宋振忠，鐘旗，徐志光，許禮義，呼西旦

（新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆烏魯木齊 830000）

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium)引起的人、畜、禽共患的一種慢性傳染病，由人結(jié)核分枝桿菌(MTB)、牛分枝桿菌(MB)、禽型分枝桿菌(M, avium)、非洲分枝桿菌以及田鼠分枝桿菌（M,microti）所引起，統(tǒng)稱這些病原為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物(或群)。

目前已知，結(jié)核病除感染人外還能使50多種哺乳動(dòng)物和25種禽類感染，牛是最敏感的動(dòng)物。牛結(jié)核主要由牛分枝桿菌引起，人結(jié)核的10%以上由牛分枝桿菌引起。每年，世界上大約有3百萬(wàn)人感染牛結(jié)核桿菌造成結(jié)核病。中國(guó)是世界上感染結(jié)核病較高的22個(gè)國(guó)家之一。由于牛和人類的關(guān)系(牛奶、牛肉及耕牛等)較其他動(dòng)物更為密切，因此，牛結(jié)核又是任何其他動(dòng)物結(jié)核病最大的傳染源。其傳染和流行嚴(yán)重地影響到畜牧業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，不僅可以造成奶牛乳房炎、結(jié)核性胸膜炎等疾病，還能造成牛奶產(chǎn)乳率和乳質(zhì)下降，更嚴(yán)重威脅著人類的身心健康。牛結(jié)核病被國(guó)際獸疫局定為B類傳染病，我國(guó)將其列入二類動(dòng)物疫病。

結(jié)核分枝桿菌按其致病力可分為3種型，即人型、牛型和禽型，三者有交叉感染現(xiàn)象。牛型主要侵害牛，其次侵害人、豬、馬、綿羊和山羊等，在所有牛種中奶牛最為易感。牛分枝桿菌共可感染50多種哺乳動(dòng)物。

本病無(wú)季節(jié)流行性，一年四季均可發(fā)生，在農(nóng)村主要以散發(fā)為主，規(guī)?；B(yǎng)牛場(chǎng)主要以區(qū)域性流行為主。牛結(jié)核病的潛伏期一般為16～45 d，或者更長(zhǎng)，通常為慢性。在感染初期幾乎不表現(xiàn)出特有的臨床癥狀。感染一段時(shí)間后，一般日漸消瘦，精神不振，頻頻咳嗽，毛粗無(wú)光，皮膚失去彈性，食欲不振，產(chǎn)奶量下降等臨床癥狀。由于牛感染結(jié)核病的經(jīng)過(guò)往往比較緩慢，根據(jù)動(dòng)物患病器官的不同，表現(xiàn)出的臨床癥狀也各不一致。牛結(jié)核病的臨床癥狀主要分為以下幾種類型：肺結(jié)核、乳房結(jié)核、腸道結(jié)核、淋巴結(jié)核和生殖結(jié)核等。

目前，在結(jié)核病的監(jiān)測(cè)和診斷中，普遍采用結(jié)核菌素皮內(nèi)實(shí)驗(yàn)（TT）、細(xì)菌痰涂片、細(xì)菌的分離培養(yǎng)等傳統(tǒng)的技術(shù)。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展，出現(xiàn)了很多適合結(jié)核病檢測(cè)的先進(jìn)技術(shù)，本文就對(duì)這些新老技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)要的概述。

一、檢測(cè)診斷技術(shù)的概述

（一）細(xì)菌學(xué)檢測(cè)技術(shù)

1.結(jié)核桿菌的生物學(xué)特征。結(jié)核桿菌大小為0.2～0.5 μm×1.5～4.0 μm，兩端鈍圓，無(wú)芽胞和莢膜，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，革蘭氏染色呈陽(yáng)性。人型結(jié)核桿菌細(xì)長(zhǎng)而稍彎曲，牛型略短而粗，禽型小而粗，而且略具多形性。本菌由于細(xì)胞壁中含有大量的糖脂，普通的染色方法很難使其著染。通常采用萋爾-尼爾遜抗酸染色法進(jìn)行染色，抗酸桿菌呈特征性的紅色，而其它細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色。

