2 試劑與藥品 試劑均為分析純,黃芩苷(715-9204)、桔梗(1028-200103)對照藥材、麻黃堿(714-9202)對照藥材購自中國藥品生物制品檢定所,清肺止咳糖漿(本院自制,批號 051012,051015,051018)。

2 制備 2.1 處方生石膏、魚腥草各 80g,蘇子、川貝母各 64g,黃芩、桔梗、杏仁、僵蠶各 48g,薄荷40g,麻黃、甘草各 24g,綠茶 15g,細辛 8g,蔗糖 600g,尼泊金乙酯 1g,以上共制成 1000mL。

2.2 制備方法 以上 13味,切段(1～2cm),其中細辛、薄荷、魚腥草 3味,加 10倍量水,浸泡 3h,用蒸餾法提取 6h,收集揮發(fā)油,蒸餾后的水溶液另器收集,藥渣棄去;其余九味加水煎煮 2次,第一次加 10倍量水,煎煮 1.5h,第二次加 8倍量水,煎煮 1h,2次煎液與上述細辛、薄荷、魚腥草 3味蒸餾后的水溶液合并,濾過,濾液濃縮至相對密度為 1.15的清膏(60℃),加乙醇使含醇達 60%,靜置 24h,濾過,濾液回收乙醇后,濃縮至約 500mL,加蔗糖 600g,煮沸,放冷,濾過,加入揮發(fā)油,混勻后加入尼泊金乙酯 1g(加少量乙醇溶解),加水稀釋至 1000mL,即得。

3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 3.1 性狀 取本品數(shù)批樣品,觀察外觀性狀,均為深棕色澄明液體;氣香,味甜微苦。

3.2 定性鑒別 3.2.1 桔梗的 TLC鑒別:供試品溶液:取本品 30mL,蒸干,殘留物加氯仿 30mL,鹽酸5mL,回流 2h,濾過,濾液蒸干,殘渣加氯仿 2mL溶解,即為供試品溶液。對照品溶液:取桔梗對照藥材2g,加水 100mL,煎煮 20min,過濾,取濾液 10mL加鹽酸 1mL蒸干,殘渣加氯仿 2mL使溶解,即為對照藥材溶液。陰性對照溶液:取除黃芩制成的陰性對照液 30 m L,其余同供試品液操作。薄層色譜鑒別:吸取上述三液各 5 μL,分別點于同一塊硅膠 G薄層板上,以氯仿-丙酮-環(huán)己烷(2:2:4)為展開劑,展開,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。樣品液與對照藥材液在相應(yīng)位置上,顯相同顏色的熒光斑點,陰性對照未顯斑點。結(jié)果見圖 1。

3.2.2 麻黃的 TLC鑒別:供試品溶液 取本品30mL,用氨試液調(diào) PH值至 9～10,用氯仿提取 2次,每次 20mL,合并氯仿層,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1mL溶解,即為供試品溶液。對照品溶液:取鹽酸麻黃堿對照品,加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液,即為對照品溶液。陰性對照溶液:取除麻黃制成的陰性對照液30 mL,其余同供試品液操作。薄層色譜鑒別:吸取上述三液各 2 μL,分別點于同一塊硅膠 G薄層板上,以氯仿:甲醇:氨水(20:5:0.5)為展開劑,展開,晾干,噴以茚三酮試液,在 105℃加熱至斑點顯色清晰。樣品液與對照藥材液在相應(yīng)位置上,顯相同顏色的熒光斑點,陰性對照未顯斑點。結(jié)果見圖 2。

3.3 黃芩苷含量測定 3.3.1 色譜條件:色譜條件[4]與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:Lichrospher C18柱 (4.6mm×150 mm,5μ m),柱溫 35℃;流動相:甲醇-0.2%磷酸溶液(44∶56),流速 1 mL? min-1;檢測波長280 nm;進樣量 10μL。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于 2500。色譜圖見圖 3。

