王 健,史 玉,張永澤,李清梅,門金娥

(1.河北工程大學(xué) 教務(wù)處,河北邯鄲 056038;2.河北工程大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,河北 邯鄲 056038;3.永年縣第一醫(yī)院,河北 邯鄲056000)

魚腥草(Houttuynia cordata)為三白草科蕺菜屬多年生草本植物,因全株有魚腥味而得名,適應(yīng)性廣,在我國南方各省廣泛分布。魚腥草營養(yǎng)豐富,并具有多種藥理作用,已被國家衛(wèi)生部正式確定為“既是藥品,又是食品”的極具開發(fā)潛力的資源之一[1-2]。目前,魚腥草抑菌活性成分的提取,尚無統(tǒng)一的方法;魚腥草的藥用一般取地上部分,而占植株總鮮重30%的地下部分未被利用,對同一種魚腥草的葉、地上莖、地下莖抑菌和抗病毒作用差別研究尚未見公開報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)以水蒸氣蒸餾法,分別對葉、地上莖、地下莖進(jìn)行提取[3],并對金黃色葡萄球菌(Staphylococlusaureus)、大腸桿菌(Escheichia coli)、痢疾桿菌(Shigella dysenteroae)、酵母菌(Saccarom ycescerevisiae)進(jìn)行抑菌和抗病毒實(shí)驗(yàn),初步探討魚腥草葉、地上莖、地下莖各部分抑菌和抗病毒作用的差別。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料:魚腥草采于貴陽市郊區(qū);葡萄糖,蔗糖,NaCl,NaOH均為分析純;瓊脂,牛肉膏,蛋白胨;四環(huán)素,華北制藥廠;金黃色葡萄球菌,大腸桿菌,痢疾桿菌,釀酒酵母菌A型流感病毒株(APPRP8P34),河北省疾病預(yù)防控制中心。

儀器:旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE540 YAMATO),培養(yǎng)箱(PW／10重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠),超凈工作臺(CCV—1311),高壓蒸汽滅菌器(SM—52),萬分之一天平(AEG—220),pH酸度計(jì)(HM—205 TOA),冰箱(BCD—215),水浴鍋(BM400,YA2MATO)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

魚腥草抑菌活性成分的提取:取一定量新鮮魚腥草全株,洗凈并晾干表面水分,取葉(包括葉柄)、地上莖、地下莖(以形態(tài)學(xué)從上到下生根的第一個(gè)節(jié)為界)切成3mm的小片(段),各稱取50g入燒瓶,加蒸餾水500mL,接揮發(fā)油提取器,按文獻(xiàn)[3]所確定的最佳提取條件提取活性成分。

提取液的抑菌實(shí)驗(yàn):用無菌移液管向培養(yǎng)皿平板中分別加入0.5mL菌懸液,用L型玻棒涂布均勻,按編號位置將準(zhǔn)備好的含提取液的藥敏紙片等距放入含菌平板,同時(shí)以四環(huán)素作對照。細(xì)菌在37℃條件下恒溫培養(yǎng)24h,真菌在27℃條件下恒溫培養(yǎng)48h,測定濾紙抑菌圈的大小,比較抑菌效果。

魚腥草揮發(fā)油抗病毒作用研究:運(yùn)用微量血凝試驗(yàn)檢測對流感病毒增殖的抑制作用。

2 結(jié)果

2.1 不同部位提取液抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

利用提取的魚腥草葉、地上莖、地下莖抑菌活性成分,對供試菌種進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),通過測量對經(jīng)過培養(yǎng)的供試菌種生長層產(chǎn)生抑菌圈直徑的大小,比較其抑菌活性的強(qiáng)弱,并與四環(huán)素做對照(表1)。

從表1可以看出,魚腥草葉、地上莖、地下莖的提取液均具有抑菌活性,但除釀酒酵母菌外均較四環(huán)素弱。其中地下莖提取液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、酵母菌的抑制作用最強(qiáng)分別達(dá)到15.03mm、13.26mm、14.65mm,葉的提取液對痢疾桿菌的抑制作用最強(qiáng),達(dá)到12.11mm。說明魚腥草地下莖的提取液對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性致病菌及真菌的抑菌活性均較其它部位強(qiáng),而葉的提取液對致病力較強(qiáng)的革蘭氏陰性菌抑菌活性較強(qiáng)。

表1 魚腥草不同部位提取液抑菌圈直徑Tab.1 Diameter of inhibition zone by extract from different parts of Houttuynia Cordata (mm)

