李雪輝，陳杭薇

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人偏肺病毒研究進(jìn)展

李雪輝，陳杭薇

100700 北京軍區(qū)總醫(yī)院呼吸內(nèi)科

人偏肺病毒（human metapneumovirus，hMPV）是新近發(fā)現(xiàn)的一種呼吸道致病病毒，2001 年首次在荷蘭一嬰兒的鼻咽部抽吸物中被分離得到，根據(jù)它的形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)以及基因?qū)W特點(diǎn)，hMPV 一開始被分類為禽偏肺病毒，禽偏肺病毒可以引起火雞和其他鳥類的上呼吸道感染，現(xiàn)在普遍認(rèn)為 hMPV 屬于肺病毒亞科的副黏病毒。副黏病毒除了 hMPV，還包括禽流感病毒以及人合胞病毒。

1 病原學(xué)

hMPV 是一個有包膜的大約 13 kb 單股負(fù)鏈 RNA 病毒，序列與禽偏肺病毒相似，hMPV 基因3’~ 5’ 的序列為 N-P-MF-M2-SH-G-L。M 基因 mRNA 編碼兩個重疊的開放性閱讀框 M2-1 和 M2-2，與人合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）一樣[1]。hMPV 編碼蛋白如下：N，核衣殼 RNA 結(jié)合蛋白；P，核衣殼磷蛋白；M，非糖基化基質(zhì)蛋白；F，融合糖蛋白；M2-1，轉(zhuǎn)運(yùn)延長子；M2-2，RNA 合成調(diào)節(jié)因子；SH，小的疏水表面蛋白；G，主要黏附蛋白；L，主要聚合亞單位。其中融合蛋白 F 具有抗原決定簇，是疫苗研制的著眼點(diǎn)，hMPV 感染進(jìn)入細(xì)胞也是通過 F 蛋白調(diào)節(jié)的膜融合方式。偏肺病毒有編碼核衣殼蛋白 N、L 的基因，但缺乏非結(jié)構(gòu)蛋白 1 和 2 （nonstructural protein，NS），這與呼吸道合胞病毒相似。hMPV 不凝集紅細(xì)胞，與呼吸道合胞病毒和麻疹病毒等的基因同源性很低，而與禽肺病毒 C 型有較高的同源性。

hMPV 顆粒呈多形性，球狀形或絲狀形，其中球狀形顆粒尺寸不均一，平均直徑 209 nm，絲狀形 282 nm × 62 nm，包膜突起 13 ~ 17 nm，核殼體平均直徑 17 nm，核殼體長度小于 200 ~ 1 000 nm。

通過對一些不同的臨床分離標(biāo)本 F 和 G 基因序列進(jìn)行比較，把 hMPV 分為 A 和 B 兩個亞組。A 和 B 亞組的 F 蛋白基因高度保守，其氨基酸同源性大于 95%，而 hMPV 的 G 蛋白基因則變化很大，氨基酸同源性很低，只有 35%[2]。hMPV 的 A、B 兩個基因型又分別分為 A1、A2 和 B1、B2 兩個亞型。hMPV 兩種基因型無交叉免疫保護(hù)。

2 流行病學(xué)特征

hMPV 的傳播途徑可能與 RSV 相似，通過呼吸道飛沫、或者手—口、手—眼接觸污染的物體表面?zhèn)鞑?。hMPV 的季節(jié)流行性與 RSV相似，為從冬季到春季。雖然目前對于 hMPV 所致疾病還不是完全清楚，但是研究顯示它的感染一般緊隨在早或中冬時節(jié)的 RSV 和流行性感冒病毒的感染后，在晚冬和初夏副流感病毒的感染之前。血清抗體陽性率顯示 hMPV 在全世界流行，可以感染兒童、老人、免疫缺陷者，尤其以兒童為主要感染對象，調(diào)查顯示 70% 的兒童已經(jīng)有 hMPV 抗體[3]。

全世界各國的感染率變化范圍很大，在 1.5% ~ 41% 之間，hMPV 初次感染一般發(fā)生在小于 2 歲的兒童，尤其是小于 12 個月的幼兒為主。對于大齡兒童和成人來說，感染人群主要是免疫抑制劑使用者和器官移植者，或者有慢性肺部疾病的患者。hMPV 感染被認(rèn)為是器官移植者的主要致病因子。

