潘俏鳳

（廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院，廣東廣州 510150）

鹽酸左旋多巴甲酯是左旋多巴衍生化的產(chǎn)物，為抗震顫麻痹類神經(jīng)性藥物左旋多巴的前體藥物，具有易溶于水、易進(jìn)入血-腦屏障，易制成各種口服劑型和注射劑，吸收快，生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)[1]，但有關(guān)鹽酸左旋多巴甲酯含量的測定方法目前報(bào)道少見，本文采用高效液相色譜法對鹽酸左旋多巴甲酯進(jìn)行了含量測定的研究，建立含量測定方法，旨在為鹽酸左旋多巴甲酯的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，配有Agilent Eelipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱、emstation 化學(xué)工作站（Agilent）；FA 1004型電子天平（上海精科天平儀器廠）；KS-6000超聲波清洗機(jī)（寧波科聲儀器廠）；ZK-82A型真空干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；TDL-40B臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

1.2 試藥

鹽酸左旋多巴甲酯標(biāo)準(zhǔn)品（批號：20091145，中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014、2009015、2009016，自制）；甲醇（色譜醇），三氟乙酸（分析純），磷酸（分析純），鹽酸（分析純），無水乙醇（分析醇）。實(shí)驗(yàn)用水為雙重蒸餾水。所有試劑均經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾并超聲脫氣。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取干燥至恒重鹽酸左旋多巴甲酯對照品25 mg，以流動(dòng)相作溶劑，配成濃度為0.25 mg/ml的對照品溶液，放入冰箱貯存，備用。

2.2 供試品溶液的制備

取鹽酸左旋多巴甲酯供試品25 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

采用 Agilent Eelipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH=3.5）=20∶80；流速：1.0 ml/min；檢測波長：280 nm；柱溫：20℃；進(jìn)樣量：20 μl。取上述制備的對照品溶液、供試品溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，鹽酸左旋多巴甲酯保留時(shí)間約為 4.5 min，理論板數(shù)大于3000，在此色譜條件下，鹽酸左旋多巴甲酯色譜峰達(dá)到基線分離。結(jié)果見圖1。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密取標(biāo)準(zhǔn)溶液 1、2、4、6、8 ml分別置 10 ml量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配制成不同濃度的溶液，分別吸取上述溶液各20 μl，分別進(jìn)樣測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），質(zhì)量濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=12072X-83.53（r=0.9999），鹽酸左旋多巴甲酯進(jìn)樣量在25.65～256.50 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下方法配制對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果鹽酸左旋多巴甲酯峰面積的RSD=0.99%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

圖1 HPLC色譜圖（A.對照品；B.供試品）Fig.1 HPLC chromatography(A.Reference substance;B.Sample)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，在室溫下放置，于0、2、4、6、8、12、24 h 分別進(jìn)樣，并測定峰面積。 結(jié)果 RSD=0.69%（n=5），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014）適量，按“2.2”項(xiàng)下方法配制樣品溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，計(jì)算鹽酸左旋多巴甲酯含量。結(jié)果RSD=0.872%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，每份約10 mg，分別加入鹽酸左旋多巴甲酯對照品適量，按“2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，按上述色譜條件測定，平均回收率為99.02%，RSD=1.34%（n=6）。表明本法回收率較好，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.9 樣品含量測定

取不同批號的鹽酸左旋多巴甲酯樣品（批號：2009014、2009015、2009016），各 3 份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按上述設(shè)定的色譜條件測定樣品中鹽酸左旋多巴甲酯的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

左旋多巴是人體內(nèi)合成去甲腎上腺素及多巴胺等的前體物，能透過血-腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)，經(jīng)多巴脫羧酶轉(zhuǎn)化成多巴胺，增加大腦紋狀體中多巴胺含量，從而成為目前最有效的帕金森病（PD）的治療藥物[2]，但左旋多巴在體內(nèi)難以進(jìn)入人體的血-腦屏障，因此對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，對其進(jìn)行衍生化成鹽酸左旋多巴甲酯[3]。

目前，有關(guān)藥物分析的方法較多，但由于HPLC和其他分離分析方法相比，具有柱效高、靈敏度高、分離速度快、適用范圍廣、重現(xiàn)性好、操作方便等優(yōu)點(diǎn)，很快在藥物分析中被廣泛的應(yīng)用，成為藥物質(zhì)量控制的重要手段[4-9]。實(shí)踐表明，HPLC是一種非常有效和普遍適用的藥物成分分析方法。本文在實(shí)驗(yàn)過程中較詳細(xì)地考查了色譜分離檢測參數(shù)，包括流動(dòng)相的組成比例、檢測波長、柱溫和流速等對鹽酸左旋多巴甲酯分離測定的影響。鹽酸左旋多巴甲酯紫外檢測在280 nm處有最大吸收且吸收值較穩(wěn)定，不受鹽酸濃度的影響，故本研究以280 nm波長用于其含量的分析。在流動(dòng)相的選擇中，筆者對流動(dòng)相中甲醇與緩沖溶液的比例及緩沖溶液的pH值進(jìn)行了優(yōu)化，兩者均對保留時(shí)間有較大影響，pH值對峰形也有較大影響，在pH值為3.5時(shí)得到最佳的峰形。通過本實(shí)驗(yàn)，筆者得出了鹽酸左旋多巴甲酯的最佳色譜分離條件，并對樣品分析的回收率和精密度進(jìn)行了測定，建立了鹽酸左旋多巴甲酯含量測定的HPLC測定方法，該法操作重復(fù)性良好，準(zhǔn)確度較高，因此，該法能用于鹽酸左旋多巴甲酯的質(zhì)量控制。

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