2.結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特性。通常采集患病動(dòng)物的尿液、痰、胸水、腹水、膿液或傷口分泌物和肺、淋巴結(jié)等有典型鈣化灶的病變器官進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)。本菌為專性需氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格，常用羅杰二氏培養(yǎng)基、改良的羅杰二氏培養(yǎng)基、丙酮酸培養(yǎng)基和小川培養(yǎng)基培養(yǎng)。最適生長(zhǎng)溫度為37℃～37.5℃。本菌生長(zhǎng)緩慢，特別是初代培養(yǎng)，一般需10～30 d才能看到菌落。其生長(zhǎng)速度依次為禽分枝桿菌，結(jié)核分枝桿菌，牛分枝桿菌。菌落粗糙、隆起、不透明、邊緣不整齊，呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色。在液體培養(yǎng)基里，因菌體含類脂而具疏水性，形成浮于液面有皺褶的菌膜。傳統(tǒng)的結(jié)核桿菌臨床診斷一般依賴于細(xì)菌學(xué)方法，其中痰涂片抗酸染色法快速，但靈敏度低，特異性差，需要觀察者有豐富的經(jīng)驗(yàn)積累，且至少需要有大于5×106/L的細(xì)菌才能檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果，而且無(wú)法區(qū)分MTB和非MTB感染，同時(shí)不能區(qū)分死菌和活菌。此方法培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)(至少2個(gè)月)，已很難滿足生產(chǎn)與生活的需要。但是不論是何種檢測(cè)技術(shù)最終的完全確診還要以羅杰(L-J)固體培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)。

（二）免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 結(jié)核分枝桿菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌，因此機(jī)體抵抗結(jié)核分枝桿菌的感染主要依靠細(xì)胞免疫。在機(jī)體感染了結(jié)核分枝桿菌后，最早在機(jī)體內(nèi)引起的是細(xì)胞免疫；而體液免疫是隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢的增強(qiáng)；細(xì)胞免疫在結(jié)核桿菌感染的后期又不表現(xiàn)出來(lái)，所以要準(zhǔn)確的判斷動(dòng)物所處的感染期，以采用合適的檢測(cè)方法。

1.結(jié)核菌素皮內(nèi)試驗(yàn)（TT）。用各種提純的結(jié)核菌素（PPD）皮內(nèi)注射動(dòng)物，一段時(shí)間后根據(jù)皮厚差來(lái)判斷結(jié)核病的一種方法。目前該方法被世界各國(guó)廣泛采用，并且是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織OIE推薦的診斷牛結(jié)核病的唯一方法。該方法檢出率和準(zhǔn)確性都比較高，但用該方法不能區(qū)分致病性分枝桿菌和非致病性分枝桿菌感染，更不能區(qū)分致病性結(jié)核桿菌的型、在用BCG免疫的地區(qū)或國(guó)家，不能區(qū)分自然感染和免疫個(gè)體、對(duì)感染嚴(yán)重的個(gè)體有可能出現(xiàn)假陰性的結(jié)果、在一段時(shí)間內(nèi)（30 d），由于遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)（DTH）不能重復(fù)進(jìn)行、必須進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，否則嚴(yán)重影響結(jié)果。同時(shí)此技術(shù)操作要求較高，主觀性比較大，不能進(jìn)行大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。

2.間接ELISA法（iELISA）。根據(jù)抗原在固體支持物上的吸附性及抗原抗體的特異性與酶的高效性的原理而設(shè)計(jì)的方法。該方法簡(jiǎn)單易行，無(wú)需特殊精密儀器；能夠大規(guī)模的進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，且具有高特異性高敏感性的特點(diǎn)，所以在結(jié)核病血清學(xué)診斷方面研究最多，目前該方法主要作為PPD的一個(gè)補(bǔ)充。但該方法由于觀察對(duì)象不同、檢測(cè)使用抗原不同、質(zhì)量控制困難等影響了該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，導(dǎo)致其結(jié)果差異較大。早期采用PPD作為檢測(cè)抗原，隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，大量的蛋白在體外獲得并用于診斷抗原的研究。該方法較PPD-ELISA具有更高的特異性，但敏感性有所下降。據(jù)報(bào)告，ELISA法檢測(cè)結(jié)核抗體的敏感性為62.0%～94.7%，特異性為91.2%～94.0%。因此，目前此法仍不失為結(jié)核病、特別是肺外結(jié)核診斷中有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室診斷方法之一。

