梁成結(jié)，鐘歡妹，羅燦嶠，楊文敏

（1.廣州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心；廣州 510182；2.增城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科；廣州 510095；3.中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室；廣州 510089；4.廣州市兒童醫(yī)院 510120）

大鼠心臟插管留置術(shù)過(guò)程中極易出現(xiàn)如下幾個(gè)難題，致使實(shí)驗(yàn)無(wú)法完成：（1）由于所插頸外靜脈入口比所用的導(dǎo)管口徑還要小，所以要求初學(xué)者進(jìn)行“大管插細(xì)管”尤其感到困難。（2）所用的導(dǎo)管應(yīng)插多深？（3）留置導(dǎo)管設(shè)備固定后很易被大鼠破壞。④最關(guān)鍵的是留置管固定后：若方法不當(dāng)，所固定的管和彈簧極易被大鼠咬斷或破壞。即使“插管留置術(shù)”固定方法得當(dāng)，若加藥方法不當(dāng)也可能出現(xiàn)：術(shù)后幾個(gè)小時(shí)或超過(guò)24h，插入的導(dǎo)管往往只能成為加藥的通道，而不能成為抽血的通道，致使檢驗(yàn)所需血樣本不易獲得。

以上5點(diǎn)：只要有一點(diǎn)出現(xiàn)問(wèn)題，就意味著實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。本文通過(guò)深入探討這個(gè)實(shí)驗(yàn)，希望能為“大鼠心臟插管留置術(shù)”摸索出一套可行的具體方法，增加其成功率!

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)雄性SD大鼠20只，體重250～300g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)0037291、0038975。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材：一次性使用連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管（廣州藍(lán)波醫(yī)療器械設(shè)備有限公司）；消毒手術(shù)包；消毒動(dòng)物血管夾；腰椎穿刺針；三通管［1］；彈簧：長(zhǎng)40～50cm；直徑：0.42cm；彈簧的鋼絲直徑：0.05cm（廣州市越秀區(qū)新標(biāo)力彈簧經(jīng)管部提供）。非吸收性外科手術(shù)縫線規(guī)格：2/0（原7#），擴(kuò)張強(qiáng)度（N）≤14.10。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品：2％戊巴比妥鈉（40mg/kg）；肝素液125U/mL。

1.2 方法

1.2.1 插管操作方法：20只大鼠全部進(jìn)行心臟導(dǎo)管插入操作，心臟導(dǎo)管插入管完成后分成2組（導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組和導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組）。

操作過(guò)程如下：2％戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射麻醉，仰臥固定，常規(guī)備皮消毒，無(wú)菌條件下分離并暴露右頸外靜脈約1cm長(zhǎng)，用手術(shù)縫線結(jié)扎頸外靜脈遠(yuǎn)心端，盡量結(jié)扎最遠(yuǎn)端，以便有更長(zhǎng)的頸外靜脈暴露，便于操作。然后用手稍按心臟位，使心臟血返流到所結(jié)扎的血管，反復(fù)按心臟幾次，返流血最充盈時(shí)用動(dòng)脈夾夾住頸外靜脈近心端。血管充盈后靜置約5～8min，再用眼科剪剪一V型小口，迅速把直徑約1.0mm的一次性使用連續(xù)硬膜外麻醉導(dǎo)管插入頸外靜脈（插入血管后，配合操作松開(kāi)動(dòng)脈夾）約3cm左右進(jìn)入右心房（經(jīng)解剖證實(shí)），用注射器抽到回血后，結(jié)扎固定導(dǎo)管于血管上。順導(dǎo)管方向，用腰椎穿刺針把導(dǎo)管從大鼠頸背引出，縫合消毒頸下解剖口，導(dǎo)管內(nèi)注滿(mǎn)生理鹽水和抗凝劑（圖1）。

圖1 頸外靜脈Fig.1 The external jugular vein

1.2.2 插管動(dòng)物的分組：將完成插管的20雄性大鼠隨機(jī)分成：導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組、導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組，每組10只。導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔：即是導(dǎo)管固定后由頸背部引出，從彈簧內(nèi)孔中間穿入彈簧內(nèi)（如圖2B所示）；導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組：即是導(dǎo)管固定后由頸背部引出，導(dǎo)管從彈簧一端（離端約0.4處稍分離兩彈簧環(huán)形成一個(gè)“小口”）側(cè)邊“小口”進(jìn)入彈簧穿行（如圖2A所示）。

