王會，瞿宏杰

（襄樊職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖北襄樊，441050）

“紅臉頰”草莓是襄樊市賈洲草莓良種繁育基地2007年引進(jìn)，該品種具有生長勢強(qiáng)、果大、果面及果肉鮮紅色、甜酸適口、品質(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高、耐貯運(yùn)、中等抗病性等特點(diǎn)[1]，在襄樊試種后深受廣大草莓果農(nóng)的喜愛，目前已逐漸成為襄樊市替代豐香、紅實(shí)美等保護(hù)地栽培的主栽品種。但因該品種發(fā)根弱、育苗困難，極大地制約了紅臉頰草莓的發(fā)展，因此通過組織培養(yǎng)在短時(shí)間內(nèi)大量繁育紅臉頰草莓種苗，已成為推動襄樊市草莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)瓶頸。本研究旨在找出誘導(dǎo)紅臉頰草莓莖尖分化成苗的最佳條件，為紅臉頰草莓的快繁提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

無菌材料的獲得是在8月底晴天下午摘取剛抽出的紅臉頰草莓匍匐莖，用洗衣粉水浸泡15 min后流水沖洗，再放入75%酒精中浸30 s，然后用0.1%升汞溶液＋土溫80滅菌8～10 min，用無菌水沖洗4～5次，待用。

1.2 試驗(yàn)方法

①激素對紅臉頰草莓莖尖分化的影響 剝離0.5～0.6 mm 莖尖接種在以 MS+蔗塘 3%+瓊脂 6.5 g/L的基本培養(yǎng)基上，并添加生長素 IAA（0.05，0.1，0.2 mg/L）或 NAA（0.05，0.1，0.2 mg/L），同時(shí)以基本培養(yǎng)基作對照，每處理接種10瓶，每瓶一個(gè)莖尖，設(shè)3次重復(fù)，培養(yǎng)溫度23～25℃，暗培養(yǎng)5 d后采用2 000 lx的光強(qiáng)每日光照14 h，40 d后觀察莖尖分化生長狀況、成活率、萌芽率。

剝 離 0.5～0.6 mm 莖 尖 接 種 在 以 MS+NAA 0.1 mg/L+蔗塘3%+瓊脂6.5 g/L的培養(yǎng)基上，并添加細(xì)胞分 裂 素 6-BA （0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L） 或 KT （0.1，0.5，1.0，2.0 mg/L）誘導(dǎo)莖尖分化，每處理接種 10 瓶，每瓶一個(gè)莖尖，設(shè)3次重復(fù)。培養(yǎng)溫度23～25℃，暗培養(yǎng)5 d后采用2 000 lx的光強(qiáng)每日光照14 h，40 d后觀察莖尖分化生長狀況、成活率、萌芽率。

②光照對紅臉頰草莓莖尖分化的影響 光照長度設(shè)置光培養(yǎng)（14 h/d）、暗處理3 d后光培養(yǎng) 、暗處理5 d后光培養(yǎng)、暗處理8 d后光培養(yǎng)4個(gè)水平，光照強(qiáng)度設(shè)置 1 000，2 000，3 000，5 000 lx 4 個(gè)水平，構(gòu)成 16個(gè)處理，將 0.5～0.6 mm 莖尖接種于 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗塘 3%+瓊脂 6.5 g/L 的培養(yǎng)基上，每處理接種10瓶，每瓶一個(gè)莖尖，重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度23～25℃。培養(yǎng)40 d后觀察莖尖的成活率、萌芽生長狀況。

以上所有培養(yǎng)基pH值均為5.8，每個(gè)培養(yǎng)基瓶分裝培養(yǎng)基30 mL，用標(biāo)準(zhǔn)封口膜封口。培養(yǎng)基、燒杯、無菌水、鑷子、解剖針、濾紙及培養(yǎng)皿等試驗(yàn)用具均經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌，滅菌壓力為 1.06 kg/cm2，維持 20 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長素NAA、IAA對紅臉頰草莓莖尖分化的影響

表1表明，草莓的莖尖在不添加任何激素的MS培養(yǎng)基上也可以萌發(fā)成活，只是成活率較低（23.6%），轉(zhuǎn)綠生長緩慢，萌芽率也最低（16.7%）。在添加激素NAA或IAA的培養(yǎng)基中，莖尖成活率、萌芽率都顯著高于對照，說明生長素能促進(jìn)莖尖分化。同濃度的NAA和IAA對莖尖分化的效果相比，NAA誘導(dǎo)莖尖的成活率、萌芽率始終比IAA的高，所以NAA誘導(dǎo)紅臉頰草莓莖尖分化成苗效果比IAA的好。其中，在添加激素NAA 0.1 mg/L的培養(yǎng)基中，莖尖成活率最高（83.3%），萌芽率也最高（76.7%）；在該培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)成愈傷的莖尖只有2個(gè)，而誘導(dǎo)成芽的莖尖多達(dá)23個(gè)，占成活莖尖總數(shù)的92.0%，說明該培養(yǎng)基誘導(dǎo)紅臉頰草莓莖尖大部分不經(jīng)過愈傷而直接形成芽苗；但NAA濃度超過0.1 mg/L后，隨濃度的增大成苗的莖尖數(shù)降低，莖尖成活率也有所降低，可能是較高的生長素濃度促進(jìn)莖尖愈傷化，減少了芽苗的分化。

