肖志勇

福州省福建仙芝樓生物科技有限公司（350002）

薏苡仁為禾本科植物薏苡（Coix lachrgma-jobi varma-yuen）的種仁，據(jù)載具有“溫氣主消渴”作用，為中醫(yī)學(xué)臨床上治療“消渴”（糖尿病）常用藥物之一，薏苡仁作為常用中藥已有1500年的歷史[1]，現(xiàn)在又被我國衛(wèi)生部列為藥食兩用的食物，作為藥食同源的作物原料，薏苡仁的保健品質(zhì)令人囑目，得益于其中的薏苡仁多糖（coixan）、薏苡仁酯（coixenolide）以及特有的三萜類化合物等多種功能活性成分[2]。臨床實(shí)驗(yàn)表明，薏苡仁多糖作為薏苡仁主要活性成分之一，有顯著的降血糖作用[3]，在抑制腫瘤、提高免疫機(jī)能方面有良好的功效[4]，可治療糖尿病血管并發(fā)癥[5]及扁平疣、傳染性軟疣[6]；本文旨在通過小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)并測定相應(yīng)的生化指標(biāo)：血清尿素、血乳酸、肝糖原等含量的變化，研究薏苡仁多糖對緩解體力疲勞的作用。

1 材料與方法

1.1 原料

薏苡仁原料由福建省藥材公司提供，Sephadex G-75為Sigma公司產(chǎn)品。

1.2 供試品——薏苡仁多糖（Coixan）的提取和純化

稱取薏苡仁20.0kg加熱水（65℃）60L抽提12h，濾干后再次加入同一溫度熱水60L，提取12h，將所得抽提液混合減壓濃縮脫水，得黃色粗提物。將粗提物用蒸餾水溶解，加入等體積15%三氯醋酸（TCA）振蕩10h，使蛋白質(zhì)與TCA作用生成凝膠物，3000r/min離心20min去沉淀，將上清液裝入透析袋中，流水透析7d，透析液中逐漸加入1倍量的95%乙醇沉淀，將沉淀物相繼用丙酮和乙醚洗滌，真空干燥，再將多糖用蒸餾水溶解，經(jīng)Sephadex G-75柱層析，用0～1mol/L NaCl溶液梯度洗脫，硫酸－苯酚法[7]鑒定多糖部分，合并多糖反應(yīng)陽性部分，用蒸餾水透析3d，減壓濃縮，得到白色多糖精品即為薏苡仁多糖，產(chǎn)率為0.132%。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供的清潔級ICR健康小鼠，雄性，體質(zhì)量18g～22g。將小鼠分為4批，每批40只，分別進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)、血清尿素測定、血乳酸測定和肝糖原測定。每批動物隨機(jī)分為4組，每組10只。許可證號：SCXK（滬）2007-0006。

1.4 劑量設(shè)計(jì)

3個劑量組分別為166、333、1000mg/kgBW，即低、中、高試驗(yàn)組，分別按8.3、16.6、50.0mg/mL濃度配制，另設(shè)溶劑對照組給予蒸餾水。

1.5 給藥途徑

動物每日稱重，并按2.0mL/100g體質(zhì)量經(jīng)口灌胃，連續(xù)30d。

1.6 主要儀器與試劑

游泳箱（50cm×50cm×40cm），TP-1000型電子天平，鉛皮，722光柵分光光度計(jì)，日立7060型全自動生化分析儀，YSI1500乳酸鹽測定儀，血乳酸試劑購自美國YSI公司，尿素試劑（G-CELL）購自北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司（批號：070301），5%的三氯醋酸（TCA）。

表1 該樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±s）

表1 該樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(shù)(只) 初重(g) 末重(g) P 游泳時(shí)間(s) P對照組 10 19.2±0.9 39.5±1.8 / 657±116 /低劑量組 10 19.2±1.0 39.2±1.9 0.723 684±162 0.633中劑量組 10 19.1±0.9 38.9±1.9 0.479 850±80* 0.001高劑量組 10 19.1±1.1 40.2±1.9 0.409 771±125* 0.048

表2 該樣品對小鼠運(yùn)動時(shí)血清尿素的影響（±s）

表2 該樣品對小鼠運(yùn)動時(shí)血清尿素的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(shù)(只) 初重(g) 末重(g) P 血清尿素(mmol/L) P對照組 10 19.8±1.0 40.1±1.9 / 8.02±0.76 /低劑量組 10 19.9±1.4 39.2±1.5 0.246 8.37±1.22 0.408中劑量組 10 19.9±1.2 40.3±1.6 0.795 7.71±0.72 0.453高劑量組 10 19.8±1.3 39.6±1.7 0.409 6.91±0.76* 0.042

表3 該樣品對小鼠肝糖原含量的影響（±s）

表3 該樣品對小鼠肝糖原含量的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(shù)(只) 初重(g) 末重(g) P 肝糖原(mg/100g) P對照組 10 19.6±1.4 40.1±1.8 / 1275±306 /低劑量組 10 19.5±1.4 39.4±1.4 0.392 1347±50 0.981中劑量組 10 19.5±1.4 39.5±2.3 0.462 1852±134* 0.001高劑量組 10 19.6±1.4 39.8±1.6 0.712 1638±580 0.477