3.免疫斑點(diǎn)測(cè)定法。即以硝酸纖維膜代替免疫滴定板，以特異的結(jié)核菌抗原致敏結(jié)合在纖維膜帶上，再與檢測(cè)血清反應(yīng)，繼之以酶標(biāo)記的抗牛IgG偶聯(lián)反應(yīng)后進(jìn)行顯色反應(yīng)，用肉眼或光密度計(jì)與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)比較，此法更易施行。有人認(rèn)為可作為初篩試驗(yàn)。目前已有商品采用膠體金與蛋白質(zhì)A結(jié)合物代替酶與第二抗體偶聯(lián)，可在數(shù)分鐘至20 min內(nèi)完成。

4.免疫印跡法。是利用SDSPAGE技術(shù)與酶的高敏感性相結(jié)合的技術(shù)。首先用SDS-PAGE把蛋白按分子量分開，再把分開的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，用檢測(cè)血清來(lái)進(jìn)行中和反應(yīng)。繼之以酶標(biāo)記的抗牛IgG偶聯(lián)物，再加底物顯色，觀察結(jié)果進(jìn)行分析。此法過(guò)于復(fù)雜，但有助于新抗原的鑒定研究。陸學(xué)東等以此技術(shù)檢測(cè)496例結(jié)核病，610例正常人及非結(jié)核病病人的血清，其敏感性90%，特異性96%。優(yōu)于同時(shí)進(jìn)行的ELISA法。作者還發(fā)現(xiàn)30～43KDa多肽成分是主要的診斷抗原成分。

5.淋巴細(xì)胞增生實(shí)驗(yàn)。致敏的外周血淋巴細(xì)胞（PBLC）在特異性抗原的刺激下，可使抗原特異性T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生增生性反應(yīng)。然后用同位素或5-溴脫氧尿苷標(biāo)記，配合流式細(xì)胞儀，可對(duì)其進(jìn)行識(shí)別和計(jì)數(shù)。通過(guò)測(cè)定外周血循環(huán)中的增生淋巴細(xì)胞的比例可了解淋巴細(xì)胞增生的程度，間接反映淋巴細(xì)胞被特異性抗原致敏的情況，從而分析動(dòng)物機(jī)體對(duì)結(jié)核桿菌的細(xì)胞免疫狀態(tài)。該方法試驗(yàn)耗時(shí)而且前期準(zhǔn)備以及試驗(yàn)操作都比較復(fù)雜，比如需要較長(zhǎng)的孵育期和要使用放射性核苷酸，所以在常規(guī)的牛結(jié)核病診斷中并不被采用，而僅僅用于野生動(dòng)物以及動(dòng)物園動(dòng)物的檢測(cè)。