德國 Wilkesmann 等[4]的研究表明，637 例患者中，hPMV 陽性占17. 9%，其中 50% 以上患兒年齡大于 12 個月，45.5% 患兒至少有 1 個危險(xiǎn)因素致呼吸道感染，27.3% 為早產(chǎn)兒，15.9% 出生體重小于 1 500 g。

Walsh 等[5]對門診病人的檢測發(fā)現(xiàn)，hMPV 的感染率每年從 2.2% ~ 10.5% 不等，無癥狀感染約占感染者的 38.8%，住院病人的感染率為每年 4.4% ~ 13.2% 不等，并且 hMPV 感染引起的喘息率要比流感病毒或者合胞病毒感染后表現(xiàn)高。hMPV 的感染癥狀與合胞病毒感染癥狀極相似，并且在兒科門診中，hMPV 的感染率僅次于合胞病毒[6]。

Gerna 等[7]檢測了 2004 ~ 2006 年冬春季呼吸道感染患者的鼻咽抽吸物，4.2% 的患者檢測有 hMPV 感染，其中成人感染率為 5.76%，兒童的感染率為 1.34%。Pabbaraju的研究小組[8]檢測了 2005 ~ 2006 年呼吸道感染患者的鼻咽部樣本，其中 hMPV 的感染率是 9.50%，但是在上呼吸道感染者中約占 11.77%，下呼吸道感染中只占 3.64%。說明 hMPV 感染既可以引起上呼吸道感染，也可以引起下呼吸道感染，但是主要是引起上呼道感染，一部分感染者中存在混合感染現(xiàn)象，且這些患者的年齡一般小于 2 周歲。

波士頓 Falsey 等[9]做的一項(xiàng) ICU 病房研究發(fā)現(xiàn)長期應(yīng)用呼吸支持的 157 名患者的 208 份血清中，hMPV 抗體的檢出率是 12.8%，是最常見的兩種感染病毒之一。

隨著對 hMPV 認(rèn)識的加深，使得人們逐漸關(guān)注 hMPV 在各地區(qū)各人群的感染情況，根據(jù)現(xiàn)在已發(fā)表的數(shù)據(jù)顯示，各地區(qū)，或各時間段 hMPV 的感染率差異很大。對 hMPV 感染的危險(xiǎn)因素，各時間段或地區(qū)感染率差異這么大的原因，仍須在全球較大范圍內(nèi)作前瞻性研究。

3 hMPV 的臨床表現(xiàn)

hMPV 感染可以引起上呼吸道或者下呼吸道感染，呈現(xiàn)比較典型的副黏病毒感染癥狀，主要表現(xiàn)為咳嗽、咳痰、喘息、氣促、流涕以及發(fā)熱、肌痛、頭痛、乏力等全身癥狀，部分可出現(xiàn)低氧血癥，類似 RSV 感染，但是感染癥狀不特異，單獨(dú)從癥狀無法與其他呼吸道病毒感染相區(qū)別[10]。與合胞病毒相比，hMPV 感染后，聲音嘶啞發(fā)生的比例高一些[11]。hMPV 感染在成人中引起流感樣疾病，在老人中更多表現(xiàn)為呼吸困難和喘息，有心肺基礎(chǔ)性疾病的老年患者發(fā)病率更要高出 1 倍[11]，而且身體比較虛弱的患者可以導(dǎo)致嚴(yán)重的疾病，如肺炎、呼吸衰竭等。

人的免疫狀態(tài)對于 hMPV 的感染也是很重要的，應(yīng)用免疫抑制的患者，hMPV 可以引起嚴(yán)重的、甚至致死的上呼吸道感染。有報(bào)道稱，急性淋巴瘤白血病患者若由 hMPV 引起上呼吸道感染，嚴(yán)重的甚至可以使患者死亡[12]。Evashuk 等[13]報(bào)道了 1 例 9 個月齡的女孩在肝移植后 8 d，因?yàn)槠尾《靖腥荆l(fā)生呼吸衰竭。

西班牙的García-García等[14]提出 hMPV 是引起哮喘的一個誘因。Williams 等[15]在一項(xiàng)成人哮喘發(fā)作的研究中發(fā)現(xiàn)，有 7 例患者（7/101）在入院時 hMPV 檢測為陽性，而在出院 3 個月后及隨訪中均未呈陽性，故認(rèn)為 hMPV 是直接誘發(fā)哮喘的生物性因素之一。

