索建蘭 沈 峰 王蘇紅 寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工系(寶雞 721013)

三七是我國特產(chǎn)的名貴藥材之一。始載于 1590年《本草綱目》草部第 12卷,又名山漆、金不換。為五加科植物三七 Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen的干燥根[1]。太白山中草藥久負(fù)盛名,特別是太白三七具有極高的醫(yī)療價值,是珍貴的民族文化遺產(chǎn)。但是近年來太白山三七資源開發(fā)緩慢,資源不能得到有效的利用。因此,我們需要對太白三七有效成分含量做以測定,使我們對太白山中草藥的質(zhì)量問題有一個全新的認(rèn)識,使太白山中草藥資源能夠得到有效的利用。

從三七根粉中可得到多種單體皂苷成分,其含總皂苷約 8%[4]。主要為人參皂苷(Ginsenoside)Rb1、Re、Rg1、Rg2。并含有少量的 Rd、Re、Rh及七葉膽苷。另含有三七皂苷 (Notoginsenoside)R1、R2、R3、R4、R6等,這些皂苷均為達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷,其中除R4屬 20(S)-原人參二醇型皂苷外,其余均屬 20(S)-原人參三醇型皂苷[7]。從三七根的水溶性部分可得到止血有效成分田七氨酸(Dencichine),又名三七素,作為一種特殊氨基酸[2]。此外還含有黃酮苷,三七多糖及揮發(fā)油等成分。

1 實(shí)驗(yàn)部分 1.1 材料、試劑及儀器材料:太白三七的干燥根、三七皂苷 R1人參皂苷 Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷 Rg1(標(biāo)品由中國藥品生物制品檢定所提供 )試劑:甲醇 (色譜純 )、乙腈 (色譜純 )、乙醇、乙酸酐、硫酸、氯仿、五氯化銻、三氯醋酸、乙酰氯、硫酸銨等均為分析純。

儀器:Agilent1200型高效液相色譜儀 (美國Agilent公司)、微型植物試樣粉碎機(jī) FZ102型、真空干燥箱 DZF-6020型、SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 R1002、高速離心機(jī)。

1.2 三七總皂苷的提取將太白三七的干燥根粉碎成細(xì)粉,過 100目篩;精確稱取 10.00g三七粉末置于 250mL圓底燒瓶內(nèi),加入 8倍量于三七粉末的70%甲醇溶液,攪拌均勻;移入 75℃水浴中加熱回流提取 2次,每次 1.5 h。抽濾,合并濾液,即得太白三七的紅褐色粗提液。將三七粗提液控溫 50℃于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至浸膏狀,再加入少量水減壓濃縮至原體積的 1/5;濃縮液冷卻至室溫,滴加適量的濃硫酸調(diào)pH=1出現(xiàn)白色無定形粉末沉淀,傾去上清液將沉淀物放入干燥箱中干燥,即得三七總皂苷的白色無定形粉末粗品。

1.3 HPLC法測定太白三七中三七總皂苷的含量

1.3.1 色譜條件:色譜柱:Agilent Hypersil BDSC18色譜柱(4.6mm×250mm);流動相:乙腈:水 (80:20);流速:1.0mL/min;柱溫:室溫 (25℃ );檢測波長:202nm

1.3.2 溶液的制備:①供試品溶液:取上述 2.2所得三七總皂苷粗提液 1.00mL,轉(zhuǎn)移至 50 mL容量瓶中,加 70%甲醇溶液至刻度,搖勻,作為供試品溶液。②對照品溶液:精密稱取對照品三七皂苷 R1和人參皂苷 Rg1、Re、Rb1適量,加入甲醇溶液制成每 1.00 ml分別含 0.10,0.40,0.15,0.50 mg的混合溶液,即得。

按以上色譜條件得到標(biāo)品及太白三七藥材的色譜分離圖,如圖 1所示。

圖1 對照品(A)太白三七藥材(B)色譜圖

2 結(jié)果與討論 2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密吸取對照品溶液 3,6,9,12,15 μL,依次注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積 Y的常用對數(shù)為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣量 X的常用對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷 Rb1的線性回歸方程分別為:

2.2 測定結(jié)果精密吸取供試品溶液 10 μL注入高效液相色譜儀,依上述色譜條件測定,以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算太白三七中三七皂苷 R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量分別為 0.583%、2.287%、0.618%、0.849%,太白三七中三七總皂苷的含量為 4.337%。

2.3 結(jié)論 2.3.1太白三七中的總皂苷為其主要的有效成分之一,從太白三七的根中可分離鑒定出 12種單體皂苷,而三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、Rb1、Re又是總皂苷的主要組成,因此選取這些成分作為太白三七的質(zhì)量評價指標(biāo),可以有效的反映太白三七的內(nèi)在質(zhì)量。

2.3.2 太白三七中三七總皂苷的含量為 4.337%,測定結(jié)果表明太白三七中的有效成分三七總皂苷的含量較高[3],太白三七藥材的質(zhì)量較好。

2.3.3 高效液相色譜法(HPLC)作為一種新興的分析方法,測定太白三七中三七總皂苷的含量,方法簡便、快捷,對其他藥物中有效成分含量測定有一定的參考價值。

[1]陳 英,鄭 虎,徐文芳,等.三七總皂苷的藥理研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展 [J].廣西醫(yī)學(xué),1998,20(6):1109-1110.

[2]趙 平,王麗紅,姜永志,等.云南植物研究 [J].1993,15(4):409.

[3]謝 茵,邢桂琴,劉秀芬.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 [J],2006,37(6):613-615.