6.IFN-γ檢測(cè)法。IFN-γ又稱Ⅱ型干擾素，是一種由CD4+TH1、CD8+T型細(xì)胞以及NK細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，它不僅具有Ⅰ型IFN(α-干擾素、β-干擾素)的抗病毒和抗腫瘤活性，更重要的是還具有促進(jìn)MHCⅡ類抗原表達(dá)、增強(qiáng)APC細(xì)胞與T細(xì)胞的相互作用、增強(qiáng)T細(xì)胞輔助抗體產(chǎn)生和細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生的能力等諸多免疫調(diào)節(jié)活性。其原理是當(dāng)從感染牛獲得的致敏淋巴細(xì)胞再次遇到牛提純結(jié)核菌素(主要是MTB特異性的蛋白抗原，如ESAT-6、CFP-10)，可以在體外模擬延遲型過(guò)敏反應(yīng)(DTH)，從而使得致敏淋巴細(xì)胞釋放相對(duì)大劑量的γ干擾素。而γ干擾素可以用IFN-γ的免疫學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)到，沒(méi)有感染的牛，其淋巴細(xì)胞再次遇到抗原時(shí)，并不釋放γ干擾素。因此，檢測(cè)到γ干擾素與牛型結(jié)核分枝桿菌的接觸具有相關(guān)性。檢測(cè)方法是將試驗(yàn)牛的血液淋巴細(xì)胞培育，加入特異性的抗原一起孵育16～24 h，致敏的淋巴細(xì)胞釋放出IFN-γ，以IFN-γ-ELISA進(jìn)行定量測(cè)定。

體外IFN-γ釋放反應(yīng)除特異性較高外，還有以下一些優(yōu)點(diǎn)，結(jié)果較為客觀，24～48 h可完成，不會(huì)激發(fā)記憶性免疫反應(yīng)。但其最大的缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴，因而短時(shí)間內(nèi)較難普遍推廣。γ-干擾素測(cè)定法的廣泛性田間試驗(yàn)己在世界上許多國(guó)家(包括澳大利亞、愛爾蘭、新西蘭、阿根廷、西班牙、意大利和美國(guó))完成，并在澳大利亞和新西蘭被認(rèn)可為正式試驗(yàn)。目前已有20多萬(wàn)頭經(jīng)過(guò)測(cè)試，本法敏感性為77%～93.6%，而相對(duì)于PPD試驗(yàn)的敏感性為65.6%～84.4%，特異性為98.1%。

（三）分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

1.結(jié)核桿菌的基因組特征。牛分枝桿菌AF2122/97基因序列全長(zhǎng)4,345,492 bp，其中GC含量為65.63%，含有3952個(gè)編碼蛋白的基因，一個(gè)噬菌體和42個(gè)插入元件。其基因組在核酸水平上與人型結(jié)核分枝桿菌有大于99.95%的同源性，二者之間表現(xiàn)出明顯的線性相關(guān),但并未表現(xiàn)出廣泛的易位、重復(fù)或翻轉(zhuǎn)。在牛結(jié)核分枝桿菌基因組中有11處基因缺失，大小范圍為1～12.7 kb。

研究發(fā)現(xiàn)，人型復(fù)合分枝桿菌(包括人結(jié)核分枝桿菌、牛結(jié)核分枝桿菌、非洲型分枝桿菌以及田鼠分枝桿菌)中存在一些插入序列(IS)可作為探針用于結(jié)核病的診斷,同時(shí)采用限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)對(duì)人型復(fù)合分枝桿菌能進(jìn)行種水平的鑒定分型研究。研究最廣泛的是與腸桿科中插入片段相類似的插入基因片段,包括IS6110,IS986和IS987。這些基因片段都只存在于人型復(fù)合分枝桿菌中, 并以多拷貝形式出現(xiàn)。近年發(fā)現(xiàn)人型復(fù)合分枝桿菌中還含有第二類插入序列IS1081,它與IS6110極為不同, 但與金黃色葡萄球菌中IS256相似。IS1081也只存在于人型復(fù)合分枝桿菌中,拷貝數(shù)為6個(gè)。

2.用于結(jié)核病檢測(cè)的主要分子生物學(xué)技術(shù)。用于結(jié)核病的診斷技術(shù)主要有核酸擴(kuò)增技術(shù)、基因探針技術(shù)、PCR與基因探針相結(jié)合的技術(shù)、DNA指紋圖譜檢測(cè)法、基因測(cè)序法和生物芯片技術(shù)等。

