徐國兵， 張亞中， 韓玲玲， 班永生

（1.安徽省食品藥品檢驗所，安徽合肥 230051;2.安徽省中藥標(biāo)準(zhǔn)化工程技術(shù)研究中心，安徽合肥 230051）

前胡為傘形科植物白花前胡（Peucedanum praeruptorumDunn）的干燥根，辛、苦，微寒;歸肺經(jīng)。散風(fēng)清熱，降氣化痰，用于風(fēng)熱咳嗽痰多，痰熱喘滿，咯痰黃稠［1］。主要含有香豆素類化合物，如白花前胡甲素、乙素、丙素、丁素等，還含有烷烴、酯、酮、倍半萜、芳香化合物和萘醌類等揮發(fā)油類［2］?，F(xiàn)代藥理研究證明，前胡的香豆素類和揮發(fā)油類成分是其臨床療效的主要有效成分［3，4］。對傳統(tǒng)的水提和醇提方法提取前胡含香豆素和揮發(fā)油的提取物進行化學(xué)成分研究已有文獻(xiàn)［4，5］，而使用 SFE-CO2所得的前胡提取物，采用GCMS方法進行定性分析尚未見報道，我們比較前胡的超臨界提取物和揮發(fā)油，證明SFE-CO2在前胡化學(xué)成分提取上具有明顯優(yōu)勢。

1 材料與儀器

1.1 儀器與試劑 HL-5L/50 MPa-ⅡCWQ型超臨界流體（CO2）萃取儀（杭州華黎泵業(yè)有限公司）。GC MS QP 2010 PLUS氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀;AOC-5000全自動進樣器;GC-MS Solution色譜工作站;NIST 05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫、Wiley 7質(zhì)譜圖庫（日本Shimadzu公司隨機附帶）。

1.2 試劑與材料 色譜甲醇（美國TEDIA LOT81923）。前胡藥材產(chǎn)自安徽寧國市，由安徽省宣城市藥檢所鑒定和提供。

1.3 超臨界提取物 取前胡藥材粗粉，精密稱定，置超臨界萃取釜中，設(shè)定萃取溫度為60℃，壓力為28 MPa;萃取時間2 h;分離釜I溫度45℃，壓力為9 MPa;分離釜Ⅱ溫度30℃，壓力為3.5 MPa。制備前胡藥材超臨界提取物。

1.4 揮發(fā)油 取前胡藥材，粉碎成粗粉，精密稱取一定量，照揮發(fā)油測定法（中國藥典2005年版一部附錄X D），制備前胡揮發(fā)油。

2 實驗條件

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 揮發(fā)油供試品溶液 取前胡揮發(fā)油一定量，加乙酸乙酯萃取，分取乙酸乙酯層，稀釋成每1 mL含前胡藥材約0.10 g的溶液，即得。

2.1.2 超臨界CO2提取物供試品溶液 取超臨界提取物，加乙酸乙酯稀釋成每1 mL含前胡藥材約0.10 g的溶液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱:RxiTM-5 ms 30 m×0.25 mm×0.25 μm（美國Restek公司）;進樣口溫度320℃，程序升溫起始溫度40℃，以1℃/min的升溫至45℃，保持2 min，再以12℃/min的升溫至220℃，保持2 min，再以3℃/min的升溫至290℃，保持1 min。載氣為氦氣，流速為39.9 mL/min。分流比為50:1。質(zhì)譜接口溫度320℃。離子源溫度為200℃，電子轟擊電壓70 eV。全離子掃描，掃描范圍為m/z:10～400。采集延時0.5 min。圖譜采集時間:47.5 min。歸一化法計算含量。

3 樣品測定

分別取前胡超臨界提取物和揮發(fā)油供試品溶液，按上述優(yōu)化后的GC-MS條件分別進樣2.0 μL測定?？傠x子流圖分別見圖1、圖2;結(jié)果見表1。前胡超臨界提取物和揮發(fā)油中共檢出49種成分。

