丁德芳，楊順義，符海波，沈慧敏

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070）

番茄灰霉病（Botrytis cinereaPers.）和黃瓜黑星?。–ladosporium cucumerinumEll.）是日光溫室蔬菜的常發(fā)性病害，隨著規(guī)模蔬菜產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，二者已成為蔬菜生產(chǎn)中的主要病害，嚴(yán)重影響了蔬菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。生產(chǎn)上主要使用化學(xué)殺菌劑對其進(jìn)行防治，化學(xué)農(nóng)藥的長期使用,不但增強(qiáng)了病原菌的抗藥性，而且?guī)砹宿r(nóng)藥高殘留和環(huán)境污染等一系列問題。因此，使用低毒、低殘留、無公害的藥劑來替代化學(xué)藥劑，是綠色蔬菜生產(chǎn)的迫切要求。植物源農(nóng)藥以其低殘留、低毒或無毒、不易產(chǎn)生抗藥性以及易與其他藥劑混配等特點(diǎn)受到人們的青睞[1]。

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院農(nóng)藥系研制的30%蒼耳素EC是以蒼耳有效抑菌成分—蒼耳素為原料開發(fā)出的植物源殺菌劑,該藥劑對蔬菜常見病害具有較高的抑菌作用[2-3]。為了明確30%蒼耳素EC對蔬菜病害的防治效果，筆者以番茄灰霉病、黃瓜黑星病為供試菌，進(jìn)行了藥效評價(jià)試驗(yàn)，旨在為該藥劑的大面積使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

30%蒼耳素EC，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥系加工；50%撲海因WP，連云港市德倫農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)。

1.2 供試病菌

番茄灰霉病菌（Botrytis cinereaPers.），黃瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinumEll.），由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 30%蒼耳素EC對供試病菌的藥效評價(jià)方法

1.3.1 30%蒼耳素乳油的加工 30%蒼耳素EC由蒼耳提取液、溶劑、助溶劑、紫外保護(hù)劑、乳化劑按一定比例加工配制而成。

1.3.2 室內(nèi)毒力測定[4]采用含毒介質(zhì)培養(yǎng)法測定乳油的抑菌效果。在培養(yǎng)好的番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌菌落邊緣用內(nèi)徑6 mm的打孔器打取菌餅，置于含系列藥劑質(zhì)量濃度的PDA平板上（見表1），每處理重復(fù)3次，以加無菌水的培養(yǎng)基為空白對照。然后，將其放入25℃恒溫箱中培養(yǎng)3 d，用十字交叉法定期測量菌落直徑。計(jì)算病菌生長抑制率和 EC50。抑制率的計(jì)算見公式（1）、（2）。

1.3.3 離體組織測定 參考李樹正[5]方法并有所修改，用黃瓜子葉測定供試藥液對供試菌的藥效,敘述如下。（1）菌種制備。將供試菌接種于PDA培養(yǎng)基中部，在（23±1）℃條件下培養(yǎng) 4 d 后備用；（2）子葉制備。供試黃瓜品種為“津研5號(hào)”，培育子葉期黃瓜幼苗，待子葉充分展開后摘取生長一致的子葉，將脫脂棉浸水后包裹葉柄，然后置于90 mm培養(yǎng)皿中（培養(yǎng)皿底部墊有浸水海綿，上覆一層濾紙）備用；（3）處理及對照設(shè)置。每處理一片子葉，重復(fù)3次，以50%撲海因WP 1 000倍為藥劑對照，清水為空白對照；（4）保護(hù)作用。采用浸漬法（將子葉于藥液內(nèi)浸2～3 min）進(jìn)行處理，藥液蔭干后用打孔器在菌落外緣打取菌餅（Φ=6.0 mm）并置于子葉中心部，在人工氣候箱中（溫度為（23±1）℃，光照 13 h、黑暗 11 h交替）培養(yǎng)至空白對照充分發(fā)病后測量病斑直徑；（5）治療作用。子葉接種供試菌后，在人工氣候箱中培養(yǎng)至初見病斑時(shí)，采用浸漬法進(jìn)行處理，其它方法同保護(hù)作用。防治效果的計(jì)算見公式（3）。