將NAA不同濃度誘導(dǎo)的莖尖成活率、萌芽率繪成圖。由圖1可見，NAA濃度為0～0.15 mg/L時(shí)，隨著濃度增加莖尖成活率是逐漸增大，而莖尖萌芽率在NAA濃度為0～0.1 mg/L時(shí)，隨著濃度增加逐漸增大的，但在 0.1～0.15 mg/L 反而降低，超過 0.15 mg/L 下降更多，只有 NAA 濃度為 0.1～0.15 mg/L 時(shí)，既有較高的成活率，也有較高的萌芽率；由于草莓莖尖分化培養(yǎng)既要求有較高的成活率，也要求有較高的萌芽率，所以圖 1 說明，NAA 濃度在 0.1～0.15 mg/L 范圍內(nèi)最有利于誘導(dǎo)草莓莖尖分化成芽苗。但考慮到降低組培成本，以NAA用量為0.1 mg/L為最適宜。

表1 NAA與IAA對草莓莖尖分化培養(yǎng)的影響

圖1 NAA用量與成活率、萌芽率之間的關(guān)系

2.2 細(xì)胞分裂素KT、6-BA對紅臉頰草莓莖尖分化的影響

在 MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖 3%+瓊脂 6.5 g/L 的培養(yǎng)基上研究6-BA或KT對誘導(dǎo)草莓莖尖分化成苗的影響。由表2可知，同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA與KT對莖尖分化成苗的影響，6-BA好于KT。以6-BA 0.5 mg/L 的處理萌芽率最高 （86.7%）， 其次是 KT 0.5 mg/L的處理，萌芽率為69.0%。但同一激素的不同濃度對草莓莖尖分化的萌芽率、成芽數(shù)、芽高度的影響不同。在0.5～2.0 mg/L范圍內(nèi)，隨細(xì)胞分裂素濃度增加，莖尖分化的萌芽率、成芽數(shù)、芽高度逐漸降低。如6-BA 2.0 mg/L的處理萌芽率只有32.0%，芽高度只有0.24 cm，而且試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)大部分莖尖形成團(tuán)狀芽苞組織，難以形成可切割的小芽苗；在KT 2.0 mg/L的較高濃度處理中，萌芽率只有26.6%，芽高度只有0.16 cm，大部分莖尖也形成團(tuán)狀芽苞組織。說明較高的細(xì)胞分裂素濃度有抑制植株主莖伸長，促進(jìn)芽增殖的作用。所以在 MS+NAA 0.1～0.15 mg/L+蔗糖 3%+瓊脂 6.5 g/L的培養(yǎng)基上，添加6-BA0.5 mg/L對莖尖分化成苗培養(yǎng)效果最好，0.61 cm高的芽苗很容易切割轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。

2.3 光照對紅臉頰草莓莖尖分化的影響

本試驗(yàn)中0.5～0.6 mm莖尖在不同光照條件下培養(yǎng)萌芽率（3次試驗(yàn)平均值）表現(xiàn)見表3。由表3可知，相同光照強(qiáng)度條件下，暗處理的莖尖萌芽率高于光培養(yǎng)，其中以暗處理5～8 d的萌芽率較高，而暗處理5 d和8 d的萌芽率差異不顯著。另外，暗培養(yǎng)8 d的成活率雖然比暗培養(yǎng)5 d的略高，但在觀察中發(fā)現(xiàn)暗培養(yǎng)時(shí)間越長芽苗初始萌發(fā)的時(shí)間越久，因此，紅臉頰草莓莖尖分化成苗以暗處理5 d最合適。

表2 KT與6-BA對草莓莖尖分化培養(yǎng)的影響

在相同的光照長度條件下，1 000～2 000 lx范圍內(nèi)，隨著光照強(qiáng)度增大，莖尖萌芽率逐漸增大，超過2 000 lx光照強(qiáng)度，莖尖萌芽率反而降低，所以2 000 lx的光照強(qiáng)度最有利于草莓莖尖分化成苗。綜上所述，暗處理5 d，光照強(qiáng)度為2 000 lx最有利于草莓莖尖分化成苗。