在日本和德國各有 1 例 hMPV 感染合并腦炎的報(bào)道[16-17]，提示 hMPV 可能與腦炎相關(guān)，但 hMPV 會不會像其他病毒一樣引起中樞感染，這需要在腦脊液標(biāo)本中進(jìn)一步檢查。

hMPV 感染胸片檢查發(fā)現(xiàn)異常占 39% ~ 84%，一般為兩肺的滲出、浸潤和過度充氣表現(xiàn)[18-19]。

綜上所述，hMPV 主要引起呼吸道感染，但是在一些情況下也可以引起其他系統(tǒng)感染，所以在一些易感人群如老人、兒童、免疫力低下者中要充分考慮 hMPV 感染的可能性。

4 hMPV 感染的免疫反應(yīng)和致病機(jī)制

近來一些研究顯示，雖然 hMPV 與合胞病毒感染后臨床表現(xiàn)有很高的相似性，但是其致病機(jī)制是不同的，hMPV 誘導(dǎo)炎癥因子釋放的作用很弱。

hMPV 與其他的副黏病毒不同，其進(jìn)入細(xì)胞、感染細(xì)胞主要是通過胞吞作用，抑制細(xì)胞的胞吞作用以后，hMPV 的感染率下降 90%，并且 hMPV 的感染依賴于低 pH 環(huán)境，在應(yīng)用藥物升高細(xì)胞內(nèi)小泡的 pH 值后，病毒感染率可以下降30% ~ 50%，F(xiàn) 基因融合蛋白對于病毒感染細(xì)胞有重要的介導(dǎo)調(diào)節(jié)作用，F(xiàn) 蛋白是在低 pH 的狀態(tài)下促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞的融合，且外功能區(qū)的組氨酸殘基對于 F 蛋白的功能有很大影響，將組氨酸殘基突變后，降低了其促進(jìn)細(xì)胞融合的作用[20]。另有研究顯示 MPRSS2 （一種跨膜絲氨酸蛋白酶）在人肺的上皮細(xì)胞中有表達(dá)，可以有效的促進(jìn)感染細(xì)胞對 F 蛋白分解，為偏肺病毒的感染、復(fù)制提供了有力條件[21]。

現(xiàn)在對于是否有 hMPV 在人體中定植還不清楚，但有試驗(yàn)顯示BALB/c 小鼠感染 60 d 后在肺中還持續(xù)有人 hMPV，雖然已經(jīng)產(chǎn)生中和抗體，但 hMPV 基因仍然可以在感染 180 d 以后應(yīng)用 RT-PCR 的方法檢測到，即雖然伴隨著逐漸減弱的免疫反應(yīng)，但是病毒感染持續(xù)存在[22]。對于模型小鼠的研究其內(nèi)源性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)顯示初次感染 hMPV 可以激發(fā)較弱的內(nèi)源性和不正常的適應(yīng)性免疫反應(yīng)。這些反應(yīng)的特點(diǎn)是：Th2 細(xì)胞因子在炎癥反應(yīng)的后期誘導(dǎo)生成同時伴有 IL-10 的表達(dá)增加和肺部的持續(xù)病毒復(fù)制。對于 hMPV 感染患者細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）和抗體的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)有延遲反應(yīng)，但是被動的給予 hMPV 抗體可能有保護(hù)作用。與 RSV 感染 BALB/C 小鼠相比，hMPV 感染的特點(diǎn)是：病毒感染需時長、機(jī)體的免疫反應(yīng)復(fù)雜[23]。有研究表明[22]用中和抗體衰減感染 hMPV 的 BALB/C 小鼠 T 細(xì)胞或 DX5+ 細(xì)胞后，可以使其病毒顆粒在肺的滴度增高，這些結(jié)果提示細(xì)胞毒型細(xì)胞可以控制病毒的復(fù)制并且可能與人 hMPV 的持續(xù)感染有關(guān)。

偏肺病毒感染時 G 蛋白可以調(diào)節(jié)宿主的先天免疫反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)[24]，G 蛋白在調(diào)解感染宿主細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生中有重要作用，其可以通過影響NF-kB 和干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factor，IRF）活性，進(jìn)而調(diào)節(jié) IFN 的產(chǎn)生。把 hMPV 的 N 基因應(yīng)用 RNA 干擾技術(shù)抑制后，可以明顯地抑制 hMPV 的增殖，與抑制 F 基因相比，對 N 基因進(jìn)行干擾后，病毒的 G 和 F 基因表達(dá)量也下降明顯，提示 N 基因?qū)τ诓《镜膹?fù)制比較重要[25]。

