韓 樂,劉訓(xùn)紅,王麗娟,傅興圣

(南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210046)

地耳草揮發(fā)性成分HSGC/MS分析及其動(dòng)態(tài)研究

韓 樂,劉訓(xùn)紅,王麗娟,傅興圣

(南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210046)

探討地耳草揮發(fā)性成分的動(dòng)態(tài)積累,為確定地耳草的最佳采收期提供依據(jù)。采用 HSGC/MS法分析不同采收時(shí)間地耳草揮發(fā)性成分,并用峰面積歸一化法確定各成分的相對百分含量,以其中6種主要活性成分為指標(biāo),考察它們的動(dòng)態(tài)變化。初步分離鑒定出48種成分,其中共有成分22種,不同生長期地耳草揮發(fā)性成分積累具有一定規(guī)律。地耳草揮發(fā)性成分積累曲線最大峰值與傳統(tǒng)采收期基本一致。

地耳草;揮發(fā)性成分;頂空氣相色譜-質(zhì)譜;動(dòng)態(tài)變化

地耳草為較常用中藥,系藤黃科植物地耳草Hy pericum japonicumThunb.干燥全草,具有清熱利濕、解毒消腫之功效,主治濕熱黃疸、泄瀉、痢疾、瘡痂癰腫、急性腎炎、血吸蟲病等病癥,其注射液已廣泛用于臨床,治療急、慢性肝炎,效果顯著[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明,地耳草具有增強(qiáng)免疫和抗腫瘤的作用[2],地耳草揮發(fā)性成分中,順式-氧化芳樟醇有鎮(zhèn)靜、降血壓、抗菌等作用[3];D-檸檬烯能夠有效地抑制癌細(xì)胞的生長以及誘導(dǎo)凋亡[4];α-蒎烯和β-蒎烯有抗病毒、抗菌作用[5];氧化石竹烯(β-石竹烯)有平喘、鎮(zhèn)靜、抗癌作用[6];糠醛有較強(qiáng)的抗菌作用。本研究在地耳草品質(zhì)鑒定、指紋譜分析的基礎(chǔ)上[7-8],用HSGC/MS法分析不同采收時(shí)間的地耳草揮發(fā)性成分,并用峰面積歸一化法確定各成分的相對百分含量,以其中主要活性成分為指標(biāo),考察它們的動(dòng)態(tài)變化,為確定藥材的最佳采收期提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890/5975B型氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀:美國Agilent公司產(chǎn)品,G1701DAD.03.00.611工作站;Agilent G1888頂空自動(dòng)進(jìn)樣器:美國Agilent公司產(chǎn)品,NIST05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫。

不同采收時(shí)間的地耳草樣品 (080513、080523、080603、080613、080623、080703、080713、080723):采自福建省尤溪縣臺溪鄉(xiāng)臺溪村第二洋,經(jīng)作者鑒定為藤黃科植物地耳草Hy pericum japonicum Thunb.全草。留樣憑證存放于南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定實(shí)驗(yàn)室。

1.2 實(shí)驗(yàn)條件與方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:HP-5MS(5%苯甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱,30.0 m×250 μm×0.25μm);進(jìn)樣口溫度150℃;程序升溫:初溫40℃,保持 5 min,以2℃·min-1升至100℃,保持6 min,再以2.5℃·min-1升至180℃;載氣(He)流量1.0 mL·min-1;分流比20∶1。

1.2.2 質(zhì)譜條件 EI離子源,離子源溫度230℃,四極桿溫度150℃,接口溫度280℃,電子倍增器電壓1 329.4 V,電子能量70 eV,質(zhì)量掃描范圍m/z45～600。

1.2.3 分析方法 用 HP-5MS色譜柱對色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳分離條件。通過對藥材粉碎粒度、體積裝樣量、頂空加熱溫度及頂空加熱時(shí)間進(jìn)行考察,確定地耳草揮發(fā)性成分優(yōu)化的頂空條件。樣品按選定的頂空條件及分析條件進(jìn)行 HSGC/MS分析,利用NIST05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜檢索庫進(jìn)行檢索,峰面積歸一化法測定各組分的相對百分含量。

1.2.4 樣品分析 取3 g地耳草粉末(過80目篩),精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,110℃加熱平衡60 min,對地耳草揮發(fā)性成分進(jìn)行 GC/MS分析,獲得地耳草揮發(fā)性成分的總離子流色譜圖,示于圖1。所得質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理和標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索鑒定,并與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)譜圖核對,初步鑒定出48種組分;將總離子流圖中各峰面積進(jìn)行歸一化處理,測得地耳草頂空氣體中各組分的百分含量;以順式-氧化芳樟醇、D-檸檬烯、α-蒎烯、β-蒎烯、氧化石竹烯、糠醛等6種主要活性成分為指標(biāo),考察它們的動(dòng)態(tài)變化,結(jié)果示于表1,圖2。

圖1 地耳草揮發(fā)性成分總離子流色譜圖Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile components in Herba Hyperici Japonici

表1 不同采收時(shí)間地耳草揮發(fā)性成分鑒定結(jié)果Table 1 Identified components of volatile in Herba Hyperici Japonici at different harvest time

