陳 啟 馮吉煥 張 瑩 趙一軍 許俊龍

近年來(lái)研究表明金屬蛋白酶解離素 9(a disintegrin and metalloproteinase 9,ADAM9)高表達(dá)與乳腺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌等多種腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[1～4]。關(guān)于 ADAM 9在分化型甲狀腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用,目前,國(guó)內(nèi)、外少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。為此,我們采用免疫組化 SABC法檢測(cè)了 42例甲狀腺癌組織中ADAM9的表達(dá),旨在探討 ADAM9在分化型甲狀腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 資料

標(biāo)本取自聊城市人民醫(yī)院病理科(2007～2008年)手術(shù)切除的甲狀腺癌標(biāo)本,共 42例,男性 13例,女性 29例,年齡 18～75歲,中位年齡 38歲。所有病例均經(jīng)術(shù)后病理確診,其中乳頭狀癌 34例,濾泡狀癌 8例。有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 20例,無(wú)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 22例;腫塊限于甲狀腺內(nèi)者 35例,累及或超出甲狀腺被膜者 7例;按 1987年 UICC制定的國(guó)際 TNM分期:Ⅰ期 22例 ,Ⅱ期 12例,Ⅲ期 8例。

1.2 試劑和方法

鼠抗人 ADAM9單克隆抗體購(gòu)自 Santa Cruz公司,工作濃度為 1∶100。即用型 SABC試劑盒和 DAB顯色試劑均購(gòu)自武漢博士德試劑公司。將存檔的石蠟塊重新制成 4μm厚切片,進(jìn)行免疫組化 SABC法染色觀察。具體操作技術(shù)按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每批染色均用已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

采用半定量積分法,將染色強(qiáng)度分為 3級(jí):無(wú)著色記 1分,淺著色記 2分,棕黃色記 3分;按陽(yáng)性細(xì)胞的百分比分 3級(jí):≤25%為一級(jí)記 1分,26%～75%為二級(jí)記 2分,≥76%為三級(jí)記 3分。每張切片最后的得分為兩次評(píng)分的乘積(1～9),≥3分為陽(yáng)性,＜3分為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 ADAM9在甲狀腺癌中的表達(dá)情況

ADAM9以胞質(zhì)著色為主,部分胞膜著色。甲狀腺癌組織中 ADAM 9的陽(yáng)性率為 64.3%(27/42)。

2.2 ADAM9表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理因素的關(guān)系

ADAM9表達(dá)與浸潤(rùn)程度和頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05),而與病理分型和 TNM分期無(wú)關(guān)(P＞0.05),見(jiàn)表 1。

表1 ADAM 9表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理因素的關(guān)系

3 討論

ADAM9是金屬蛋白酶解離素家族中的一員,在多種腫瘤中高表達(dá),能提高腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力,并和預(yù)后有關(guān)[1～4]。Lendeckel等[1]研究發(fā)現(xiàn),ADAM9在乳腺癌中高表達(dá),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者更明顯,主要表達(dá)于癌細(xì)胞的胞質(zhì)中,并且和乳腺癌的預(yù)后有關(guān)。ADAM9通過(guò)其蛋白水解活性改變細(xì)胞分子表面活性狀態(tài),清除表皮生長(zhǎng)因子的部分底物,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)。Mazzocca等[2]研究發(fā)現(xiàn),ADAM9通過(guò)和腫瘤間質(zhì)相互作用分解層黏連蛋白增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的侵襲性,其高表達(dá)在腫瘤與基質(zhì)的連接處,尤其在周?chē)|(zhì)與腫瘤緊密連接處的細(xì)胞中,而肝臟細(xì)胞中 ADAM9陰性表達(dá)。ADAM9通過(guò)作用于肝腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞間的基質(zhì)使原發(fā)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管或血管內(nèi),使腫瘤細(xì)胞在遠(yuǎn)處器官種植。Yamad等研究發(fā)現(xiàn)[3],ADAM9在胰腺癌中高表達(dá),并參與腫瘤進(jìn)展。ADAM 9還在胃癌中高表達(dá),和胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]。

本研究結(jié)果顯示 42例甲狀腺癌中有 64.3%表達(dá)ADAM9,與文獻(xiàn)報(bào)道的其它系統(tǒng)腫瘤情況相符[1～4]。本研究還發(fā)現(xiàn),累及或超出甲狀腺被膜的甲狀腺癌中ADAM9表達(dá)明顯高于腫塊限于甲狀腺內(nèi)者;伴頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌中 ADAM9表達(dá)明顯高于不伴頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。這提示 ADAM9高表達(dá)與甲狀腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及病期進(jìn)展有關(guān)。ADAM9主要通過(guò) Nortch和EGFR途徑參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移[5]。ADAM9的這些作用和 TNF-α、EGF、整和素家族等有關(guān)[5]。本研究還發(fā)現(xiàn),ADAM9表達(dá)與病理分型和TNM分期無(wú)關(guān)。

綜上所述,ADAM9可能是甲狀腺癌易出現(xiàn)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的 1個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo),對(duì)評(píng)估甲狀腺癌生物學(xué)行為及進(jìn)展程度可能具有一定的臨床價(jià)值。至于 ADAM9在甲狀腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的分子生物學(xué)機(jī)制目前尚不清楚,有待于進(jìn)一步研究闡明。

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[3] Yamad D,Ohuchida K,Mizumoto K,et al.Increased expression of ADAM 9 and ADAM 15 Mrna in pancreatic cancer〔J〕.Anti-cancer RES,2007,27(2):793.

[4] Carl-McGrath S,Lendeckel U,Ebert M,et al.The disintegrin-metalloproteinases ADAM9,ADAM 12,and ADAM15 are upregulated in gastric cancer〔J〕.Int JOncol,2005,26(1):17.

[5] Mazzocca A,Coppari R,De Franco R,et al.A secreted form of ADAM 9 promotes carcinoma invation through tumor-stromal interactions〔J〕.Cancer Res,2005,65(11):4728.