劉建和,胡熙苒,何少平,李 群,程 坤

柴胡三參膠囊是自制的治療心律失常方劑。本研究從實(shí)驗(yàn)性致心律失常觀察柴胡三參膠囊(CHSS)對(duì)大鼠室性心律失常的保護(hù)作用,以進(jìn)一步探討柴胡三參膠囊抗心律失常的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物 柴胡三參膠囊主要原料粉由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供,批號(hào):681210;普萘洛爾由大同市衛(wèi)華藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字:H14021703;普羅帕酮由山東仁和制藥有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào):H37020793;維拉帕米由石家莊科迪藥業(yè)有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字:H13020858。

1.2 試劑 10%水合氯醛、氯仿、3.5%氯化鈣溶液、0.005%烏頭堿溶液。

1.3 動(dòng)物 健康Wistar大鼠100只,清潔級(jí),雌雄各半,體重200 g～320 g;昆明小鼠100只,雌雄各半,體重25 g～35 g。許可證號(hào):SCXK(滬)2008-0016,由上海西普蘭必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供。

1.4 儀器 生物信號(hào)采集系統(tǒng)(成都儀器廠RM-6280)、潔凈工作臺(tái)、電子天平、齒鑷、棉簽、注射器。

1.5 方法

1.5.1 氯仿致小鼠心律失常 選取健康KM小鼠100只,雌雄各半,體重28 g～30 g,按體重編號(hào)后,以隨機(jī)數(shù)字表法完全隨機(jī)分為5組,每組20只。分別為:模型對(duì)照組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組;普萘洛爾組。柴胡三參膠囊按成人推薦劑量4.8 g/d計(jì)算,折算成2次/日,每次2.4 g的1/2倍(小劑量)、等效劑量(中劑量)、2倍(大劑量)給藥,普萘洛爾折算后給予7 mg/kg。模型對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃,灌胃給藥 2次/日,連續(xù)7 d。末次給藥30 min,將小鼠置于倒扣的600 mL燒杯中,取氯仿2 mL滴于棉球上,讓小鼠吸入氯仿直至呼吸停止(每測(cè)試1只小鼠,加1 mL氯仿)。立即取出小鼠,打開(kāi)胸腔,肉眼觀察小鼠心臟活動(dòng)節(jié)律,記錄各組小鼠產(chǎn)生室顫(VF)的動(dòng)物數(shù),對(duì)其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析檢驗(yàn)。

1.5.2 氯化鈣致大鼠心律失常 選取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,體重 200 g～320 g,按體重編號(hào)后,以隨機(jī)數(shù)字表法完全隨機(jī)分為5組,每組10只。分別為模型對(duì)照組;維拉帕米組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組。末次給藥后30 min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下靜脈注入3.5%氯化鈣溶液105mg/kg(10 s內(nèi)推完),并記錄心電圖Ⅱ?qū)?lián),以觀察其心律失常情況。記錄室早(VP)、室速(V T)、VF、死亡率及死亡(CA)時(shí)間并分析。

1.5.3 烏頭堿致大鼠心律失常 選取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,體重250 g～320 g,按體重編號(hào)后,以隨機(jī)數(shù)字表法完全隨機(jī)分為5組,每組10只。分別為模型對(duì)照組;普羅帕酮組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組。末次給藥后30min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下靜脈注入0.005%烏頭堿溶液0.05 mg/kg(10 s內(nèi)推完),并記錄心電圖Ⅱ?qū)?lián),以觀察其心律失常情況。記錄 VP、V T、VF及 CA時(shí)間并分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異性檢驗(yàn)若符合正態(tài)性分布采用方差分析,組間比較用LSD法檢驗(yàn);若方差不齊采用Tamhane's T 2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 柴胡三參膠囊抗氯仿致小鼠室顫的作用 在氯仿致小鼠室顫的模型中,與模型對(duì)照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對(duì)小鼠室顫發(fā)生率有減少趨勢(shì),柴胡三參膠囊的中劑量與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而高劑量組減小VF發(fā)生時(shí)間率更低(P＜0.01);普萘洛爾組與模型對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。詳見(jiàn)表 1。

表1 柴胡三參膠囊抗氯仿誘發(fā)室顫作用(±s)例(%)

表1 柴胡三參膠囊抗氯仿誘發(fā)室顫作用(±s)例(%)

組別 n 室顫模型對(duì)照組 20 18(90)CHSS小量組 20 14(70)CHSS中量組 20 12(60)1)CHSS大量組 20 10(50)2)普萘洛爾組 20 8(40)2)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

2.2 柴胡三參膠囊對(duì)氯化鈣致大鼠心律失常的作用 在氯化鈣模型中,與模型組照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對(duì)縮短心律失常的時(shí)間有一定作用,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;柴胡三參膠囊中劑量有縮短心律失常的發(fā)生時(shí)間的趨勢(shì),對(duì)于各心律失常持續(xù)時(shí)間的縮短及死亡時(shí)間的延長(zhǎng)均有較好作用,與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);柴胡三參膠囊大劑量組對(duì) VP、VT、VF及CA時(shí)間的延長(zhǎng)均有明顯作用,與模型對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型對(duì)照組相比,維拉帕米組對(duì) VP、VT、VF的作用及CA時(shí)間的延長(zhǎng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);各組大鼠死亡率有降低趨勢(shì)。詳見(jiàn)表2。

