萬 李

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶 400010）

健腦顆粒由淫羊藿、枸杞子、川芎等多味藥材組成，具有益氣養(yǎng)血、滋陰生津的功效，適用于氣血兩虧、陰津不足所致失眠多夢、神疲健忘、頭暈頭痛等癥。為有效控制其質(zhì)量，筆者對該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，用薄層色譜（TLC）法對制劑中的川芎、枸杞子進(jìn)行定性鑒別，對淫羊藿的有效成分淫羊藿苷的含量采用高效液相色譜（HPLC）法進(jìn)行測定，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 儀器與試藥

2690/2996型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；BPQⅠ型薄層板自動鋪板器（重慶南岸新力實驗電器廠）；三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）。淫羊藿苷對照品（批號為110737-200312）、枸杞子對照藥材、川芎對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供，健腦顆粒為市售品，乙腈為色譜純，水為去離子水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別[1]

枸杞子：取本品及按本品工藝制備的缺枸杞子的陰性對照品各5 g，分別加水15 mL，超聲處理10 min，過濾，濾液用乙酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，分別得到供試品溶液及陰性對照品溶液。取枸杞子對照藥材0.5 g，加水 35 mL，加熱回流 15 min，濾過，濾液用乙酸乙酯15 mL提取，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得枸杞子對照藥材溶液。照TLC法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶7 ∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照品溶液色譜無相同斑點(diǎn)出現(xiàn)（見圖1 A）。

圖1 薄層色譜圖

川芎：取本品及按本品工藝制備的缺川芎的陰性對照品各5 g，分別加水15 mL，超聲處理10 min，過濾，濾液用乙酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，分別得到供試品溶液和陰性對照品溶液。取川芎對照藥材1 g，分別加三氯甲烷20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，即得川芎對照藥材溶液。照TLC法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照品溶液色譜無相同斑點(diǎn)出現(xiàn)（見圖1 B）。

2.2 淫羊藿苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -水（30 ∶70）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下的色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取本品2 g，加水20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液通過聚酰胺（3 g）柱，用70 mL水洗滌，棄去洗滌液，再用乙酸乙酯60 mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，蒸干，殘渣用甲醇溶解并置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg淫羊藿苷的溶液，即得對照品溶液。取按處方比例及制備工藝制備的不含淫羊藿的陰性樣品適量，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液 2，6，8，10，16 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以測得峰面積為縱坐標(biāo)、淫羊藿苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=1 812 181.5 C-19 436，r=0.999 9。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.20～1.60 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積值的 RSD=1.04%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密量取樣品1份，照擬訂的供試品溶液制備方法和測定條件，分別于 0，4，8，10，16 h進(jìn)樣，淫羊藿苷峰峰面積的RSD為1.12%，結(jié)果表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗：精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法制備溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10 μL測定，計算含量，結(jié)果的RSD=1.22%。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的同一批樣品6份，分別精密加入淫羊藿苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

按供試品溶液制備方法操作，分別將3批樣品制成供試品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以外標(biāo)法計算淫羊藿苷含量。結(jié)果批號為070401，070402，070403的3批樣品中，每5 g樣品分別含淫羊藿苷 2.45，2.76，2.88 mg。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

3 討論

本制劑由多味藥材提取制成，樣品成分復(fù)雜，對供試品溶液的不同提取方法（正丁醇提取法、大孔樹脂純化法、聚酰胺純化法）進(jìn)行比較，結(jié)果有的干擾較大，有的含量偏低，而聚酰胺法操作簡便，含量測定結(jié)果比較滿意。本品的薄層色譜鑒別均作了陰性對照試驗，結(jié)果表明各薄層斑點(diǎn)不受樣品中其他各藥的干擾，專屬性較強(qiáng)，簡單易行，TLC法可作為本品的定性檢測方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：229，附錄 31.