謝海波，莫新民，羅堯岳

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長(zhǎng)沙 410007）

動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)之一，是一種常見(jiàn)病、多發(fā)病。根據(jù)AS的表現(xiàn)，中醫(yī)可將其歸為“血瘀”、“瘕結(jié)”等范疇，常采用活血化瘀藥治療?；钛鏊幱谢钛雇?、活血調(diào)經(jīng)、活血療傷、破血消癥之分[1]?？偟膩?lái)說(shuō)，根據(jù)活血化瘀程度不同，可分為活血和破血兩類。本研究選用活血藥當(dāng)歸、川芎和破血藥三棱、莪術(shù)，開(kāi)展兩類藥對(duì)血脂和血液流變學(xué)的對(duì)比研究，探討兩者的作用差異，為臨床處方選藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，8周齡，體質(zhì)量 （200±10）g，60只。由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCxk豫2005-001。

1.1.2 藥物 當(dāng)歸、川芎、三棱、莪術(shù)均購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，常規(guī)煎煮，制成含生藥0.18 g/mL的藥液，5℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試劑 膽固醇由中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司提供（批號(hào)：20080923）；膽酸鈉由上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司提供（批號(hào):080628）；維生素D3注射液由蘇州第六制藥廠生產(chǎn)（批號(hào):070621）；丙基硫氧嘧啶由南通精華制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào):080701）；阿托伐他?。⑵胀祝┯纱筮B輝瑞制藥有限公司分裝（批號(hào):85837034）；豬油購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)?？偰懝檀?TC)試劑盒：德國(guó)羅氏診斷有限公司提供（批號(hào):11491458216）；甘油三酯(TG)試劑盒：德國(guó)羅氏診斷有限公司提供（批號(hào):11730711216）；低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒：德國(guó)羅氏診斷有限公司提供（批號(hào):04711220190）；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒：德國(guó)羅氏診斷有限公司提供（批號(hào):04713214190）。

1.1.4 儀器 P800全自動(dòng)生化分析儀：日本生產(chǎn)；T5-Ⅱ臺(tái)式離心機(jī)：長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司提供；SA-6000自動(dòng)血流變測(cè)試儀：北京賽科希德科技發(fā)展有限公司提供；L500臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)：湘儀離心機(jī)儀器有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表法將60只大鼠分為5組，即空白組、模型組、活血藥（當(dāng)歸、川芎）組、破血藥（三棱、莪術(shù)）組、他汀組，每組12只。

1.2.2 造模方法 空白組每日給予普通飼料，其它各組大鼠首先腹腔注射維生素D370萬(wàn)IU/kg，分3次，每2 d注射1次，然后各組每日每只給予高脂飼料（2%膽固醇，0.5%膽酸鈉，3%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶和94.3%基礎(chǔ)飼料）20 g，連續(xù)喂飼12周[2-3]。隨機(jī)抽取2只大鼠，處死后速取主動(dòng)脈，浸入4%多聚甲醛溶液中，固定48 h，石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)已形成粥樣硬化斑塊，提示造模成功。

1.2.3 給藥劑量及方法 造模成功后，灌胃給藥，每天1次，灌胃體積10 mL/kg，空白組、模型組灌服等體積白開(kāi)水；活血藥組灌服當(dāng)歸、川芎煎液，給藥劑量為1.8 g/（kg·d）；破血藥組灌服三棱、莪術(shù)煎液，給藥劑量1.8 g/（kg·d）；他汀組灌服阿托伐他汀各組給藥體積10 mL/(kg·d)，給藥劑量0.001 8 g/kg，均按60 kg成人體表面積換算，連續(xù)給藥4周。

1.2.4 血脂檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，大鼠在禁食8 h（不禁水）后，斷頭采血，離心后取血清，用酶法在全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定TC、TG、HDL-C、LDL-C。

1.2.5 血液流變學(xué)的檢測(cè) 在大鼠禁食8 h（不禁水）后，斷頭采血4 mL，采用SA-6000自動(dòng)血流變測(cè)試儀測(cè)全血黏度、血漿黏度。注意采血后及時(shí)送檢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行分析處理，所有數(shù)據(jù)均以“±s”表示，組間比較方差齊時(shí)用方差分析，方差不齊時(shí)用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血脂的影響

模型組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C明顯高于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；活血組、破血組、他汀組血清TC均低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三者組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；活血組、破血組血清TG均低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩者組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；破血組血清LDL-C低于活血組，但兩者組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血液流變學(xué)變化的影響

模型組全血黏度（低切、中切、高切）、血漿黏度明顯高于空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；活血組、破血組、他汀組全血黏度（低切、中切、高切）、血漿黏度低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三者組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血脂的影響 （n=10，±s，mmol/L）

表1 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血脂的影響 （n=10，±s，mmol/L）

注：與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與活血組比較*P＜0.05，**P＜0.01。下表同。

