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        HPLC法測(cè)定杯莧甾酮的血藥濃度

        2010-08-15 02:51:18266071濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院第一療養(yǎng)區(qū)潘靖
        關(guān)鍵詞:川牛膝法測(cè)定血藥濃度

        266071 濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院第一療養(yǎng)區(qū) 潘靖

        川牛膝為莧科植物川牛膝(Cyathula officinalis Kuan)的干燥根,主產(chǎn)于四川、云南、貴州等地,具有逐瘀通經(jīng),通利關(guān)節(jié),利尿通淋之功,用于胞衣不下、關(guān)節(jié)痹痛等[1]。其所含化合物類型主要有脂肪酸類、甾酮類、異黃酮類、齊墩果酸皂苷類化合物。根據(jù)近年來的文獻(xiàn)報(bào)道,蛻皮甾酮有促進(jìn)蛋白質(zhì)同化作用、抗血小板聚集、降低血糖等明顯的生理活性[2-3],與川牛膝補(bǔ)肝益腎、強(qiáng)筋健骨功效相符。杯莧甾酮(Cyasterone)(圖1)[4-5]在川牛膝中含量較大[6],可作為代表性藥物進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究。因此本文建立高效液相色譜法測(cè)定杯莧甾酮的血藥濃度為其進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

        圖1 杯莧甾酮的結(jié)構(gòu)式

        1 材料、儀器和動(dòng)物

        實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:大耳兔,體重2.0 kg,由湖州市藥檢所提供。實(shí)驗(yàn)前禁食24 h,自由飲水,室溫飼養(yǎng)。儀器:Waters高效液相色譜儀(515泵、2487紫外檢測(cè)器),7725 i手動(dòng)進(jìn)樣閥,針筒式微孔過濾器(0.45 μm,天津市騰達(dá)過濾器廠),GR-202 AND分析天平,UV-754型紫外可見分光光度計(jì),80-2臺(tái)式離心機(jī),XW-80 A渦流混旋器,BDS 160電熱恒溫水溫箱。杭州英譜工作站,AS 3120 A超聲儀。藥品和試劑:對(duì)照品,自制,TLC及HPLC檢測(cè)均為單峰。經(jīng)過UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、CD等測(cè)試鑒定為杯莧甾酮,純度為99.6%(HPLC-ELSD歸一化法測(cè)定)。乙腈、甲醇為色譜純;實(shí)驗(yàn)用水為重蒸去離子水。

        2 方法

        2.1 給藥 采用灌胃法[7]給藥,家兔稱重2.0 kg,按家兔體重25 mg/kg給藥。精密稱取杯莧甾酮對(duì)照品50.0 mg,溶于10 mL蒸餾水中,超聲成混懸液,吸于注射器中給藥。用5 mL蒸餾水清洗注射器。給藥前取血做空白血,給藥后不同時(shí)間取血,HPLC法測(cè)定兔血漿中杯莧甾酮的含量。

        2.2 血樣處理 取兔耳緣靜脈血,每次0.5 mL置于2 mL的真空采血管中(內(nèi)含枸椽酸鈉),加入乙腈2 mL,渦流混旋10 min,4 000 r/min離心10 min,取上清液水浴蒸干,殘?jiān)尤?.1 mL流動(dòng)相超聲溶解,分別過膜,HPLC測(cè)定杯莧甾酮的峰面積,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得杯莧甾酮的濃度。

        2.3 對(duì)照品溶液制備 精密稱取杯莧甾酮11.30 mg,置200 mL量瓶中,加50%甲醇水溶解并稀釋至刻度,搖勻,得56.5 μg/mL。取上述對(duì)照品溶液5 mL于50 mL量瓶中,用50%甲醇水定容,搖勻,即得 (每1 mL中含杯莧甾酮5.65 μg)。

        2.4 杯莧甾酮的紫外可見吸收光譜 取5.65 μg/mL的對(duì)照品溶液,以50%甲醇水作空白,在200~600 nm范圍內(nèi)掃描,得杯莧甾酮紫外可見吸收光譜,可知其在243 nm處有最大吸收。

        2.5 數(shù)據(jù)處理 血藥濃度和時(shí)間數(shù)據(jù)由3P87軟件處理。

        3 血液中杯莧甾酮的含量測(cè)定

        3.1 測(cè)試條件 色譜柱為Symmetry-C18(5 μm,3.9 mm×150 mm),流動(dòng)相為乙腈20 g、水80 g、磷酸二氫鉀1.36 g,流速1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)243 nm,進(jìn)樣量10 μL。柱溫室溫。

