顧文松 沈明華

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）為近幾年新流行的重要傳染病，且呈不斷的蔓延趨勢(shì)。病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV），其在呼吸道疾病發(fā)生過程中所起的作用日益增強(qiáng)[1-2]，主要損傷巨噬細(xì)胞、降低機(jī)體免疫力、引起繼發(fā)感染。幼齡仔豬發(fā)病后主要表現(xiàn)耳廓發(fā)紺（故俗稱藍(lán)耳病）、呼吸道癥狀、厭食、發(fā)熱，懷孕母豬引起流產(chǎn)、死胎和木乃伊。臨床治療豬繁殖與呼吸綜合征主要是干擾素，但使用效果不是很理想。我們根據(jù)民間經(jīng)臨床驗(yàn)證對(duì)治療豬繁殖與呼吸綜合征、圓環(huán)病毒病等有效的復(fù)方草藥制成中藥復(fù)方提取物，并觀察其對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征的療效。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

中藥復(fù)方提取物：將虎杖、女貞子、杠板歸、山藥、黃芪、景天三七、半枝蓮、訶子和蒲公英等中藥（均購(gòu)于安徽亳州藥材有限公司）按照一定比例混合，冷水浸泡30 min，水煎3次，合并濾液，將濾液與一定量95%乙醇溶液混合，常溫浸提3 h，抽濾（重復(fù)3次），合并濾液減壓蒸餾，揮去乙醇，并在真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮（水浴恒溫60℃，水真空），制成1 ml含生物藥1 g 的溶液[3]。

干擾素，10 ml（800萬(wàn)單位），由中國(guó)科學(xué)院微生物研究所研制；頭孢噻肟鈉，1 g/支，廣東金地藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)08021071。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

1.2.1 病例來源與臨床檢查

2009年7月，江蘇泰州、鎮(zhèn)江等地多個(gè)豬場(chǎng)的保育豬，整群發(fā)生不同程度的呼吸困難（腹式呼吸）、精神沉郁、嗜睡、食欲不振等情況，嚴(yán)重者咳嗽、氣喘，呼吸頻率高達(dá)80次/min以上，耳部、腹部和腿部發(fā)紺等癥狀。剖檢病豬可見肺充血、出現(xiàn)水腫，局灶性肺炎；有的有胸腔積液、肺門淋巴結(jié)腫大等癥狀。臨床上曾用過多種藥物治療如磺胺嘧啶，青、鏈霉素等均未見效果，豬群進(jìn)行過豬瘟、豬藍(lán)耳病和鏈球菌病免疫。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢查

隨機(jī)無菌采血10份，分離血清，參照湯景元等[4]報(bào)道的方法進(jìn)行PRRSV的RT-PCR檢測(cè)。

1.2.2.1 病料總RNA的提取

取血清0.25 ml加入1 ml Trizol試劑，室溫孵育5 min，加入0.2 ml氯仿，充分晃動(dòng)離心管15 s，室溫孵育 2～3 min，4 ℃、12000 r/min離心 15 min，轉(zhuǎn)移上清液于另一新的1.5 ml離心管，加入0.5 ml異丙醇，充分晃動(dòng)，放置10 min，4℃、12000 r/min離心10 min沉淀核酸，棄上清液，加入75%乙醇1 ml，震搖，洗滌核酸，4℃、8000 r/min離心5 min，棄上清液，室溫干燥沉淀5 min，加入40 μl DEPC水溶解沉淀物。

1.2.2.2 反轉(zhuǎn)錄

取下游引物 GP5.20.5 μl，10 mmol/l dNTPs0.25 μl，5×反轉(zhuǎn)錄 buffer 2.0 μl和總 RNA 7.0 μl，65 ℃水浴10 min，然后加入 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶 0.25 μl，用無菌雙蒸水補(bǔ)至總體積10.0 μl，37℃水浴1 h。

1.2.2.3 PCR

反應(yīng)總體積 25 μl。上游引物 GP5.10.5 μl，下游引物 GP5.20.5 μl，2.5 mmol/l dNTPs 2.0 μl，10×Mg2+freebuffer 2.5 μl，25 mmol/l Mg2+1.5 μl，rTaq 酶 2.5 U，cDNA 1 μl，用滅菌雙蒸水補(bǔ)至總體積 25 μl。反應(yīng)循環(huán)參數(shù)：94℃預(yù)變性 5 min；94℃變性45 s，59℃退火 45 s，72℃延伸60 s，共進(jìn)行35循環(huán)；然后72℃延伸10 min。取PCR產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳。

1.2.2.4 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

10份血清樣品結(jié)果全為陽(yáng)性（如圖1）。根據(jù)臨床癥狀、剖檢變化和血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，診斷為主要病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