2.2 揮發(fā)油的抗流感病毒作用

運(yùn)用微量血凝試驗(yàn)檢測對流感病毒增殖的抑制作用,測定結(jié)果見表2。

表2 魚腥草不同部位提取液對流感病毒的抑制作用Tab.2 Inhibition effect on influenza virus by extract of different parts of Houttuynia cordata(mg?ml-1)

微量血凝試驗(yàn)表明,魚腥草不同部位的揮發(fā)油對流感病毒均有抑制作用,其中葉的提取液在藥物質(zhì)量濃度達(dá)31.25mg／ml時(shí)即能抑制病毒的增殖,表明葉中含有抑制病毒有效成分較多;葉和地下莖的提取液在藥物質(zhì)量濃度達(dá)250mg／ml時(shí)對流感病毒有4倍的抑制作用,表明葉和地下莖部分均含有足量能有效抑制流感病毒的成分,可作為入藥提取部位的首選。

3 討論

我國民間長期以來也有將魚腥草地上和地下部分同時(shí)入藥的習(xí)慣。據(jù)《新編中藥志》[4],魚腥草揮發(fā)油是其關(guān)鍵藥用成分,主要包括:癸酞乙醛、甲基正壬酮、月桂烯、月桂醛、癸醛和癸酸等。有報(bào)道顯示癸酞乙醛和甲基正壬酮在各器官中的含量比較一致。這可能是魚腥草地上地下部分入藥均具有一致功效的主要原因。此外,單萜成分組成及總含量在魚腥草各器官(或者以地上和地下部分計(jì))中均比較一致,而這些單萜成分多數(shù)具有抑菌消炎、止咳平喘等功效。目前魚腥草注射液的生產(chǎn)是采用魚腥草地上部分水蒸氣蒸餾液的二次飽和芳香水,而本研究按此法對葉、地上莖、地下莖分別進(jìn)行提取,并選取不同類型常見細(xì)菌和病毒的代表作為實(shí)驗(yàn)對象:革蘭氏陽性菌中選取金黃色葡萄球菌,革蘭氏陰性菌中選取大腸桿菌及致病力較強(qiáng)的痢疾桿菌,真菌中選取釀酒酵母菌,病毒中選取A型流感病毒株。結(jié)果顯示,地下莖部分除對較強(qiáng)致病力的痢疾桿菌抑菌作用稍弱外,對常見外部及內(nèi)源性感染細(xì)菌及流感病毒均有較強(qiáng)的抑制作用,提示其可作為有效部分入藥,與其他藥理作用相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[5-6]。因魚腥草地上和地下部分揮發(fā)油化學(xué)成分較復(fù)雜,且含量不盡不同,飽和芳香水中溶解的各種成分的比例也有一定差異。所以為確保用藥質(zhì)量的穩(wěn)定,仍建議將其地上與地下部分按一定比例搭配使用。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明,魚腥草葉、地上莖、地下莖各部位均具有一定抑菌和抗病毒活性,其中地下莖部分除對較強(qiáng)致病力的痢疾桿菌抑菌作用稍弱外,對常見外部及內(nèi)源性感染細(xì)菌及流感病毒均有較強(qiáng)的抑制作用,提示其可作為有效部分入藥,應(yīng)充分加以利用。但天然魚腥草揮發(fā)油成分復(fù)雜,有必要進(jìn)一步逐一分析這些成分的藥理作用,其抗菌抗病毒組分的分離、提純和鑒定及抗性機(jī)理有待今后進(jìn)一步深入研究。

[1]姚森,周玖瑤.魚腥草的藥理與臨床應(yīng)用[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(1):237-240.

[2]陳慶華,鄒秀麗,李蕓瑛,等.魚腥草營養(yǎng)成分的分析[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):992-993.

[3]黃春燕,吳衛(wèi),鄭有良.魚腥草不同部位揮發(fā)油化學(xué)成分的比較[J].藥物分析雜志,2007,27(1):40-44.

[4]肖培根.新編中藥志[M].北京,化學(xué)工業(yè)出版社,2002.

[5]孟江,和殿峰,周毅生,等.魚腥草不同提取部位藥理活性的比較研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2008,19(5):1050-1051.

[6]和殿峰.魚腥草的藥理研究進(jìn)展與臨床應(yīng)用[J].中國誤診學(xué)雜志,2008,8(22):5520-5521.