表2 柴胡三參膠囊抗氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用(±s)

表2 柴胡三參膠囊抗氯化鈣誘發(fā)心律失常的作用(±s)

組別 VP時(shí)間(s)VT時(shí)間(s)VF時(shí)間(s)CA(%)CA時(shí)間(s)模型對(duì)照組 39.68±11.47 44.79±8.32 53.36±12.80 90 172.60±17.54 CHSS小量組 32.99±9.83 40.92±7.30 46.98±9.54 80 194.20±15.26 CHSS中量組 28.96±7.881) 34.97±8.351) 40.10±10.761) 70 207.04±14.451)CHSS大量組 27.36±9.221) 33.74±9.001) 33.45±11.751) 60 241.68±41.241)維拉帕米組 27.86±9.671) 33.22±11.571) 36.07±10.691) 70 229.81±42.461)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05

2.3 柴胡三參膠囊對(duì)烏頭堿致大鼠心律失常的作用 在烏頭堿模型中,與模型對(duì)照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對(duì)縮短心律失常的時(shí)間有一定作用,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;柴胡三參膠囊中劑量有縮短心律失常發(fā)生時(shí)間的趨勢(shì),對(duì)于VF持續(xù)時(shí)間的縮短較為明顯,與模型對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);柴胡三參膠囊大劑量組對(duì)VP有較好作用,與模型對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),其對(duì)VT、VF、CA時(shí)間的延長(zhǎng)有明顯作用,與模型對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型對(duì)照組相比,普羅帕酮組對(duì)VP、VT、VF的作用及死亡時(shí)間的延長(zhǎng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 柴胡三參膠囊抗烏頭堿誘發(fā)心律失常的作用(±s)min

表3 柴胡三參膠囊抗烏頭堿誘發(fā)心律失常的作用(±s)min

組別 VP時(shí)間 VT時(shí)間 VF時(shí)間 CA時(shí)間模型對(duì)照組 5.19±1.89 6.92±1.75 9.82±3.27 23.96±6.20 CHSS小量組 4.88±1.69 6.73±1.34 9.37±1.76 26.50±4.45 CHSS中量組 3.99±1.50 5.61±1.61 7.34±1.971) 33.38±11.19 CHSS大量組 3.15±1.881) 4.49±1.841) 6.19±2.531) 41.98±20.381)普羅帕酮組 3.11±1.471) 4.49±2.241) 5.82±2.131) 42.20±19.451)與模型對(duì)照組比較,1)P＜0.05

3 討 論

心律失常屬“心悸”“怔忡”的范疇。古代中醫(yī)對(duì)心律失常的認(rèn)識(shí),雖各家均有不同,但大多認(rèn)為病因不外乎虛實(shí)兩者,氣血陰陽(yáng)虧虛及血瘀飲停之變。病機(jī)多為虛實(shí)夾雜,本虛標(biāo)實(shí)?，F(xiàn)在多數(shù)醫(yī)家主張其基本病機(jī)離不開(kāi)虛、瘀、痰、熱,本虛是本病的發(fā)病基礎(chǔ),標(biāo)實(shí)是病理產(chǎn)物。心悸是由多種原因?qū)е?使正氣受損,痰瘀郁熱內(nèi)生,阻滯氣機(jī),郁久化熱,痰瘀熱互結(jié);機(jī)體正氣已虛,無(wú)力抗邪外出,邪正相爭(zhēng),若正勝邪退則脈律暫時(shí)穩(wěn)定;若邪勝正退則內(nèi)擾心神而發(fā)為心動(dòng)悸,因而心悸常呈陣發(fā)性。這其中痰為宿根,若有情志誘因即可發(fā)作,故益氣活血、解郁化痰即可防邪勝而發(fā)病,以達(dá)防治心悸之目的。