1.3 分組治療

取病豬130頭分成5組，分別放入5個(gè)打掃干凈并消毒的隔離豬舍內(nèi)。中藥復(fù)方提取物配合抗生素組（30只），用中藥復(fù)方提取物原液10 ml灌服給藥，同時(shí)每頭豬肌肉注射頭孢噻肟鈉1支；中藥復(fù)方提取物組（30只），用中藥復(fù)方提取物原液灌服給藥10 ml；干擾素組（30只），注射干擾素5 ml；抗生素對(duì)照組（30只），每頭肌肉注射頭孢噻肟鈉1支；以上各組均每天用藥2次，連用5 d。空白對(duì)照組（10只），不給藥。

1.4 療效判定

觀察豬只的精神、采食、體溫、呼吸、皮膚和耳朵顏色及死亡等情況，按如下標(biāo)準(zhǔn)判斷療效。

治愈：用藥后呼吸平穩(wěn)，精神、飲食、體溫、皮膚和耳朵顏色恢復(fù)正常。

好轉(zhuǎn)：用藥后癥狀明顯減輕，呼吸、精神、體溫、飲食好轉(zhuǎn)。

無效：用藥后癥狀不減輕，甚至加重或死亡?？傆行?治愈率+好轉(zhuǎn)率。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用t檢驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)比較各組治愈率和總有效率的差異。

2 治療結(jié)果（見表1）

中藥復(fù)方提取物配合抗生素組治愈率和總有效率均顯著高于中藥復(fù)方提取物組、干擾素組、不治療的空白對(duì)照組（P＜0.05），中藥復(fù)方提取物組的治愈率和總有效率高于抗生素對(duì)照組和空白對(duì)照組（P＜0.05），但和干擾素組相比差異不顯著（P＞0.05）。表明中藥復(fù)方提取物及其配合抗生素對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征都有療效，但中藥復(fù)方提取物配合抗生素效果更好。

表1 各組的治療效果（%）

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，該中藥復(fù)方提取物單獨(dú)使用對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征有很不錯(cuò)的療效，和干擾素相似，高于抗生素對(duì)照和空白對(duì)照，但低于中藥復(fù)方提取物配合抗生素組。

該中藥復(fù)方提取物是我們根據(jù)民間一個(gè)經(jīng)驗(yàn)方（臨床中使用對(duì)豬病毒病有很好療效的草藥組方）提取而成的一個(gè)復(fù)方提取物。我們已經(jīng)通過試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該組方的中藥復(fù)方提取物能夠明顯提高細(xì)胞抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染[3]。

該中藥復(fù)方提取物由虎杖、女貞子、杠板歸、山藥、黃芪、景天三七、地耳草、半枝蓮、訶子和蒲公英等十味中藥組成?，F(xiàn)代藥理研究表明，方中虎杖、女貞子、黃芪、地耳草、半枝蓮和蒲公英都有抗病毒作用，對(duì)多種病毒有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，可能是該中藥復(fù)方提取物發(fā)揮抗病毒作用的主要組分藥。此外，方中山藥、黃芪、景天三七和蒲公英具有增強(qiáng)免疫、抗應(yīng)激、誘導(dǎo)干擾素的分泌的功能。

豬繁殖與呼吸綜合征是免疫抑制病，豬感染此病后很容易繼發(fā)感染細(xì)菌[5-6]。中藥復(fù)方提取物配合抗生素組效果比單用中藥復(fù)方提取物效果好，可能是抗生素（頭孢噻肟鈉）具有消炎作用、能夠有效殺滅繼發(fā)感染的細(xì)菌從而促進(jìn)中藥復(fù)方提取物的有效發(fā)揮。

4 結(jié)論

中藥復(fù)方提取物及其配合抗生素對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征有很好的療效，且中藥復(fù)方提取物配合抗生素效果優(yōu)與單獨(dú)使用中藥復(fù)方提取物。希望我國(guó)的獸醫(yī)權(quán)威人士關(guān)心一下民間一些草藥經(jīng)驗(yàn)方，有可能在民間我們會(huì)找到一些對(duì)畜禽病毒病有很好效果的草藥組方。

[1]Dee S A.The porcine respiratory disease complex:Are subpopulations important[J].Swine Health and Production，1996，4:147-149.

[2]DesRosiers R.Diagnosis and control of swine respiratory diseases[J].Proce Am.Assoc Swine Pract，1997，333-344.

[3]顧文松，沈明華，劉偉，等.中藥復(fù)方提取物對(duì)細(xì)胞抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染能力的影響[J].養(yǎng)豬，2009(4)：73-74.

[4]湯景元，姜平，鄧雨修，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒和致病性沙門氏菌的混合感染[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005(7):337-338.

[5]Ellis J，Krakowka S，Allan G M，et al.The clinical scope of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection has expanded since 1987;an alternative perspective[J].Vet Pathol，1999，36:262-265.

[6]Allan G M，Ellis J A.Porcine circovirus:a review [J].J.Vet.Diagn.Invest，2000（12）:3-14.