表4 該樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（±s）

表4 該樣品對小鼠血乳酸曲線下面積的影響（±s）

*與對照組比較P＜0.05

組 別 動物數(shù)(只) 初重(g) 末重(g) P 血乳酸曲線下面積(mmol/L) P對照組 10 20.0±1.2 39.8±2.0 / 123.03±19.31 /低劑量組 10 20.1±1.4 40.1±2.4 0.762 89.49±18.86* 0.000中劑量組 10 20.0±1.2 39.0±2.5 0.422 95.26±17.64* 0.002高劑量組10 19.9±1.4 39.7±1.8 0.920 83.04±17.12* 0.000

1.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用LSD法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對方差不齊或非正態(tài)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)先進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.8 試驗(yàn)方法[8]

1.8.1 負(fù)重游泳試驗(yàn)

小鼠于末次給予受試物30min后，使尾部負(fù)重5%重的鉛皮，放入水深30cm，水溫（25±1.0）℃游泳箱內(nèi)，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠游泳時(shí)間。

1.8.2 血清尿素測定

小鼠于末次給予受試物30min后，放入水深30cm，溫度30℃的水箱中不負(fù)重游泳90min，休息60min后拔眼球采全血約0.5mL，置4℃冰箱約3h，血凝固后2000rpm離心15min，取上層血清用全自動生化儀測定。

1.8.3 肝糖原測定

末次給予受試物30min后，處死動物，取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后，用濾紙吸干，精確稱取肝臟100mg，加入8mL 5%的三氯醋酸，每管勻漿1min，將勻漿液倒入離心管，以3000rpm離心15min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一試管內(nèi)，取1mL上清液放入10mL離心管中，每管加入95%的乙醇4mL，充分混勻至兩液體間不留有界面。塞子塞上于室溫下豎立放置過夜。沉淀完全后，3000rpm離心15min，去上清液后倒置10min，用2mL蒸餾水溶解糖原，用蒽酮法在620nm波長比色測定肝糖原。

1.8.4 血乳酸測定

末次給予受試物30min后，眼靜脈采血20UL，立即放入水溫30℃水中游泳，每隔1min放入一只，游泳10min后立即取出，擦干水分，各采血20UL，安靜20min后再采血20UL.將每次所采的血放入40UL的溶血劑中振蕩，振蕩均勻后，于YSI1500型血乳酸測定儀中測定血乳酸。

2 結(jié) 果

2.1 該樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

由表1可見，該樣品可延長各劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，其中中、高劑量組與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 該樣品對小鼠運(yùn)動后血清尿素的影響

由表2可見，該樣品各劑量組小鼠運(yùn)動后產(chǎn)生的血清尿素的含量與對照組相比，高劑量組與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 該樣品對小鼠肝糖原的影響

由表3可見，該樣品使中劑量組小鼠肝糖原含量增加，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 該樣品對小鼠3個時(shí)間點(diǎn)血乳酸曲線下面積的影響

由表4可見，該樣品使各劑量組小鼠血乳酸曲線下面積減少，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

疲勞是機(jī)體在一定環(huán)境條件下，由于長時(shí)間或過度緊張的體力或腦力勞動而引起的勞動效率趨向下降的狀態(tài)，它是機(jī)體的一種防御反應(yīng)，是機(jī)體組織和器官興奮性下降而帶來工作效率的降低。運(yùn)動耐力的提高是抗疲勞能力加強(qiáng)的最直接表現(xiàn)，游泳時(shí)間的長短可以反應(yīng)動物運(yùn)動疲勞的程度。本實(shí)驗(yàn)顯示服用薏苡仁多糖30d后，小鼠的游泳時(shí)間明顯長于未服用的對照組小鼠，從而反映出薏苡仁多糖能提高運(yùn)動耐力，即提高了機(jī)體對運(yùn)動的負(fù)荷能力；體力活動時(shí)主要靠糖原酵解來獲得能量，薏苡仁多糖能通過提高肝糖原的儲備量，延緩疲勞的產(chǎn)生，增強(qiáng)運(yùn)動能力。運(yùn)動后血清尿素和血乳酸含量的變化是機(jī)體對運(yùn)動而產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物分解能力的表現(xiàn)，本次試驗(yàn)可見薏苡仁多糖能降低運(yùn)動后小鼠血清尿素的產(chǎn)生，減少血乳酸曲線下面積，反映出薏苡仁多糖能加速機(jī)體清除代謝產(chǎn)物，可以加速疲勞的消解。

綜上所述，薏苡仁多糖在本實(shí)驗(yàn)條件下具有提高機(jī)體對運(yùn)動負(fù)荷的適應(yīng)能力，在延緩體力疲勞的產(chǎn)生和加速疲勞的消除方面也有明顯作用，因此具有緩解體力疲勞的作用。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:2646.

[2]呂峰,楊彩霞,姜艷梅,等.不同產(chǎn)地薏苡仁的保健與加工品質(zhì)[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,37(4):431.

[3]徐梓輝,周世文,黃林清.薏苡仁多糖的分離提取及其降血糖作用的研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,22 (6):578.

[4]顧關(guān)云.薏苡仁的藥理作用[J].中成藥,1994,38(6):205.

[5]徐梓輝,周世文,陳衛(wèi),等.薏苡仁多糖對2型糖尿病大鼠主動脈內(nèi)皮素1基因表達(dá)的影響[J].中國動脈硬化雜志,2006,14(3):194.

[6]胡烈.薏苡仁臨床新用舉隅[J].中國臨床醫(yī)生,2001,29(10):54.

[7]Dubois M,Gilles KA,Hamilton JK,et al.Colorimetric method for determination of sugars and related substances[J].Anal Chem,1956,28(3):350.

[8]衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003年版)[S].2003:81.