柴胡三參膠囊是治療冠心病心律失常的有效驗(yàn)方[1]。由柴胡、法夏、黨參、丹參、苦參、黃連、炒常山、甘草等組成。本方以和法為立方基礎(chǔ),大凡臨床上錯(cuò)綜復(fù)雜,虛實(shí)夾雜的病證均應(yīng)以“和解”為治療大法。在該方中,柴胡為君,能和解開(kāi)郁,調(diào)暢氣機(jī);臣以法夏,化痰燥濕,消痰下氣;丹參,活血通經(jīng),涼血消腫,清心除煩;苦參清火燥濕,兼通利小便;黃連,大苦大寒,燥濕清熱;常山善開(kāi)痰結(jié),甘草補(bǔ)脾益氣,滋咳潤(rùn)肺,緩急解毒,調(diào)和百藥共為佐使。柴胡三參膠囊治療心悸,取其和解開(kāi)郁,使氣機(jī)調(diào)暢;取其清熱、化痰、活血,使邪去而正安;因正氣已損,故又應(yīng)顧護(hù)正氣,扶正以祛邪,標(biāo)本兼治以定悸。全方合用,共奏和解定悸、益氣活血、清熱化痰之功效。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)法夏有明顯的抗心律失常作用。清半夏水煎液200%濃度26.5 ml/kg預(yù)防給藥,對(duì)氯化鋇誘發(fā)的大鼠心律失常有明顯的拮抗作用[1];黨參水煎液和水提醇沉法制得的注射液均能明顯延長(zhǎng)注射異丙腎上腺素小鼠缺氧存活時(shí)間,說(shuō)明能增強(qiáng)動(dòng)物心肌耐缺氧能力[2];丹參的主要成分丹參素可能具有鈣拮抗劑的作用,抑制血管緊張素Ⅱ所介導(dǎo)引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高,從而抑制心肌細(xì)胞肥大和心肌成纖維細(xì)胞增殖[3]?？鄥⒛芤种苽鲗?dǎo)和自律性,延長(zhǎng)不應(yīng)期,抑制異位節(jié)律點(diǎn),能明顯對(duì)抗烏頭堿、氯化鋇和結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支誘發(fā)的大鼠室性心律失常,也能明顯對(duì)抗氯乙酰膽堿CCI-Ach混合液誘發(fā)的小鼠心房纖顫或撲動(dòng)[4];黃連素中所含的小檗堿有明顯抗心律失常作用,類似于胺碘酮,阻滯鈉通道,有輕度的非競(jìng)爭(zhēng)性阻滯作用,延長(zhǎng)房室結(jié)及旁道不應(yīng)期,減慢傳導(dǎo),延長(zhǎng)動(dòng)作電位[5],還有研究表明其抗心律失常的機(jī)制,可能是直接或間接抑制了Ca2+的膜內(nèi)流,延長(zhǎng)動(dòng)作電位平臺(tái)期和延長(zhǎng)3相復(fù)極時(shí)間,中斷折返激動(dòng),從而防治心律失常[6]。含有常山的中成藥對(duì)用垂體后葉素造成大鼠急性心肌缺血模型和冠脈結(jié)扎所誘發(fā)犬急性心肌缺血所致心律失常有較好的保護(hù)作用[7];甘草的有效成分甘草酸可延長(zhǎng)烏頭堿誘發(fā)的心律失常潛伏期,減少室顫率,增加毒毛花苷誘發(fā)的室性心律失常的閾值,推測(cè)甘草酸可能具有影響心肌細(xì)胞離子通道的作用[8]。

本實(shí)驗(yàn)表明,柴胡三參膠囊有較好的拮抗氯仿、烏頭堿和氯化鋇誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性心律失常的作用。氯仿誘發(fā)的心律失常與交感神經(jīng)系統(tǒng)活性增高及心臟β受體激活有關(guān)[9]。在氯仿致心律失常的模型中,與模型對(duì)照組相比,柴胡三參膠囊的小、中、高劑量組可減小室顫的發(fā)生時(shí)間率;明顯對(duì)抗氯仿誘發(fā)的心律失常,有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能和膜穩(wěn)定作用。本實(shí)驗(yàn)采用氯化鈣誘發(fā)心律失常,作用機(jī)制較為復(fù)雜,主要與鈣離子對(duì)心臟心肌細(xì)胞的直接作用有關(guān),與心肌細(xì)胞膜上鈣離子的內(nèi)流有關(guān)[10]。在氯化鈣模型中,與模型組相比,柴胡三參膠囊的中、大劑量有縮短心律失常的發(fā)生時(shí)間作用,柴胡三參膠囊可明顯抑制氯化鈣所致的大鼠雙向性室性心律失常,可通過(guò)抑制鈣離子內(nèi)流或促進(jìn)鉀離子的流出,降低心臟快反應(yīng)細(xì)胞的自律性。烏頭堿誘發(fā)心律失常的作用機(jī)制是復(fù)雜的。主要是由于它能激活心肌細(xì)胞的快Na+通道,使心肌快Na+通道開(kāi)放,加速心肌細(xì)胞Na+內(nèi)流,提高快反應(yīng)細(xì)胞的自律性,從而加速起搏點(diǎn)自律,誘發(fā)多源性異位節(jié)律點(diǎn),縮短心肌不應(yīng)期,導(dǎo)致心律失常[11-13]。在烏頭堿模型中,與模型組相比,柴胡三參膠囊的各劑量組有縮短心律失常發(fā)生時(shí)間的趨勢(shì),并且呈劑量依賴性顯著性縮短心律失常持續(xù)時(shí)間(P＜0.05)。本實(shí)驗(yàn)顯示,柴胡三參膠囊可明顯抑制烏頭堿誘發(fā)的大鼠心律失常,能作用于此類離子通道而發(fā)揮其抗心律失常作用。柴胡三參膠囊治療心律失常是一種綜合作用過(guò)程,其不單是通過(guò)抑制心臟單一離子通道而發(fā)揮作用的,而是在于整體的調(diào)節(jié)作用,這可能也是該方起效的原因。

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