雖然現(xiàn)在對于 hMPV 感染后的免疫反應(yīng)有了一定的認(rèn)識，但是對病毒在呼吸道上皮細(xì)胞是如何引起的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)還不是很清楚，Liao 等[26]研究顯示人偏肺病毒感染時，可能通過激活氣管上皮細(xì)胞的維甲酸誘導(dǎo)基因-1—線粒體抗病毒信號（retinoic acid inducible gene-I- mitochondrial antiviral signaling protein，RIG-I-MAVS）蛋白通路，引起先天性免疫反應(yīng)中的抗病毒和促炎反應(yīng)因子。

雖然我們已經(jīng)對 hMPV 的致病機(jī)制以及所引起的免疫反應(yīng)開展了一些研究，但是還有待進(jìn)一步的闡明，另外對于病毒感染過程中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，即感染的機(jī)制了解得極少，所以在今后應(yīng)該加強(qiáng)這方面研究，只有這樣，才能對易感病人的預(yù)防提供有利的理論依據(jù)。

5 hMPV 的檢測

通過對兒童和成人的血清抗體陽性研究顯示 hMPV 不是一個新出現(xiàn)的病毒，而是一個新被認(rèn)識的可以引起兒童、老人以及免疫抑制患者的上、下呼吸道嚴(yán)重疾病的致病因子。hMPV 的病毒分離比較困難，這也是這種病毒直到 2001 年才被發(fā)現(xiàn)的原因。

因 hMPV 生長緩慢且有選擇性，輕微致細(xì)胞病變作用以及缺乏特異性的診斷試劑，使得病毒的細(xì)胞培養(yǎng)很困難。hMPV 可以從急性呼吸道感染患者的鼻咽抽吸物、鼻和咽拭子、氣管內(nèi)吸取物、支氣管肺泡灌洗液和其他非特異性呼吸道標(biāo)本中分離出來。樣品取得后放于冰上運(yùn)輸，然后馬上接種于單層細(xì)胞，37 ℃孵育培養(yǎng)，樣品不能凍存或者保存[27]。首次報(bào)道 hMPV 的Hoogen等[2]闡明，該病毒可導(dǎo)致猴腎細(xì)胞形成合胞，隨后發(fā)生快速細(xì)胞裂解，繼之單層細(xì)胞脫落。Reina 等[28]把從兒科得到的標(biāo)本同時接種到各細(xì)胞系中，發(fā)現(xiàn) hMPV 可以在 LLC-MK2 細(xì)胞系 100% 生長，在 Hep-2 細(xì)胞系可以達(dá)到 68.7% 生長，在 Vero 中生長率是 28.1%，在 MDCK 的生長率是 3.1%，在 MRC-5 細(xì)胞中不生長，一些病毒株在接種后第 3 天可以分離病毒，但是大多數(shù)都需要在第 5 天才可以分離。所以通過綜合比較 LLC-MK2 細(xì)胞是從臨床樣品中分離 hMPV 的合適細(xì)胞株，并且接種后的培養(yǎng)時間一般需要 5 d。

Peret 等[29]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用 RT-PCR 可以提高培養(yǎng)物中分離物的 hMPV 的檢出率。Kaida 等[30]比較了不同類型 PCR 在檢測臨床樣本中 hMPV 的效率，發(fā)現(xiàn)在常規(guī) RT-PCR，real-time PCR 以及巢式 PCR 中，它們對于樣本的檢出率分別是：巢式 PCR 大于 real-time PCR 大于常規(guī) RT-PCR。系統(tǒng)分析后顯示 real-time PCR 可以檢測出全部四種亞型的人偏肺病毒，所以，real-time PCR 在檢測臨床標(biāo)本中的 hMPV 中是一個好的方法。

Kukavica-Ibrulj 和Boivin[31]應(yīng)用酶聯(lián)免疫的方法檢測凍存鼻咽抽吸物中 hMPV，顯示這種方法與 RT-PCR 和病毒培養(yǎng)相比，敏感性是 81%，特異性是 100%，陽性預(yù)測值是 100%，陰性預(yù)測值是 77%，所以酶聯(lián)免疫的方法對于檢測 hMPV 有很高的特異性，并且比病毒培養(yǎng)方便、快捷。