組別空白組模型組他汀組活血組破血組藥物劑量（g/kg）——0.0018 1.8 1.8 TC 1.59±0.39△△** 3.97±0.77* 2.95±0.46△2.85±0.55△2.62±0.46△△TG 0.45±0.11△△1.06±0.36* 0.74±0.22 0.55±0.21△0.52±0.16△△LDL-C 0.24±0.05△△** 1.22±0.40 0.75±0.15△0.90±0.33 0.68±0.13△HDL-C 1.52±0.36△△2.49±0.43 2.06±0.22 1.89±0.48 2.09±0.32

表2 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血液流變學(xué)變化的影響 （±s，n=10，mpa·s）

表2 活血藥、破血藥對(duì)各組大鼠血液流變學(xué)變化的影響 （±s，n=10，mpa·s）

組別 藥物劑量（g/kg）全血黏度（低切）全血黏度（中切）全血黏度（高切） 血漿黏度空白組模型組他汀組活血組破血組——0.001 8 1.8 1.8 12.06±1.30△△15.40±1.98* 12.30±1.58△12.51±1.91△12.68±1.79△6.28±0.65△△8.05±0.94* 6.49±0.78△△6.59±0.73△6.74±0.82△4.59±0.47△△6.65±1.03* 5.08±0.70△5.09±0.78△5.15±0.94△1.34±0.22△△** 1.95±0.17** 1.72±0.14△1.68±0.14△△1.73±0.12△

3 討論

大量的流行病學(xué)、臨床及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，血液中TC含量增高與AS發(fā)生的關(guān)系密切，是冠心?。–HD）發(fā)病率和致死率增高的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。LDL是TC轉(zhuǎn)運(yùn)并進(jìn)入細(xì)胞的主要載體。LDL受體是細(xì)胞表面的一種糖蛋白，在人體代謝中它通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞攝取LDL及增加LDL的降解來(lái)調(diào)節(jié)血漿TC水平。目前，已經(jīng)把降低LDL-C作為高膽固醇血癥患者治療的主要目標(biāo)。HDL顆粒具有膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)的作用，直接或間接將膽固醇轉(zhuǎn)送至肝臟降解，以減少膽固醇在動(dòng)脈壁的沉積。血清HDL-C含量降低是CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，TG的增高亦是CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。有學(xué)者[4-5]研究表明CHD血瘀證患者TG和LDL-C水平明顯增高。亦有人[6]研究認(rèn)為血瘀證是一種因血液的流動(dòng)性和黏性異常而引起的血流量紊亂癥，與血液流變學(xué)異常改變密切相關(guān)。有學(xué)者[7]提出血液流變學(xué)已成為血瘀證診斷與臨床療效客觀評(píng)定的核心指標(biāo)。

魏會(huì)平[8]等探討了當(dāng)歸注射液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）血液動(dòng)力學(xué)的影響，結(jié)果表明：當(dāng)歸注射液可明顯降低DIC時(shí)的血黏度增高，抑制血小板黏附和聚集，增強(qiáng)紅細(xì)胞的變形性。王普霞[9]等通過(guò)大鼠血瘀模型血液流變性及凝血試驗(yàn)，證實(shí)莪術(shù)不同炮制品均具有一定的抗血小板聚集、抗凝血及調(diào)節(jié)血液流變性作用。黨春蘭等[10]研究了中藥三棱對(duì)血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，結(jié)果表明三棱組的全血黏度、血細(xì)胞壓積以及血沉速率與空白對(duì)照組相比均有明顯減小。姜華[11]等觀察了川芎微乳對(duì)氣虛血瘀型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)川芎微乳可明顯降低氣虛血瘀型大鼠全血黏度和全血還原黏度、紅細(xì)胞比容以及紅細(xì)胞聚集指數(shù)，且該作用呈劑量依賴性。阿魏酸是當(dāng)歸的有效成分之一，現(xiàn)代藥理研究表明阿魏酸具有抑制肝合成膽固醇的作用，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制肝細(xì)胞中羥戊酸-5-焦鱗酸脫氫酶活性，同時(shí)通過(guò)抗氧化、自由基清除以及抗血栓3種作用相互協(xié)調(diào)產(chǎn)生抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。

本研究模型組血脂及血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)明顯高于空白組，說(shuō)明經(jīng)高脂喂飼可以引起大鼠血脂和血液流變學(xué)的改變，與目前的文獻(xiàn)報(bào)道相符。活血藥（當(dāng)歸、川芎）、破血藥（三棱、莪術(shù)）在降TC、TG方面無(wú)明顯差異，破血藥（三棱、莪術(shù)）降低LDL-C的幅度大于活血藥 （當(dāng)歸、川芎），但未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。活血藥（當(dāng)歸、川芎）、破血藥（三棱、莪術(shù)）均能降低AS大鼠全血黏度（低切、中切、高切）、血漿黏度。

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