續(xù)表

圖2 不同采收時(shí)間地耳草揮發(fā)性成分中6種主要活性成分的含量變化Fig.2 Seasonal variation of 6 main boiactive components in Herba Hyperici Japonici

2 討 論

2.1 揮發(fā)性成分頂空條件的優(yōu)化

2.1.1 藥材粉碎粒度的考察 分別稱取2 g 30、40、60、80、100目藥材粉末,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,120℃加熱30 min。結(jié)果表明,40、30目藥材粉末所得色譜峰數(shù)比60目藥材峰數(shù)明顯要少,80目所得色譜峰數(shù)、峰高較60目要高,100目所得色譜峰數(shù)與80目所得色譜峰數(shù)基本相近,但峰高較80目低。可見藥材粉碎的粒徑越細(xì),目數(shù)越大,比表面積越大,粉末中的揮發(fā)性成分越易散發(fā)出來,但是粒徑過細(xì)則容易吸附在進(jìn)樣針上,造成污染,故粉碎粒度選擇80目藥材粉末。

2.1.2 體積裝樣量的考察 分別稱取4、3、2、1.5 g(占頂空瓶體積2/3、1/2、1/3、1/4的量)80目藥材粉末,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,120℃加熱30 min。結(jié)果表明, 1.5 g藥材所測出的色譜峰數(shù)較少;2 g藥材峰面積較小;3 g藥材測出的色譜峰較多,峰面積較大;4 g藥材測出的色譜圖不理想。原因可能是裝樣量過多,進(jìn)樣瓶底粉末中揮發(fā)性成分不容易散發(fā)出來,造成進(jìn)樣針的污染,過多的粉末會吸附在進(jìn)樣針上,故體積裝樣量選擇3 g。

2.1.3 頂空加熱溫度的考察 稱取3 g 80目藥材粉末,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,分別在90、100、110、120℃下加熱平衡60 min。結(jié)果表明,90℃和100℃加熱溫度下檢出的色譜峰明顯要少,110℃和120℃加熱檢出的色譜峰中前者峰高較大,故樣品加熱溫度選擇110℃。

2.1.4 頂空加熱時(shí)間的考察 稱取4份3 g 80目藥材粉末,精密稱定,置于頂空瓶中,密封,放入頂空進(jìn)樣器,120℃分別加熱30、40、50、60 min,取樣分析。結(jié)果表明,4種不同加熱時(shí)間下的峰數(shù)相差不多,加熱60 min的峰高較高,故樣品加熱平衡時(shí)間選擇60 min。

2.2 揮發(fā)性成分分析及其動(dòng)態(tài)變化

不同采收時(shí)間地耳草揮發(fā)性成分共分離出48個(gè)色譜峰,初步鑒定出48種成分,其中共有成分22種,分別為一氯甲烷、2-甲基-1,3-丁二烯、3-甲基呋喃、氯仿、2-甲基丁醛、2-乙基呋喃、甲苯、正己醛、5-(1,1-二甲基)環(huán)戊二烯、1,4-二甲苯、壬烷、α-蒎烯、安息香醛、2-戊基呋喃、癸烷、D-檸檬烯、2,6-二甲基-3,5-庚二酮、十一碳烷、正十三烷、β-石竹烯、α-石竹烯、環(huán)十二烷。

不同采收時(shí)間地耳草揮發(fā)性成分中6種主要活性成分分析顯示,糠醛含量以6、7月份較高,α-蒎烯含量以7月較高,β-蒎烯含量以6、7月較高,D-檸檬烯含量以7月份較高,順式-氧化芳樟醇含量以6、7月份較高,β-石竹烯(氧化石竹烯)含量以7月份較高;6種主要活性成分的總含量以7月份較高。

綜上,地耳草揮發(fā)性成分積累曲線最大峰值與傳統(tǒng)采收期基本一致,初步認(rèn)為6、7月份為適宜采收期。

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Study on the Dynamic Change of Volatile Components in Herba Hyperici Japonici by HSGC/MS

HAN Le,LIU Xun-hong,WAN G Li-juan,FU Xing-sheng
(N anjing University of Chinese Medicine,N anjing210046,China)

To reaserarch the dynamic change of volatile components in Herba Hyperici Japonici,and provide scientific basis for determining the best collecting time,the volatile components of Herba Hyperici Japonici from different harvesting time were analyzed by HSGC/MS.The relative content of the components were determined with peak area normalization method,and the dynamic change of 6 main boiactive components were determined.The results show that 48 constituents are separated and identified.There are 22 co-containing compounds in Herba Hyperici Japonici from different harvesting time.The accumulation of volatile components show a regular pattern.The main volatile components in Herba Hyperici Japonici are the highest in the traditional harvesting time.

Herba Hyperici Japonici;volatile components;HSGC/MS;dynamic change

O 657.63

A

1004-2997(2010)04-0247-05

2009-08-02;

2009-12-17

南京中醫(yī)藥大學(xué)“藥用生物資源研究與利用”優(yōu)秀科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃

韓 樂(1985～),男(漢族),碩士研究生,從事中藥品質(zhì)評價(jià)研究。E-mail:winner2243@sohu.com

劉訓(xùn)紅(1959～),男(漢族),教授,從事中藥材質(zhì)量分析及中藥鑒定學(xué)教學(xué)與研究。E-mail:liuxunh1959@sohu.com