何法霖 柏 冬 鄭玉勝 周 玥 劉 路 董海鵬

(1衛(wèi)生部北京醫(yī)院，北京東單大華路 1號(hào)，100730;2北京中醫(yī)藥大學(xué);3同仁堂天然藥物有限公司;4世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì);5國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局)

青參膠囊由青風(fēng)藤、黃連、苦參等 5味中藥組成，可以祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，臨床上用于治療風(fēng)濕痹痛，關(guān)節(jié)腫脹，麻痹瘙癢，具有很好的療效。我們建立了高效液相色譜法測(cè)定青參膠囊中青藤堿含量的方法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200系列高效液相色譜儀，包括在線脫氣機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、Agilent ChemStation工作站);梅特勒 AE240電子分析天平;超純水發(fā)生器(Millpore)。

1.2 試藥 青藤堿對(duì)照品(110704-200318，供含量測(cè)定用)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;青參膠囊(批號(hào):20081201，20081202，20081203);乙腈 (色譜純，飛世爾科技)、重蒸水、其他試劑為分析純。

2 色譜條件

色譜柱:Waters Nova-Pak C18柱 (250mm×3.9mm，4μm);流動(dòng)相為 0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(90∶10);流速 1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng) 262nm。

3 方法與結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液的制備 取青藤堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 mL含青藤堿 0.0735mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取供試品 0.5g，精密稱定，精密加入甲醇 50mL，稱定重量，超聲提取 30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品溶液。

3.3 線性關(guān)系考察 取青藤堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成含青藤堿 0.735mg/mL的對(duì)照品貯備液 ，精密吸取貯備液 1、1.2、1.6、2.0、2.5、3.0、4.0mL至 25mL量瓶中，加甲醇定容。分別精密量取上述溶液各 10μL注入液相色譜儀，以峰面積 Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度 X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得青藤堿的線性回歸方程為 Y=825.26X+10.31(r=0.9997，n=6)，表明青藤堿進(jìn)樣量在 0.294～1.176μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.4 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取青藤堿對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣 6次，峰面積的 RSD為 0.21%(n=6)，表明本方法精密度良好。

3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一生產(chǎn)批號(hào)(20081201)樣品，按照供試品溶液制備方法和上述色譜條件平行測(cè)定 6次，得到青藤堿平均含量為7.05mg/g，RSD=0.44(n=6)，表明本方法重現(xiàn)性良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一生產(chǎn)批號(hào)(20081201)的供試品溶液，分別在 0、2、4、8、12及 24h進(jìn)樣 10μL，測(cè)定峰面積，青藤堿平均含量為 7.03mg/g，RSD=0.37%(n=6)，表明樣品溶液放置 24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一生產(chǎn)批號(hào)(20081201)的樣品，采用加樣回收試驗(yàn)，分別以樣品量的 80%，100%，120%的比例精密加入青藤堿對(duì)照品，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，平均回收率為99.38%，RSD=0.46%(n=9)，結(jié)果見表 1。

表1 青藤堿加樣回收率結(jié)果(n=9)

3.8 樣品含量測(cè)定結(jié)果 見表 2。3.9 干擾試驗(yàn) 模擬處方制備不含青風(fēng)藤的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制 1份陰性對(duì)照溶液。分別吸取青藤堿對(duì)照品溶液，青參膠囊供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明其他各味藥材不干擾青藤堿的測(cè)定。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

有關(guān)青參膠囊中青藤堿含量測(cè)定方法的文獻(xiàn)報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)建立了青藤堿含量測(cè)定的高效液相色譜法，并對(duì)青藤堿樣品的提取方法進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)超聲提取 30min后，青藤堿基本完全提取出來。同時(shí)，樣品中青藤堿峰與雜質(zhì)峰完全分離，分析時(shí)間短，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可作為青參膠囊的質(zhì)量控制的依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典，2005年版一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.