Landry 等[32]比較了應(yīng)用 PCR 與商用單克隆抗細(xì)胞涂片免疫熒光兩種方法對hMPV 的檢測，在 202 例病人標(biāo)本中，應(yīng)用 RT-PCR 檢測到 48 例陽性的標(biāo)本，應(yīng)用直接熒光的方法檢測到 41 個陽性標(biāo)本，占 RT-PCR 陽性標(biāo)本的 85.4%，Aslanzadeh 等[33]和Jun 等[34]的研究結(jié)果同樣顯示，直接熒光的方法在臨床標(biāo)本檢測中有很好的特異性。

綜上所述，hMPV 可以通過 LLC-MK2 細(xì)胞培養(yǎng)獲得，但比較困難；應(yīng)用單克隆抗體直接免疫熒光可以用來檢測臨床患者的標(biāo)本，但是與 PCR 相比，其特異性還有待進(jìn)一步改善。

6 預(yù)防與治療

hMPV 疫苗也正在研制中，Yim 等[35]應(yīng)用甲醛滅活疫苗免疫棉鼠后，顯示疫苗免疫的動物雖然可以保護(hù)肺抑制 hMPV 的復(fù)制，但是卻加重了病理上的損害，特別是間質(zhì)性肺炎和肺泡性炎抗體滴度提高。Skiadopoulos 等[36]評價了 F、G 和 SH 三種表面糖蛋白的免疫源性，結(jié)果提示 F 蛋白具有很高的免疫原性和很高的保護(hù)作用，而 G 和 SH 蛋白的免疫原性、保護(hù)作用則比較小，所以 F 蛋白是很好的hMPV 疫苗選擇蛋白，并且另有不同的實(shí)驗(yàn)者[37-38]研究顯示應(yīng)用 F 蛋白免疫動物產(chǎn)生抗體以后，可以使動物對同源或異源性的 hMPV 產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)作用。有研究者應(yīng)用基因重組技術(shù)使 hMPV 缺少 M2-2或 G 基因后，病毒力降低，并且在非洲綠猴身上可以產(chǎn)生相應(yīng)免疫反應(yīng)，提示有可能作為疫苗的篩選方案[39]。Herfst 等[40]應(yīng)用冷溫度傳代的合胞或人偏肺病毒感染地鼠以后，檢測發(fā)現(xiàn)冷溫度傳代后的人偏肺病毒，再感染動物可以檢測到高滴度的抗體，上調(diào)免疫，并且可以完全保護(hù)其免受變異的人偏肺病毒感染，上呼吸道病毒的滴度下降了 10 000 倍。

隨著對 hMPV 認(rèn)識的加深，hMPV 疫苗研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展，但是離疫苗的臨床應(yīng)用還有很大距離。

除了流感病毒以外，其他呼吸道病毒現(xiàn)在都沒有太多的治療或預(yù)防方法。對 hMPV 感染的藥物治療進(jìn)行研究，顯示利巴韋林在治療 hMPV 感染中的作用與治療 RSV 感染的作用相似[41]，在體外試驗(yàn)中，硫酸唾液酸酯（NMSO3）有抗 hMPV 作用[42]。總之，現(xiàn)在仍然缺乏針對 hMPV 感染的特效治療手段。

7 結(jié)語

2001 年 hMPV 被鑒定分離后，引起全世界臨床和科研工作者的關(guān)注，雖然近幾年對于 hMPV 的流行病學(xué)特點(diǎn)有了更詳細(xì)的認(rèn)識，但是對其致病機(jī)制、疫苗研制和藥物預(yù)防、治療方面了解還比較少，有待進(jìn)一步研究。

[1] Biacchesi S, Skiadopoulos MH, Boivin G, et al. Genetic diversity between human metapneumovirus subgroups. Virology, 2003, 315(1): 1-9.

[2] van den Hoogen BG, de Jong JC, Groen J, et al. A newly discovered human pneumovirus isolated from young children with respiratory tract disease. Nat Med, 2001, 7(6):719-724.

[3] Mullins JA, Erdman DD, Weinberg GA, et al. Human metapneumovirus infection among children hospitalized with acute respiratory illness. Emerg Infect Dis, 2004, 10(4):700-705.

[4] Wilkesmann A, Schildgen O, Eis-Hübinger AM, et al. Human metapneumovirus infections cause similar symptoms and clinical severity as respiratory syncytial virus infections. Eur J Pediatr, 2006, 165(7):467-475.