        3.2 方法學(xué)考察

        3.2.1 方法專屬性考察 空白血液、含藥血液樣品和對(duì)照品按3.1項(xiàng)方法各進(jìn)樣10 μL,HPLC圖譜(圖2 A、B、C)。

        圖2 色譜圖和線性圖

        3.2.2 穩(wěn)定性考察 取處理好的血液樣品,分別于 0 h、2 h、4 h、8 h、12 h 按項(xiàng)方法進(jìn)樣10 μL,計(jì)算杯莧甾酮的峰面積,RSD為2.32%,即樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性好。

        3.2.3 線性關(guān)系考察 分別取空白血漿0.5 mL于5個(gè)試管中,分別加入杯莧甾酮對(duì)照品溶液,制成濃度分別為:0.565 μg/mL、1.130 μg/mL、2.260 μg/mL、4.520 μg/mL、9.040 μg/mL。按2.1項(xiàng)下血樣處理過程處理后分別進(jìn)樣10 μL,3針/次,記錄其峰面積。以杯莧甾酮峰面積(Y)為縱坐標(biāo),杯莧甾酮的進(jìn)樣濃度(X)為橫坐標(biāo),由HS色譜數(shù)據(jù)工作站計(jì)算得杯莧甾酮回歸方程為Y=17 715X+759.517,r=0.999 0,在 0.565~9.040 μg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好(圖2 D)。

        3.2.4 回收率和精密度試驗(yàn) 于空白血液中加入高、中、低3個(gè)不同濃度的杯莧甾酮對(duì)照品液,制備得到分別含杯莧甾酮濃度為 9.040、2.260、0.565 μg/mL血液樣品,測(cè)定3個(gè)濃度血液中杯莧甾酮的回收率分別為:89.7%、90.2%、93.5%,平均回收率為91.1%,RSD=2.25%(n=5),日內(nèi)精密度RSD=±3.9%,日間精密度RSD=±7.3%。

        圖3 杯莧甾酮的血藥濃度-時(shí)間曲線

        4 結(jié)果與結(jié)論

        家兔經(jīng)口服給藥后,杯莧甾酮在家兔體內(nèi)吸收很快,20 min血液中可檢出杯莧甾酮(圖3);HPLC法測(cè)定家兔血液中杯莧甾酮的濃度,分離度好,方法簡(jiǎn)便、靈敏,可用于杯莧甾酮的血藥濃度測(cè)定和進(jìn)一步進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究。

        5 討論

        1)血樣的處理:作者先后采用多種蛋白沉淀方法,和多種萃取方法,包括甲醇、乙腈、丙酮、高氯酸、硫酸銨等方法。結(jié)果表明,杯莧甾酮提取率在乙腈、甲醇中較高,且在乙腈中提取較干凈、無干擾。因此采用乙腈沉淀蛋白并提取,方法簡(jiǎn)單,提取率又高。

        2)本文采用乙腈20 g、水80 g、磷酸二氫鈉1.20 g作為流動(dòng)相測(cè)定兔血漿中杯莧甾酮的濃度,杯莧甾酮的保留時(shí)間為14.4 min,平均回收率為85.5%。本方法操作省時(shí)、簡(jiǎn)便,精密度及重現(xiàn)性均較好[8-11]。

        [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(第一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:28.

        [2]徐楠杰,離月英,李銑.蛻皮甾酮的藥理作用研究進(jìn)展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1997,14(4):300-302.

        [3]陳辛,杜德極.拔毒散中抗血小板聚集活性成分[J].中草藥,1996,27(增刊):63.

        [4]Zhou R,Li B G,Zhang G L.Journal of Asian Natural Products Research[J].2005,7(3):245-252.

        [5] 陳幸,黎萬壽,梁溢,等.川牛膝化學(xué)成分的鑒定[J].中草藥,2004,35(9):978-979.

        [6]黎萬壽,陳幸,王曉陽,等.川牛膝的品質(zhì)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2003,17(4):18-20.

        [7]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1762.

        [8]陳幸,黎萬壽,崔紅,等.酶高效液相色譜法測(cè)定獨(dú)活寄生合劑中杯莧甾酮含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2003,23(8):451-452.

        [9]黎萬壽,陳幸,王曉陽,等.RP-HPLC法測(cè)定白毛夏枯草中杯莧甾酮的含量[J].中草藥,2002,33(10):898-899.

        [10]馬英,畢開順,王璽,等.HPLC法測(cè)定川牛膝中杯莧甾酮的含量[J].中草藥,2000,31(6):427-428.

        [11]陳幸,黎萬壽,朱久武,等.RP-HPLC法測(cè)定川牛膝中杯莧甾酮的含量[J].藥物分析雜志,2000,20(4):234-235.

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