1.4 田間藥效試驗(yàn)

1.4.1 試驗(yàn)方法 依30%蒼耳素EC濃度的不同，試驗(yàn)設(shè) 834、1 070、1 500、2 550、7 500 mL/hm2共 5個(gè)處理，以50%撲海因WP 750 g/hm2為對照藥劑，以清水為對照（CK），小區(qū)面積15 m2，各小區(qū)間設(shè)有保護(hù)行，每處理4次重復(fù),共計(jì)28個(gè)小區(qū)，小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組排列。

黃瓜黑星病第1次施藥時(shí)間為2009年5月10日，第2次施藥時(shí)間為5月17日；番茄灰霉病第1次施藥時(shí)間2009年6月1日，第2次施藥時(shí)間為6月8日。選用奧晟WFB-18AC型背負(fù)式噴霧機(jī)按750 kg/hm2的藥液量噴于葉片正、背面均勻噴霧。

1.4.2 調(diào)查時(shí)間與方法[6-7]每小區(qū)5點(diǎn)取樣，每點(diǎn)確定2株進(jìn)行標(biāo)記，每株上、中、下部各取5片葉。根據(jù)每個(gè)小區(qū)番茄葉片灰霉病和黃瓜黑星病的發(fā)生情況，以每片葉上的病斑面積占整個(gè)葉面積的百分率進(jìn)行分級，調(diào)查病葉級數(shù)并觀察藥劑對作物的直接影響。按分級標(biāo)準(zhǔn)記載并計(jì)算病情指數(shù)及防治效果，見公式（4）、（5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 30%蒼耳素乳油對供試病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果

30%蒼耳素乳油對供試病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果見表1。結(jié)果表明：30%蒼耳素EC對番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌都有較高的抑菌作用。在供試濃度為3 mg/mL時(shí)，對番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌的抑制率分別達(dá)到81.77%、82.34%，抑菌毒力EC50值分別為0.471 8、0.958 6 mg/mL。對照藥劑50%撲海因WP 0.5 mg/mL對番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌的抑制率分別達(dá)到97.24%、98.94%。30%蒼耳素EC對番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌的抑制率略低于50%撲海因WP。

表1 30%蒼耳素乳油對供試病菌的抑菌作用

2.2 離體組織測定

2.2.1 30%蒼耳素乳油對番茄灰霉病的保護(hù)作用和治療作用測定結(jié)果 如表2所示，在保護(hù)作用和治療作用下，供試藥劑對番茄灰霉病的防效隨濃度的提高而遞增，呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。對照藥劑50%撲海因WP在0.5 mg/mL濃度下，處理48 h后對番茄灰霉病的保護(hù)作用和治療作用的防效分別為45.52%、48.53%。與對照藥劑相比，30%蒼耳素EC 1 mg/mL的處理對番茄灰霉病的保護(hù)作用未表現(xiàn)出顯著性差異，而治療作用顯著低于對照藥劑；30%蒼耳素EC 3 mg/mL的處理對番茄灰霉病的保護(hù)作用顯著高于對照藥劑，而治療作用未表現(xiàn)出顯著性差異。

表2 30%蒼耳素乳油對番茄灰霉病的室內(nèi)毒力測定結(jié)果（黃瓜子葉法）

2.2.2 30%蒼耳素EC對黃瓜黑星病保護(hù)作用和治療作用測定結(jié)果 如表3所示，30%蒼耳素EC對黃瓜黑星病均有一定的保護(hù)作用和治療作用。在保護(hù)作用和治療作用下，供試藥劑對黃瓜黑星病的防效隨濃度的提高而遞增，呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。對照藥劑50%撲海因WP在0.5 mg/mL濃度下，處理48 h后對黃瓜黑星病的保護(hù)作用和治療作用的防效分別為40.21%、43.44%。30%蒼耳素EC 3 mg/mL的處理，對黃瓜黑星病的保護(hù)作用顯著高于對照藥劑，而治療作用極顯著低于對照藥劑。