(1)核酸擴(kuò)增技術(shù)。PCR是一種根據(jù)核酸復(fù)制原理采用分子技術(shù)模擬細(xì)胞內(nèi)核酸復(fù)制過(guò)程的DNA或RNA體外擴(kuò)增技術(shù)。1989年,Hance等最先報(bào)道將PCR技術(shù)應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌（TB）的檢測(cè)。PCR檢測(cè)方法的突出特點(diǎn)是靈敏度高,可以檢測(cè)出1～100 fg純化的分枝桿菌DNA, 相當(dāng)于1～20個(gè)MTB, 與傳統(tǒng)的痰涂片抗酸染色和MTB培養(yǎng)方法相比,其敏感性得到了大大提高。此外, 與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,PCR檢測(cè)的報(bào)告周期短, 1～2 d即可發(fā)出報(bào)告, 因此對(duì)于TB的早期診斷具有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。

(2)基因探針技術(shù)。基因探針能識(shí)別特異核苷酸序列的帶標(biāo)記的核酸分子，也就是分子雜交。采用放射性同位素和地高辛、光敏生物素、化學(xué)發(fā)光和熒光等非同位素標(biāo)記。目前已建立了菌落雜交、斑點(diǎn)雜交、微孔板雜交和原位雜交等方法。DNA探針技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)是高的特異性，但敏感性并不是很理想，多數(shù)探針只能檢出106個(gè)細(xì)菌/L以上的標(biāo)本，需依賴純培養(yǎng)，因此受到很大限制。張玲霞等研究表明，DNA探針直接用于TB患者痰標(biāo)本的陽(yáng)性率為22.2%，低于涂片抗酸染色檢查。

(3)PCR與基因探針相結(jié)合的方法。PCR方法與基因探針技術(shù)的結(jié)合一方面可以克服探針技術(shù)敏感性不強(qiáng)的缺點(diǎn)，另一方面，核酸探針的引入可消除很大一部分PCR因非特異性擴(kuò)增帶來(lái)的假陽(yáng)性結(jié)果。因此，這兩者的結(jié)合同時(shí)具備了高度敏感和高度特異的特點(diǎn)，代表了TB分子生物學(xué)診斷發(fā)展的一個(gè)主要方向，是目前TB分子生物學(xué)診斷方法中最有研究和應(yīng)用價(jià)值的方法，也是目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的方法。由于PCR方法、可用的核酸探針的種類、探針的標(biāo)記及其檢測(cè)方法多種多樣，因此PCR與基因探針結(jié)合產(chǎn)生的新技術(shù)也是多種多樣，較為重要的有：熒光定量PCR技術(shù)、基因探針擴(kuò)增直接實(shí)驗(yàn)、PCR-ELISA技術(shù)和PCR-分子信標(biāo)技術(shù)等。

(4) DNA指紋圖譜技術(shù)。其基本原理是用限制性內(nèi)切酶消化結(jié)核分枝桿菌染色體DNA上的特定的核苷酸序列，在瓊脂糖凝膠電泳中分離后，將限制性片段轉(zhuǎn)移至膜上，與帶標(biāo)記的DNA探針雜交，檢測(cè)出與探針同源的限制性片段。這些片段數(shù)目和大小的變化使每株分離株呈現(xiàn)特征帶型即指紋圖譜型。目前用于菌株分型的遺傳標(biāo)記普遍采用插入序列或其他重復(fù)序列作為分型的標(biāo)記。IS6110 DNA指紋圖譜在結(jié)核病上可有效的鑒定菌株，已解決多種流行病學(xué)問(wèn)題，已證明是一種有力的流行病學(xué)研究手段，但目前這種技術(shù)在臨床上應(yīng)用還很有限，只是選擇性的對(duì)臨床分離株進(jìn)行基因分型，大規(guī)模的應(yīng)用還有賴于DNA指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)方法的推廣、譜型計(jì)算機(jī)軟件的開發(fā)和實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員素質(zhì)的提高和實(shí)驗(yàn)條件的改善。