1.2.3 導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組和導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組操作：完成心臟導(dǎo)管插管手術(shù)后，為了固定導(dǎo)管不被大鼠咬斷或用爪拔出，通常用小彈簧把導(dǎo)管套住，再與三通管等相關(guān)設(shè)備連接。

導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組：這組動(dòng)物在完成上述導(dǎo)管插入操作后，將從頸背引出的導(dǎo)管正穿入彈簧內(nèi)孔，如圖2B所示。用用較粗非吸收性外科手術(shù)縫線把彈簧與體表皮膚縫合固定，使彈簧與大鼠體表近平行相貼，這樣導(dǎo)管穿入彈簧口處就會(huì)有一段導(dǎo)管外露。

導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組：這種固定方法（如圖2A所示），在“圖2A”箭頭處形成彈簧“一長(zhǎng)一短”兩段，用較粗非吸收性外科手術(shù)縫線（規(guī)格同上）把彈簧“一長(zhǎng)一短”兩段緊貼體表皮膚縫合固定。這種方法固定時(shí)要把“一長(zhǎng)一短”彈簧縫合固定住皮膚，使彈簧更多面積與體表相貼，受力面積更大，更加緊貼皮膚，而且體表彈簧接口處導(dǎo)管不會(huì)外露。

圖2 兩組大鼠導(dǎo)管與彈簧連接比較Fig.2 Comparison of the two routes of catheter insertion into the steel spring.A：Lateral insertion into the spring；B：Direct insertion into the spring.

以上兩組模型操作“導(dǎo)管”固定后由頸背部引出，穿過(guò)彈簧，彈簧一端固定于頸背部皮膚，另一端固定于飼養(yǎng)籠外的支架上，導(dǎo)管外端接注射帽等設(shè)備，術(shù)畢用125U/mL肝素液0.2mL保留沖洗導(dǎo)管，封管備用［2］。

2 結(jié)果

由表1可見(jiàn)，完成心臟導(dǎo)管插管手術(shù)后，導(dǎo)管與彈簧等設(shè)備固定時(shí)的效果：“導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組”明顯比“導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組”理想，實(shí)驗(yàn)期間“導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組”設(shè)備無(wú)一遭到破壞，可順利采血與加藥。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明：這套心臟插管留置術(shù)方法是高效可行的。

3 討論

在研究膿毒癥，在進(jìn)行臨床前藥理（如抗菌抗內(nèi)毒素、腎上腺素等）研究中，在進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)及疾病發(fā)生機(jī)制等多方面的研究，經(jīng)常需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行多次給藥、采血等操作。這種情況，“導(dǎo)管大鼠模型”是最好的解決辦法。本實(shí)驗(yàn)實(shí)際也屬于“導(dǎo)管大鼠模型”范疇，本實(shí)驗(yàn)的研究目的就是探討出一套“具體可行”的制作“導(dǎo)管大鼠模型”方法，使更多人掌握這項(xiàng)技術(shù)并少走彎路。導(dǎo)管大鼠模型是近年國(guó)外開(kāi)展應(yīng)用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停哂锌旖莘€(wěn)定、使用時(shí)間長(zhǎng)，具有藥品用量少、動(dòng)物需求量少，數(shù)據(jù)偏差小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好、節(jié)約時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。［3］

由于專(zhuān)門(mén)介紹如何“大鼠心臟的導(dǎo)管插管留置術(shù)”的文章太少，甚至查不到。所以有必要對(duì)該術(shù)式的細(xì)節(jié)進(jìn)行探討。

首先，導(dǎo)管從頸外靜脈插入右心房，其深度約為導(dǎo)管自身3刻度格左右（每格1cm），即約3cm左右。由于插入導(dǎo)管的深度與大鼠體重有關(guān)，通常大鼠的體重在250～300g時(shí)，所插入要求的深度大約是3cm，同時(shí)這樣體重大鼠的血管相對(duì)也粗些——導(dǎo)管易插入，實(shí)驗(yàn)操作也相對(duì)容易。當(dāng)然大鼠的體重與年齡由實(shí)驗(yàn)需要而定，當(dāng)大鼠體重在200g以下時(shí)，血管相對(duì)小些，心臟導(dǎo)管插入難度加大，所插入深度也相對(duì)淺些。因而對(duì)于不同體重的大鼠，行導(dǎo)管插入術(shù)之前須經(jīng)解剖實(shí)驗(yàn)確定插入的深度。