表3 不同光照條件下莖尖培養(yǎng)萌芽率 %

另外本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，紅臉頰草莓莖尖在光培養(yǎng)中出現(xiàn)了輕微的褐變，暗培養(yǎng)的則沒有褐變現(xiàn)象。說明暗培養(yǎng)有助于減少多酚物質(zhì)對莖尖的毒害作用，提高莖尖的成活率。

3 小結(jié)與討論

①莖尖分化培養(yǎng)中，眾多研究表明，6-BA對植物最明顯作用是誘導(dǎo)細(xì)胞分裂并調(diào)節(jié)分化，單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素，只有芽的分化，不利于莖的伸長。在一定濃度范圍內(nèi)，單獨(dú)使用生長素，只對苗的增高有作用，不利于芽的分化和增殖。生長素和細(xì)胞分裂素只有適當(dāng)?shù)臐舛扰浔龋拍苁狗只蜕L達(dá)到最佳點(diǎn)。郝文勝等[2]通過試驗(yàn)認(rèn)為，0.2 mg/L 6-BA對莖尖發(fā)育有抑制作用。劉衛(wèi)平等[3]的試驗(yàn)表明，6-BA的濃度愈高，分化芽愈多，但隨著濃度的升高，形成玻璃化苗的可能性增大。本試驗(yàn)表明，草莓莖尖在空白MS培養(yǎng)基上可以分化成芽苗，但添加外源生長調(diào)節(jié)劑后可以明顯提高萌芽率。其中，NAA對促進(jìn)莖尖分化的效果比IAA好，這可能與植物對激素的種類選擇性及IAA穩(wěn)定性較 NAA 高有一定的關(guān)系。 以 NAA 0.1～0.15 mg/L 的莖尖成活率、萌芽誘導(dǎo)率都較高，降低NAA的使用濃度，莖尖轉(zhuǎn)綠慢，生長較弱，提高濃度后容易導(dǎo)致莖尖愈傷化。6-BA誘導(dǎo)草莓莖尖分化效果優(yōu)于KT，以6-BA 0.5 mg/L 的處理萌芽率最高（86.7%），但細(xì)胞分裂素濃度超過0.5 mg/L時(shí)，萌芽率與芽高度顯著降低，而且部分莖尖形成團(tuán)狀芽苞組織。這也驗(yàn)證了較高的細(xì)胞分裂素濃度有抑制植株主莖伸長促進(jìn)芽增殖的作用。因此，在考慮降低組培快繁成本后，本研究表明6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L的激素配比是誘導(dǎo)紅臉頰草莓莖尖分化成苗的最佳激素組合。

②光照對植物的細(xì)胞、組織、器官的生長和分化具有很大的影響。莖尖組織培養(yǎng)中，通常光培養(yǎng)效果比暗培養(yǎng)要好，Dale在多花黑麥草中發(fā)現(xiàn)，光照度 （6 000 lx）培養(yǎng)的莖尖，59%能再生植株，而暗培養(yǎng)的僅有34%成苗[4]。在草莓莖尖培養(yǎng)中，目前還沒有類似的報(bào)道，但已有暗培養(yǎng)誘導(dǎo)葉片分化比光培養(yǎng)效果好的報(bào)道[5～6]。本研究也表明，暗處理有利于提高紅臉頰草莓莖尖的萌芽率，但暗處理的時(shí)間過長會延遲芽的萌發(fā)。以暗處理5 d效果最好。這與王海波等[5]、周厚成等[6]人研究結(jié)果一致，但與Dale的結(jié)論相反，可能是種質(zhì)差異原因引起的。光照強(qiáng)度對莖尖分化培養(yǎng)也有影響，過高和過低草莓萌芽率都較低，以2 000 lx效果最好，萌芽率達(dá)到86.7%，因此在“紅臉頰”草莓莖尖分化培養(yǎng)中，暗處理5 d后采用2 000 lx光照光培養(yǎng)（14 h/d）的條件最有利。

[1]李彩華，劉玲艷.“紅臉頰”草莓組培快繁技術(shù)研究[J].黑龍江科技信息，2007（5）：138.

[2]郝文勝，趙永秀，趙青輝，等.我國馬鈴薯莖尖培養(yǎng)脫毒和脫毒試管苗微繁研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2005（增刊）：27-33.

[3]劉衛(wèi)平，李玉華，孫秀梅，等.馬鈴薯離體莖尖生長點(diǎn)對幾種培養(yǎng)因子的生長反應(yīng)[J].中國馬鈴薯，2001（2）：82.

[4]吳殿星，胡繁榮.植物組織培養(yǎng)[M].上海：上海交通大學(xué)出版社，2004.

[5]王海波，劉慶忠.草莓葉片再生體系研究初報(bào)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[6]周厚成，羅靜，趙霞，等.不同培養(yǎng)條件對幸香草莓離體葉片再生的影響[J].果樹學(xué)報(bào)，2007，24（1）：105-108.