圖1 清肺止咳糖漿中桔梗 TLC鑒別圖

圖2 清肺止咳糖漿中麻黃 TLC鑒別圖

圖3 對照品(A)、樣品(B)及陰性樣品 (C)HPLC色譜圖1 黃芩苷

3.3.2 對照品溶液的制備:精密稱取在 60℃減壓干燥 4h的黃芩苷對照品適量,加甲醇制成每 1mL含30 μ g的溶液 ,即得。

3.3.3 陰性樣品溶液:按處方配比取除黃芩外的其他藥材,制成缺黃芩的陰性樣品,按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

3.3.4 測定波長的選擇:取黃芩苷對照品,加流動相制成一定濃度的溶液,在 200～800nm波長處掃描,結(jié)果顯示黃芩苷在 277.50nm、246.50 nm和 314.50nm處均有較大吸收峰。參考《中國藥典》2005版一部黃芩藥材含量測定項下的檢視波長為 280nm,故本法也選擇 280nm作為檢視波長。

3.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密稱取黃芩苷對照品適量,加甲醇制成每 1m L含黃芩苷 29.86 μ g的溶液,精密吸取該溶液 2、5、8、 10、12、15 μL,注入 HPLC儀 ,按上述色譜條件測定黃芩苷吸收峰面積,以黃芩苷吸收面積的積分值為 Y,進樣量為 X,線性回歸,得線性方程:Y=3× 106X-54540,R=0.9998。

3.3.6 供試品溶液的制備:精密吸取取本品 5mL,置 100m L量瓶中,加入甲醇約 80mL,超聲處理20min,放冷至室溫,再加甲醇至刻度,搖勻,取上清液,用 0.45 μ m的濾膜,過濾,濾液作為供試品溶液。

3.3.7 精密度試驗:取對照品溶液 10 μL,注入高效液相色譜儀,共測定 6次,以黃芩苷峰面積計算,RSD=0.54%,精密度良好。

3.3.8 重復(fù)性試驗:取同一批樣品(051012批)6份,照上述供試品溶液制備方法制備,并按以上色譜條件測定,計算每份樣品中黃芩苷含量,并以黃芩苷含量計算,RSD= 0.82%,試驗重現(xiàn)性良好。

3.3.9 溶液的穩(wěn)定性試驗:取同一份供試品溶液,每間隔一定時間,精密吸取 10 μL,注入高效液相色譜儀測定一次,共測定 6次,以黃芩苷面積計算,RSD=0.5%,表明供試品溶液在 15h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.3.10 回收率試驗:取已知含量的樣品(051012),精密稱取 6份,每份 2.5mL,分別置 100mL量瓶中,再精密稱取黃芩苷對照品適量,分別加入樣品中,按供試品溶液制備方法制備,并按樣品測定方法測定回收率測試,結(jié)果平均回收率為 98.52%,RSD=0.61%。

3.3.11 含量測定:取三批樣品,分別按供試品溶液制備方法制備,按以上色譜條件測定黃芩苷含量,結(jié)果見附表。

附表 清肺止咳糖漿含量測定

以上三批樣品測定結(jié)果表明,本品每 mL黃芩苷含量在 0.495mg～0.565mg之間,三批樣品中黃芩苷含量的平均值為 0.529mg/mL,故根據(jù)測定結(jié)果規(guī)定每 mL以黃芩苷計,不得低于 0.40mg。

4 討 論 在做黃芩苷含量測定的穩(wěn)定性實驗時,發(fā)現(xiàn) 3 h以后黃芩苷含量下降速度較快。經(jīng)初步穩(wěn)定性考察,與黃芩苷的光不穩(wěn)定性有關(guān)。故在檢測時避光直照并縮短操作時間,且對產(chǎn)品采用棕色瓶包裝,經(jīng)室溫留樣考察比較,產(chǎn)品穩(wěn)定性因素有了很大提高。

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[2]苗明三,李振國.現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制 (技術(shù))[M].人民出版社,1997:248.

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