其次，插入導(dǎo)管前必須充盈靜脈血管約5～8min（操作方法即文章的前面的“插管操作方法”）。這是由于頸外靜脈血管相對(duì)小而導(dǎo)管大，導(dǎo)管很難插入。實(shí)驗(yàn)證明這種短時(shí)充盈血管的方法可使導(dǎo)管較易插入右心房，而且值得注意的是：用眼科剪剪開(kāi)頸外靜脈血插入口時(shí)，一定要迅速把導(dǎo)管插入血管，否則血管會(huì)很快收縮，導(dǎo)管難以插入。

再次，兩組大鼠導(dǎo)管固定方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較：

導(dǎo)管穿彈簧正內(nèi)孔組：這種彈簧固定法（如圖2B所示），彈簧與大鼠緊貼體表固定時(shí)，受力面不夠大，且接口處導(dǎo)管有一小段外露，固定程度遠(yuǎn)沒(méi)有“一長(zhǎng)一短”縫合固定好。有些人處理彈簧與導(dǎo)管連接時(shí)，通常還有兩種情況：1）彈簧與大鼠體表有個(gè)較大的夾角，受力點(diǎn)集中在一點(diǎn)上，嚴(yán)重影響大鼠的自由活動(dòng)，同時(shí)固定不良，極易被大鼠破壞；2）只用彈簧簡(jiǎn)單套住導(dǎo)管無(wú)縫線固定，則彈簧極易隨著大鼠活動(dòng)而移位，導(dǎo)管外露，從而易被大鼠抓壞或咬壞。這三種情況：設(shè)備極易受到大鼠咬壞或用爪抓壞（咬斷導(dǎo)管或把導(dǎo)管拔出）；或彈簧接觸點(diǎn)受力不均，影響大鼠活動(dòng)等，可至實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行下去。

表1 兩組大鼠導(dǎo)管固定時(shí)不同方法比較Tab.1 Comparison between the two groups of rats with different methods of catheter fixation

導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組操作：這種方法（如圖2A）可使彈簧緊貼體表，導(dǎo)管不外露，導(dǎo)管進(jìn)入彈簧接口處使彈簧形成的“一長(zhǎng)一短”兩端與體表皮膚縫合固定非常牢固，彈簧導(dǎo)管設(shè)備不容易被大鼠破壞。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，設(shè)備未曾被大鼠咬壞或抓壞。由于彈簧緊貼大鼠體表，受力面積大且較均勻，最大程度減少大鼠對(duì)彈簧等設(shè)備在體表連接的不適，所以大鼠自由活動(dòng)性好。

最后，當(dāng)留置導(dǎo)管多次采血時(shí)，在每次抽完血后，必須用生理鹽水抗凝劑配液沖洗導(dǎo)管，否則就會(huì)出現(xiàn)采血不暢的現(xiàn)象。這是由于每次抽完血后，導(dǎo)管內(nèi)必留有血液，若無(wú)進(jìn)行生理鹽水抗凝劑配液沖洗導(dǎo)管，導(dǎo)管內(nèi)血液極易出現(xiàn)凝固，賭塞導(dǎo)管通道。

綜上所述：本實(shí)驗(yàn)提倡的“導(dǎo)管穿彈簧側(cè)邊入內(nèi)孔組”，操作起來(lái)每一步思路及注意事項(xiàng)都非常清楚，常人很快就會(huì)操作，具有成功率高等優(yōu)點(diǎn)。但本實(shí)驗(yàn)在導(dǎo)管插入心臟前的準(zhǔn)備工作所需時(shí)間還有待縮短。

［1］楊文敏，曾其毅.腎上腺素對(duì)內(nèi)毒素致大鼠炎癥性肝損害的保護(hù)作用［J］.中國(guó)循證兒科雜志2007，12（04）：276-281.

［2］王寧，鄭江，郭毅斌，等.心導(dǎo)管留置術(shù)對(duì)大鼠臟器功能影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，（14）：1473-1475.

［3］Beno DW，KimuraRE.Nonstressed rat model ofacute endotoxemia that unmasks theendotoxin-inducedTNF-alpha response［J］.Am J Physiol，1999，276（2 Pt2）：H671-H678.

［4］徐叔云.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.1991：546.