王芳芳,王淑秋,劉君星,劉 蕾,馬小茹,梁衍峰

(佳木斯大學基礎醫(yī)學院,黑龍江 佳木斯 154007)

戊四氮慢性點燃模型適合于對癲癇病理、傳播機制和癲癇灶形成機制以及篩選抗癲癇藥物的研究,但是在致癲癇的過程中,是否對其它臟器有損害,人們對這點關注不多,有人在光鏡下觀察了戊四氮致癇后大鼠的肝腎損傷[1,2],本研究擬在電鏡下觀察戊四氮致癇后大鼠肝臟超微結構的變化。

1 材料與方法

1.1 材料

戊四氮(PTZ):美國 Sigma公司。大鼠:Wistar雄性健康大鼠 ,3～ 5月齡 ,體重 (200± 20)g,共 16只 ,分為癲癇模型組和正常對照組,每組8只。電鏡:日本電子株式會社 JEM-1200EX。

1.2 方法

①PTZ點燃模型的制備:PTZ用前以生理鹽水新鮮配制成溶液(10g/L)。癲癇模型組用 PTZ亞驚厥劑量(35mg/kg)腹腔注射,每日 1次,持續(xù) 28d;正常對照組以等容生理鹽水代替 PTZ腹腔注射。大鼠癲癇發(fā)作評分標準[3]:0級,無行為上的發(fā)作反應;Ⅰ級,節(jié)律性點頭或頭面部抽動;Ⅱ級,陣攣性咀嚼或點頭甩尾;Ⅲ級,頭部顫搐加前肢陣攣性抽搐;Ⅳ級:袋鼠姿勢或多肢抽動;Ⅴ級,全面性持續(xù)強直-陣攣發(fā)作。每天對每只大鼠在 PTZ注射后觀察30～ 60min,并記錄癲癇發(fā)作的級別、發(fā)作潛伏期(s)(即注入 PTZ到首次癇性發(fā)作之間經(jīng)歷的時間)及發(fā)作持續(xù)時間(s),凡出現(xiàn)連續(xù) 5dⅡ級以上癇性發(fā)作的大鼠為達到點燃標準。②電鏡觀察:實驗動物麻醉后斷頭處死,在低溫條件下迅速取肝臟,用于電鏡檢測。

圖2 癲癇肝臟a

圖1 正常肝臟

2 結果

2.1 行為學觀察結果

癲癇組實驗動物在實驗過程中均有顯示連續(xù)多次Ⅱ～Ⅴ級驚厥發(fā)作,全部達到點燃標準。癲癇組實驗動物在注射戊四氮后2～ 6min內(nèi)即開始發(fā)作,首先出現(xiàn)瞼肌陣攣、點頭運動、尾巴翹起,嚴重者繼之雙前肢抬起陣攣,隨后出現(xiàn)四肢抽搐,部分動物出現(xiàn)翻滾,每次發(fā)作持續(xù) 1～ 30min,常反復發(fā)作。

2.2 電鏡觀察結果

正常對照組肝臟結構正常(圖1),癲癇組肝臟發(fā)生明顯改變,細胞核染色質(zhì)邊集(圖2),線粒體變圓(圖3)。

圖3 癲癇肝臟 b

3 討論

用于癲癇研究的動物模型種類繁多,曾用于癲癇研究的動物模型約有100余種。依據(jù)制備方法不同可分為化學藥物模型、電刺激模型等;依據(jù)發(fā)作情況可分為癇性發(fā)作模型 (急性 )和癲癇模型(慢性);按發(fā)作表現(xiàn)可分為急性單純部分發(fā)作模型、慢性單純部分發(fā)作模型、復雜部分發(fā)作模型、癲癇持續(xù)狀態(tài)模型、全身強直陣攣發(fā)作模型、失神發(fā)作模型、難治性癲癇模型;按主要致病機制可分為免疫性癲癇模型、遺傳性癲癇模型等。其中慢性點燃模型和急性癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus,SE)模型都屬于 M EL模型 ,在癲癇研究種廣泛應用。有關資料顯示雄性成年 Wistar大鼠具有對癲癇點燃的先天易感性,是制作點燃癲癇模型的常選動物[4]?；瘜W點燃,是重復給予動物某種化學致癇劑(閾下劑量),戊四氮是最常用的化學點燃藥物,可使動物出現(xiàn)癲癇敏感性增高并持續(xù)存在[5],最后形成癲癇通常用于制備大鼠慢性點燃模型。慢性點燃模型適合于對癲癇病理、傳播機制和癲癇灶形成機制以及篩選抗癲癇藥物的研究。但人們只關注戊四氮致癇引起海馬神經(jīng)元的損傷,在探討其致癇機制和藥物治療機制的研究中忽略了戊四氮引起其它臟器損傷的作用。我們的研究結果證實,戊四氮致大鼠癲癇的同時伴有肝臟的損傷。但戊四氮導致的肝損傷作用,是否對其致癇作用有關系尚待進一步研究。

[1]楊艷華.丙戊酸鈉-苯妥英鈉-拉莫三嗪對戊四氮點燃大鼠肝腎細胞影響的研究.河北醫(yī)科大學,碩士論文,2008

[2]李國麗.丙戊酸鈉-卡馬西平和托吡酯對戊四氮點燃大鼠模型肝臟和腎臟影響的研究.河北醫(yī)科大學,碩士論文,2008

[3]Erdtmann-Vourliotis M,Riechert U,Mayer P,et al.Pentyenetetrazole(PT Z)-induced c-fos ex pression in the hippocampus of kindled rats in suppressed by concomitant treatment with naloxone[J].Brain Res,1998,792(2):299-308

[4]Eskazan E,Onat FY,Alter R,et,al.Resistance to propagafion of amygdaloid kindling seizures in rats with genetic absence epilepsy。[J].Epilepsia,2002,43(10):1115-1119

[5]Urca G,Frenk H.Intracerebral opiates block the epileptic effect of intracerebroventricular(ICV)leucine-enkephalin[J].Brain Res,1983,259(1):103-110