田 磊

（淮北礦業(yè)股份有限公司職業(yè)病防治院藥劑科，安徽 淮北 235000）

華蟾素片為干蟾皮經(jīng)加工制成的浸膏片，具有解毒、消腫、止痛的功效，對(duì)治療中、晚期腫瘤及慢性乙型病毒性肝炎等有良好療效[1]，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)[2]。為有效控制藥品質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-4]，以制劑中主要成分吲哚類總生物堿5-羥色胺為指標(biāo)，建立了華蟾素片釋放度和含量的測定方法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

ZRS-8G型智能溶出度測定儀（天津大學(xué)無線電廠）；UV-2401型紫外分光光度計(jì)（日本島津）；梅特勒AE-240型電子分析天平。5-羥色胺對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111656-200401）；華蟾素片（安徽金蟾生化股份有限公司，規(guī)格為0.3 g，批號(hào)分別為 090601，090602，090603）；鹽酸、對(duì)二甲氨基苯甲醛、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 5-羥色胺含量測定

2.1.1 溶液制備

精密稱取置五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的5-羥色胺對(duì)照品9.31 mg，置50 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取本品10片，除去包衣，碾細(xì)，稱取約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）適量，超聲處理10 min，放冷，用鹽酸溶液（9→1000）稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液5 mL，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，搖勻，加15%對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅣA]，以水作空白，在555 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0.03841 X-0.00210，r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，5-羥色胺質(zhì)量濃度在 1.862 ～18.620 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液4 mL，置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，搖勻，加15%對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，依法測定吸光度。結(jié)果的 RSD=0.02%（n=6），表明方法精密度較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為090601）樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果每片平均含量為0.4383 mg，RSD=0.07%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為090601）供試品溶液，于3 h內(nèi)每隔30 min依法測定吸光度。結(jié)果的 RSD=0.28%（n=7），表明供試品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取本品10片，除去包衣，碾細(xì)，稱取約0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分成3份，每份分別精密加入對(duì)照品溶液3，4，5 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結(jié)果見表1。

表1 5-羥色胺加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.1.3 樣品含量測定

取本品10片，依法制備供試品溶液，按線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法測定吸光度，用回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為090601，090602，090603的樣品中，每片分別含5-羥色胺0.4382，0.4345，0.4356 mg（n=3）。

2.2 釋放度測定

2.2.1 測定條件選擇

釋放方法：本品為腸溶片，應(yīng)先以鹽酸溶液（9→1000）為溶劑，再以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）為溶出溶劑。由于本品中5-羥色胺含量較低，因而在釋放度測定方法選擇時(shí)，宜選用2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩD收載的釋放度試驗(yàn)第二法并采用溶出度測定法（附錄ⅩC第三法）裝置試驗(yàn)為宜，釋放介質(zhì)量選用100 mL。

釋放轉(zhuǎn)速：取樣品，每溶出杯放置5片，轉(zhuǎn)速分別為50，75，100 r/min，依釋放度測定方法項(xiàng)下方法操作，于45 min時(shí)取樣，測定釋放百分率。由表2可見，當(dāng)轉(zhuǎn)速為75 r/min和100 r/min時(shí)，5-羥色胺的45 min累積釋放百分率接近，且優(yōu)于50 r/min。綜合考慮，選擇釋放轉(zhuǎn)速為75 r/min。

表2 釋放轉(zhuǎn)速選擇試驗(yàn)45 min時(shí)的結(jié)果

2.2.2 釋放度均一性試驗(yàn)

取本品5片，按釋放度測定方法項(xiàng)下方法操作，于5，10，15，30，45，60 min時(shí)分別取樣，每次10 mL，然后補(bǔ)入10 mL已預(yù)熱至37.5℃的溶劑。將取出的樣品測定釋放百分率，繪制釋放曲線。結(jié)果見圖 1?？梢姡瑯悠吩谌艹?0 min后，累積釋放百分率高于70%，45 min后累積釋放百分率趨于穩(wěn)定。

2.2.3 釋放度測定方法

取本品，每杯置5片，照釋放度測定法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩD第二法（二）]，采用溶出度測定法[2005 年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩC第三法]裝置試驗(yàn)。先以鹽酸溶液（9→1000）100 mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速75 r/min，依法操作，經(jīng)2 h后棄去鹽酸溶液，檢查每片腸膜均不得有裂縫，繼以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）100 mL 為 釋 放介質(zhì)，經(jīng)45 min時(shí)取溶液適量，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，精密吸取濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加15%對(duì)二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅣA]，以水作空白，在555 nm波長處測定吸光度。另精密稱取5-羥色胺對(duì)照品適量，加水使溶解并配制成相應(yīng)的對(duì)照品溶液，依法測定其吸光度。以外標(biāo)法計(jì)算，計(jì)算結(jié)果與每片中的平均含量相比較，即得每片的釋放百分率。

圖1 3批樣品釋放曲線

3 討論

對(duì)華蟾素片中吲哚類生物堿的含量測定采用分光光度法，其基本原理是吲哚類生物堿分子中的芳伯氨基可與芳醛（如對(duì)二甲氨基苯甲醛）發(fā)生縮合反應(yīng)，在酸性溶液中生成有色的希夫氏堿，這種有色物質(zhì)在某個(gè)波長處有明顯的吸收峰。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法合理、有效，專屬性強(qiáng)，顯色穩(wěn)定且重現(xiàn)性好。樣品的釋放度測定中，樣品的批內(nèi)釋放均一性與批間釋放重現(xiàn)性均較好，表明建立的釋放度測定方法可行。

本試驗(yàn)建立的釋放度和含量測定方法簡便、準(zhǔn)確，靈敏度高，且費(fèi)用低廉，與高效液相色譜法等[5-6]方法相比，更適合于基層醫(yī)院制劑或制藥企業(yè)生產(chǎn)工藝流程中間環(huán)節(jié)的質(zhì)量監(jiān)控。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典臨床用藥須知（中藥卷）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：61-62.

[2]WS3-B-2687-97，中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十四冊(cè)）[S].

[3]WS3-B-2132-96，中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十一冊(cè)）[S].

[4]WS3-B-3045-98，中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十六冊(cè)）[S].

[5]張紅霞，于 輝，張 磊，等.HPLC法測定華蟾素注射液中華蟾素含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 武警醫(yī)學(xué)，2008，19（8）：722-723.

[6]王建化.RP-HPLC法測定華蟾素片中華蟾毒配基、酯蟾毒配基的含量[J]. 中國中醫(yī)藥科技，2009，16（2）：125-126.