[5] Walsh EE, Peterson DR, Falsey AR. Human metapneumovirus infections in adults: another piece of the puzzle. Arch Inter Med, 2008, 168(22):2487-2496.

[6] Williams JV, Harris PA, Tollefson SJ, et al. Human metapneumovirus and lower respiratory tract disease in otherwise healthy infants and children. N Engl J Med, 2004:350(5):443-450.

[7] Gerna G, Sarasini A, Percivalle E, et al. Prospective study of human metapneumovirus infection: diagnosis, typing and virus quantification in nasopharyngeal secretions from pediatric patients. J Clin Virol, 2007, 40(3):236-240.

[8] Pabbaraju K, Wong S, McMillan T, et al. Diagnosis and epidemiological studies of human metapneumovirus using real-time PCR. J Clin Virol, 2007, 40(3):186-192.

[9] Falsey AR, Dallal GE, Formica MA, et al. Long-term care facilities: a cornucopia of viral pathogens. J Am Geriatr Soc, 2008, 56(7):1281- 1285.

[10] Stockton J, Stephenson I, Fleming D, et al. Human metapneumovirus as a cause of community-acquired respiratory illness. Emerg Infect Dis, 2002, 8(9):897-901.

[11] Falsey AR, Erdman D, Anderson LJ, et al. Human metapeumovirus infections in young and elderly adults. J Infect Dis, 2003, 187(5):785- 790.

[12] Uhlenhaut C, Cohen JI, Fedorko D, et al. Use of a universal virus detection assay to identify human metapneumovirus in a hematopoietic stem cell transplant recipient with pneumonia of unknown origin. J Clin Virol, 2009, 44(4):337-339.

[13] Evashuk KM, Forgie SE, Gilmour S, et al. Respiratory failure associated with human metapneumovirus infection in an infant posthepatic transplant. Am J Transplant, 2008, 8(7):1567-1569.

[14] García-García ML, Calvo C, Pérez-Bre?a P, et al. Prevalence and clinical characteristics of human metapneumovirus infections in hospitalized infants in Spain. Pediatr Pulmonol, 2006, 41(9):863-871.

[15] Williams JV, Crowe JE Jr, Enriquez R, et al. Human metapneumovirus infection plays an etiologic role in acute asthma exacerbations requiring hospitalization in adults. J Infect Dis, 2005, 192(7):1149- 1153.

[16] Kaida A, Iritani N, Kubo H, et al. Seasonal distribution and phylogenetic analysis of human metapneumovirus among children in Osaka City, Japan. J Clin Virol, 2006, 35(4):394-399.

[17] Schildgen O, Glatzel T, Geikowski T, et al. Human metapneumovirus RNA in encephalitis patient. Emerg Infect Dis, 2005, 11(3):467-470.

[18] Dollner H, Risnes K, Radkte A, et al. Outbreak of human metapneumovirus infection in norwegian children. Pediatr Infect Dis J, 2004, 23(5):436-440.

[19] Chen HZ, Qian Y, Wang TY, et al. Clinical characteristics of bronchiolitis caused by human metapneumovirus in infants. Chin J Pediatr, 2004, 42(5):383-386. (in Chinese)

陳慧中, 錢淵, 王天有, 等. 偏肺病毒毛細(xì)支氣管炎的臨床研究. 中華兒科雜志, 2004, 42(5):383-386.

[20] Schowalter RM, Chang A, Robach JG, et al. Low-pH triggering of human metapneumovirus fusion: essential residues and importance in entry. J Virol, 2009, 83(3):1511-1522.

[21] Shirogane Y, Takeda M, Iwasaki M, et al. Efficient multiplication of human metapneumovirus in Vero cells expressing the transmembrane serine protease TMPRSS2. J Virol, 2008, 82(17):8942-8946.

[22] Alvarez R, Harrod KS, Shieh WJ, et al. Human metapneumovirus persists in BALB/c mice despite the presence of neutralizing antibodies. J Virol, 2004, 78(24):14003-14011.

[23] Alvarez R, Tripp RA. The immune response to human metapneumovirus is associated with aberrant immunity and impaired virus clearance in BALB/c mice. J Virol, 2005, 79(10):5971-5978.

[24] Bao X, Liu T, Shan Y, et al. Human metapneumovirus glycoprotein G inhibits innate immune responses. PLoS Pathog, 2008, 4(5):e1000077.