表3 30%蒼耳素乳油對黃瓜黑星病的室內(nèi)毒力測定結(jié)果（黃瓜子葉法）

2.3 田間藥效試驗(yàn)

2.3.1 30%蒼耳素乳油對番茄灰霉病的田間防效由表4結(jié)果顯示,30%蒼耳素EC在藥劑用量為834～7 500 mL/hm2，第 1 次和第 2 次施藥 7 d 后，對番茄灰霉病的防效分別為25.91%～62.60%和27.12%～67.76%，第2次施藥14 d后，對番茄灰霉病的防效略有升高，為28.93%～72.03%。這表明蒼耳素前期藥效緩慢，速效性一般，持效佳。對照藥劑50%撲海因WP在藥劑用量為 750 g/hm2時(shí)，第2次施藥14 d后，對番茄灰霉病防效為64.17%。30%蒼耳素EC 7 500 mL/hm2的防治效果高于對照藥劑的同期防效。從總體來看，30%蒼耳素EC各藥劑處理對番茄灰霉病的防效明顯,14 d后仍有防效，且防效高于前期，表現(xiàn)出很好的持效性。

2.3.2 30%蒼耳素乳油對黃瓜黑星病的田間防效

由表5可知,30%蒼耳素EC在藥劑用量為834～7 500 mL/hm2時(shí)，第1次和第2次施藥7 d后，對黃瓜黑星病的防效分別為24.18%～53.82%和25.50%～56.88%，14 d后，對黃瓜黑星病的防效略有升高，為28.84%～60.12%。這表明蒼耳素前期藥效緩慢，速效性一般，持效佳。對照藥劑50%撲海因WP 750 g/hm2，第2次施藥7 d和14 d后，對黃瓜黑星病防效分別為62.92%和62.07%。30%蒼耳素EC 7 500 mL/hm2施藥14 d后對黃瓜黑星病的防效與對照藥劑50%撲海因WP無顯著差異，表現(xiàn)出良好的持效性。

表4 30%蒼耳素乳油對防治番茄灰霉病田間防效

表5 30%蒼耳素乳油對防治黃瓜黑星病田間防效

3 結(jié)論與討論

30%蒼耳素EC是從植物蒼耳中提取出來的殺菌活性成分，是一種植物源殺菌劑，具有保護(hù)和治療雙重作用。30%蒼耳素EC對番茄灰霉病菌和黃瓜黑星病菌具有一定的抑菌毒力（EC50分別為0.471 8、0.958 6 mg/mL），也有一定的保護(hù)作用和治療作用，且保護(hù)作用優(yōu)于治療作用。田間藥效試驗(yàn)表明：第2次施藥14 d后，30%蒼耳素EC 7 500 mL/hm2對兩種病害的田間防效分別為72.03%和60.12%，對番茄灰霉病的防效顯著高于對照藥劑50%撲海因WP常用劑量的防效，對黃瓜黑星病的防效與對照藥劑50%撲海因WP無顯著差異。這表明30%蒼耳素EC對兩種病害有良好的防效，速效性一般，持效性好，14 d后仍有防效。

室內(nèi)毒力測定結(jié)果與田間實(shí)際防效存在一定差異，其原因可能是田間防效受作物、病菌、環(huán)境條件等多種因素影響。30%蒼耳素EC田間防治蔬菜病害具有良好的效果，對試驗(yàn)作物無任何不良影響，可在生產(chǎn)中使用。最佳施藥時(shí)期是在發(fā)病前或初見病斑時(shí)，施藥越早，防病效果越好。在生產(chǎn)上，施用30%蒼耳素EC 2 550～7 500 mL/hm2，7 d左右噴灑1次，連續(xù)施藥2～3次，可達(dá)到理想的防治效果。

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