圖1 前胡超臨界提取物GCMS總離子流圖

圖2 前胡揮發(fā)油GCMS總離子流圖

表1 前胡超臨界提取物（A）和揮發(fā)油（B）中主要化學(xué)成分

4 結(jié)論與討論

4.1 與傳統(tǒng)的中藥提取分離技術(shù)相比，SFE-CO2具有提取效率高、環(huán)境好等特點，可以在接近室溫（35～40℃）及CO2氣體籠罩下進行提取，有效地防止了熱敏性物質(zhì)的氧化和逸散，并能把高沸點，低揮發(fā)度、易熱解的物質(zhì)在其沸點溫度以下萃取出來。由于全過程不用有機溶劑，萃取物無有機殘留，基本保證了的純天然性。

4.2 超臨界提取物相似度大于75的色譜峰歸屬占98.66%，其中:長鏈羧酸、醛、酮等占38.1%;香豆素類占31.19%;3-甲基-4-羥基-2-丁酮（2-Butanone，4-hydro-3-methyl-）占2.21%，為揮發(fā)油中不含有的成分;與揮發(fā)油相同的成分占25.43%。表明SFECO2，對前胡有效成分的提取較完全，不僅能提出前胡藥材中小分子的揮發(fā)性成分，對前胡主要有效成分香豆素類提取效率高（經(jīng)HPLC分析，超臨界提取物中香豆素類的提取率較水提、不同濃度的醇提高，將另文發(fā)表），同時，能提取長鏈羧酸、醛、酮和醇，為研究前胡的指紋圖譜、建立提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及合理開發(fā)利用奠定了一定的基礎(chǔ)。

4.3 揮發(fā)油中相似度大于75的峰歸屬占97.38%，主要含有二甲氧基胺、氨基脲、酯類、烯烴、萘類、烷烴等，與超臨界提取物相同的成分占77.93%。在19.45%的不同成分中，丙酸乙酯占12.8%、β-蒎烯占1.36%，其余14種成分占5.29%。由于揮發(fā)油提取過程中溫度較高，可能使部分成分在提取過程中發(fā)生轉(zhuǎn)化;同時，由于在超臨界提取物中長鏈羧酸、醛、酮及香豆素類所占比例較大，在與揮發(fā)油色譜峰相同保留時間處，往往色譜峰小、豐度較低，未作進一步歸屬。

4.4 在超臨界提取物色譜圖上，保留時間為34.35 min與38.98 min的兩種線型香豆素，數(shù)據(jù)庫中檢出的結(jié)果相同，相似度均為93;保留時間為42.45 min、43.84 min與44.99 min的3種角型香豆素，數(shù)據(jù)庫中檢出的結(jié)果也相同，相似度均大于94。可能由于這些成分分子式相同，而構(gòu)型構(gòu)象上存在差異;或由于隨機附帶的NIST05.LIB、Welliy數(shù)據(jù)庫未能及時更新，造成不同保留時間出的色譜峰檢索結(jié)果相同，有待根據(jù)色譜保留時間、文獻(xiàn)研究報道和其它光譜輔助解析等手段，進一步鑒定。

4.5 由于前胡超臨界提取物中成分較復(fù)雜，各成分的沸點差異較大，在采用GCMS進行分離條件摸索時，曾選擇多種程序升溫方法，以期使各類成分既能達(dá)到滿意分離，又能在相對短的時間內(nèi)完全出峰，結(jié)果升溫程序為:起始溫度40℃，以1℃/min的升溫至45℃，保持2 min，再以12℃/min的升溫至220℃，保持2 min，再以3℃/min的升溫至290℃，保持1 min，可達(dá)到較好的分離。

致謝:安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院夏倫祝教授、章俊茹老師提供前胡超臨界提取幫助。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:187.

［2］孟德玉，毛子成，何興金，等.藥用前胡研究進展［J］.中國野生植物資源，2005，24（3）:10-14.

［3］王德才，馬 健，孔志峰，等.白花前胡總香豆素解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2004，11（8）:688-690.

［4］潘九英，吳飛華，金芝貴.白花前胡有效成分藥理作用研究進展［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2006，40（5）:64-65.

［5］劉布鳴，徐 勤.用GC/MS、GC分析中藥前胡中白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元［J］.廣西科學(xué)，2002，9（4）:294-297.