[25] Ferreira HL, Spilki FR, de Almeida RS, et al. Inhibition of avian metapneumovirus (AMPV) replication by RNA interference targeting nucleoprotein gene (N) in cultured cells. Antiviral Res, 2007, 74(1):77-81.

[26] Liao S, Bao X, Liu T, et al. Role of retinoic acid inducible gene-I in human metapneumovirus-induced cellular signalling. J Gen Virol, 2008, 89(8):1978-1986.

[27] Alto WA. Human metapneumovirus: a newly described respiratory tract pathogen. J Am Board Fam Pract, 2004, 17(6):466-469.

[28] Reina J, Ferres F, Alcoceba E, et al. Comparison of different cell lines and incubation times in the isolation by the shell vial culture of human metapneumovirus from pediatric respiratory samples. J Clin Virol, 2007, 40(1):46-49.

[29] Peret TC, Boivin G, Li Y, et al. Characterization of human metapneumoviruses isolated from patients in North America. J Infect Dis, 2002, 185(11):1660-1663.

[30] Kaida A, Kubo H, Shiomi M, et al. Evaluation of real-time RT-PCR compared with conventional RT-PCR for detecting human metapneumovirus RNA from clinical specimens. Jpn J Infect Dis, 2008, 61(6):461-464.

[31] Kukavica-Ibrulj I, Boivin G. Detection of human metapneumovirus antigens in nasopharyngeal aspirates using an enzyme immunoassay. J Clin Virol, 2009, 44(1):88-90.

[32] Landry ML, Cohen S, Ferguson D. Prospective study of human metapneumovirus detection in clinical samples by use of light diagnostics direct immunofluorescence reagent and real-Time PCR. J Clin Microbiol, 2008:1098-1100.

[33] Aslanzadeh J, Zheng X, Li H, et al. Prospective evaluation of rapid antigen tests for diagnosis of respiratory syncytial virus and human metapneumovirus infections. J Clin Microbiol, 2008, 46(5):1682- 1685.

[34] Jun KR, Woo YD, Sung H, et al. Detection of human metapneumovirus by direct antigen test and shell vial cultures using immunofluorescent antibody staining. J Virol Methods, 2008, 152(1/2):109-111.

[35] Yim KC, Cragin RP, Boukhvalova MS, et al. Human metapneumovirus: enhanced pulmonary disease in cotton rats immunized with formalin-inactivated virus vaccine and challenged. Vaccine, 2007, 25(27): 5034-5040.

[36] Skiadopoulos MH, Biacchesi S, Buchholz UJ, et al. Individual contributions of the human metapneumovirus F, G, and SH surface glycoproteins to the induction of neutralizing antibodies and protective immunity. Virology, 2006 (345):492-501.

[37] Biacchesi S, Skiadopoulos MH, Yang L, et al. Rapid human metapneumovirus microneutralization assay based on green fluorescent protein expression. J Virol Methods, 2005, 128(1/2):192-197.

[38] Ma X, Endo R, Ebihara T, et al. Production and characterization of neutralizing monoclonal antibodies against human metapneumovirus F protein. Hybridoma (Larchmt), 2005, 24(4):201-205.

[39] Biacchesi S, Pham QN, Skiadopoulos MH, et al. Infection of nonhuman primates with recombinant human metapneumovirus lacking the SH, G, or M2-2 protein categorizes each as a nonessential accessory protein and identifies vaccine candidates. J Virol, 2005, 79(19):12608-12613.

[40] Herfst S, de Graaf M, Schrauwen EJ, et al. Generation of temperature-sensitive human metapneumovirus strains that provide protective immunity in hamsters. J Gen Virol, 2008, 89(Pt7):1553- 1562.

[41] Wyde PR, Chetty SN, Jewell AM, et al. Comparison of the inhibition of human metapneumovirus and respiratory syncytial virus by ribavirin and immune serum globulin in vitro. Antiviral Res, 2003, 60(1):51-59.

[42] Wyde PR, Moylett EH, Chetty SN, et al. Comparison of the inhibition of human metapneumovirus and respiratory syncytial virus by NMSO3 in tissue culture assays. Antiviral Res, 2004, 63(1):51-59.

全軍“十一五”科研攻關(guān)課題（06G026）

陳杭薇，Email：chw.99099@263.net

2009-09-21

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.02.009