分子生物學(xué)方法以其敏感性好、特異性高和檢測(cè)快速等特點(diǎn)，在結(jié)核病的診斷中發(fā)揮著巨大優(yōu)勢(shì)，并取得了較好的效果。但由于分子技術(shù)的高靈敏性和低特異性，或其他的一些或多或少的不足，導(dǎo)致這些方法都待進(jìn)一步的成熟和完善。且多數(shù)分子生物學(xué)檢測(cè)有賴于先進(jìn)的檢測(cè)儀器和獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，很難在基層實(shí)驗(yàn)室普及。因此，分子生物學(xué)技術(shù)到現(xiàn)在還無(wú)法取代結(jié)核病的傳統(tǒng)檢測(cè)方法。

二、結(jié)語(yǔ)

牛結(jié)核病是一種慢性消耗性疾病，一般區(qū)域性流行，具有感染率高而發(fā)病率低等特點(diǎn)。

傳統(tǒng)的病原學(xué)檢測(cè)方法雖然簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、易行，但靈敏度低，特異性差，需要標(biāo)本中有一定數(shù)量的細(xì)菌方能檢出抗酸菌。但細(xì)菌的分離和培養(yǎng)，需花費(fèi)大約3～8周的時(shí)間，若再進(jìn)行菌株的分型鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)又需要1～3個(gè)月的時(shí)間，這對(duì)于結(jié)核病的早期診斷與治療無(wú)益。

目前臨床上應(yīng)用最廣泛的是遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)試驗(yàn)，即結(jié)核菌素試驗(yàn)。該方法在牛結(jié)核病的診斷和防制過(guò)程中起到了重要的作用,美國(guó)和歐共體的許多國(guó)家利用該方法消滅和控制了牛結(jié)核病,以至于現(xiàn)在世界動(dòng)物衛(wèi)生組織仍以該方法作為牛結(jié)核病法定的檢疫方法。研究發(fā)現(xiàn)，在相當(dāng)數(shù)量的結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性牛中，既找不出特征病變，又不能分離出結(jié)核菌，或僅僅分離出非典型的分枝桿菌，給基層的撲殺工作帶來(lái)困難，因此在實(shí)際工作中用于診斷牛結(jié)核病并不十分理想。目前一些國(guó)家采用比較結(jié)核菌素試驗(yàn)(即比較皮內(nèi)試驗(yàn)，SlCTT)。該方法在頸部一側(cè)的不同部位，同時(shí)注射M.bovis PPD和M.avium PPD。對(duì)兩種PPD的不同反應(yīng)，能夠提示被檢動(dòng)物是M.bovis感染還是非特異的DTH反應(yīng)。楊經(jīng)緯用傳統(tǒng)的牛型PPD試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在檢出的98頭陽(yáng)性牛中，用比較變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)7頭為陰性，證實(shí)我國(guó)禽結(jié)核桿菌等非典型分枝桿菌確實(shí)影響了牛結(jié)核的檢疫。使用比較變態(tài)反應(yīng)，可以有效降低變態(tài)反應(yīng)的非特異性反應(yīng)。該方法適合在我國(guó)普遍推廣。

γ-干擾素試驗(yàn)已在許多國(guó)家(澳大利亞、愛爾蘭、新西蘭、阿根廷、美國(guó)等)完成了田間試驗(yàn)，證明該方法的敏感性為77%～93.6%，高于結(jié)核菌素試驗(yàn)的敏感性(65.6%～84.4%)。IFN-γ 測(cè) 定 法不僅消除了結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果解釋的主觀性，而且縮短了試驗(yàn)的時(shí)間。但是γ-干擾素試驗(yàn)最大的缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴，但目前國(guó)內(nèi)已經(jīng)研制出了國(guó)產(chǎn)的γ-干擾素試驗(yàn)試劑盒，隨著臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的完善，γ-干擾素試驗(yàn)存在的問(wèn)題也會(huì)迎刃而解。

因此，在牛結(jié)核病的監(jiān)測(cè)和檢疫中，筆者認(rèn)為應(yīng)用比較皮內(nèi)試驗(yàn)或者γ-干擾素試驗(yàn)?zāi)芎芸斓奶岣吲＝Y(jié)核病的檢出率，對(duì)于目前牛結(jié)核病的防控具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

（略）