謝曉燕， 張忠君， 于春英

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117;2.一汽總醫(yī)院，吉林 長春 130000;3.吉林大藥房;吉林 長春130000)

長期以來，醫(yī)院制劑存在著申報手續(xù)簡單、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)普遍偏低的問題，這樣就導(dǎo)致了制劑生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制以及成品出廠檢驗過程中，都缺少質(zhì)量控制的指標(biāo)。因此我們對我院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)重新進(jìn)行了修訂，作為內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來控制制劑成品的質(zhì)量。

七味柏苓片為我校附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要用于治療婦女濕熱內(nèi)蘊所致的帶下癥。本實驗在其原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加了黃柏和五味子的含量測定，即采用高效液相色譜法檢測鹽酸小檗堿和五味子乙素的含量，結(jié)果表明該方法先進(jìn)、具有可操作性，能夠控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津)，SPD-10 Avp紫外檢測器，UV-3000型紫外分光光度儀(日本島津)。

1.2 試藥:鹽酸小檗堿對照品及五味子乙素對照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號為0713-200107、765-9202);七味柏苓片由本院制劑室制備(批號為20070401、20070402、20070403);乙腈、甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸小檗堿的含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱選擇十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的 Kromasil柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);乙腈-0.04%三乙胺溶液(40∶60)為流動相;檢測波長270 nm;流速0.8 mL/min;柱溫:30℃。

2.1.2 對照品溶液的制備 稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，稱定重量，用甲醇-鹽酸(100∶1)混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，上中性氧化鋁柱(100～200目，內(nèi)徑1.5 cm，高5 cm)，用甲醇洗脫，收集洗脫液于25 mL量瓶中，收集至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 陰性樣品溶液的制備 按供試品溶液制備時的取樣量，折算成除黃柏外，處方中其余藥材的取樣量，按制備工藝制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液，即得。

2.1.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液 2、4、8、10、15 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=4 447 748.61X－57 993.56，r=0.999 9，結(jié)果表明對照品在0.073 6～0.552 0 g范圍內(nèi)，呈良好線性關(guān)系。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，每隔一定時間進(jìn)樣一次，依法測定，RSD為0.66%(n=5)。

2.1.7 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，分別進(jìn)樣5次，依法測定，記錄峰面積積分值，計算，考察精密度，RSD為0.46%(n=5)。

2.1.8 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品，共5份，依法獨立測定，RSD為1.75%。

2.1.9 回收率試驗 精密稱取同法測定的已知含量樣品，精密加入對照品溶液適量，依法測定，平均回收率為97.44%，RSD為1.96%(n=5)。結(jié)果見表1。

2.1.10 樣品測定 取3批樣品，按2.1.3項制備供試品溶液，每批3份，分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算3批樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2，圖1～3。

2.2 五味子乙素的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱選擇十八烷基硅烷鍵合硅膠為填

表1 鹽酸小檗堿回收率試驗結(jié)果

表2 3批樣品鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果(n=3)

圖1 鹽酸小檗堿對照品HPLC圖

圖2 供試品HPLC圖

圖3 陰性對照HPLC圖

充劑的 ZORBAX-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);甲醇 －0.1%磷酸溶液－四甲基氫氧化銨(82∶18∶0.1)為流動相;檢測波長:254 nm;流速:0.8 mL/min;柱溫:30℃。

2.2.2 對照品溶液的制備 稱取五味子乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解于100 mL量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿80 mL回流提取4 h，氯仿液蒸干，殘渣加甲醇溶解于5mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按供試品溶液制備時的取樣量，折算成除五味子外處方中其余藥材的取樣量，按制備工藝制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液，即得。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL 注入液相色譜儀，測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2 805 703X－13 505，r=0.999 9，結(jié)果表明對照品在0.336 25～2.017 5 g范圍內(nèi)，呈良好線性關(guān)系。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，每隔一定時間進(jìn)樣一次，依法測定，RSD為0.64%(n=5)。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取對照品溶液6 μL，分別進(jìn)樣5次，依法測定，記錄峰面積積分值，計算，考察精密度，RSD為0.45%(n=5)。

2.2.8 重復(fù)性試驗 精密稱取同一批樣品，共5份，依法獨立測定，RSD為1.01%。

2.2.9 回收率試驗 精密稱取同法測定的已知含量樣品，精密加入對照品溶液適量，依法測定，平均回收率為98.29%，RSD為2.66%(n=5)。結(jié)果見表3。

2.2.10 樣品測定 取3批樣品，按2.2.3項制備供試品溶液，每批3份，分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算3批樣品中五味子乙素的含量，結(jié)果見表4，圖4～6。

表3 五味子乙素回收率試驗結(jié)果

表4 3批樣品五味子乙素含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 鹽酸小檗堿含量測定曾參考文獻(xiàn)［1-4］及多次試驗后選擇用乙腈－0.04%三乙胺溶液(40∶60)為流動相。

圖4 五味子乙素對照品HPLC圖

圖5 供試品HPLC圖

圖6 陰性對照品HPLC圖

3.2 參照相關(guān)的文獻(xiàn)［1-4］及根據(jù)五味子乙素的理化性質(zhì)，采用氯仿直接回流提取?？疾焯崛r間，提取4 h后，再提取半小時，用TLC法檢查提取液是否含有五味子乙素，實驗結(jié)果提取4 h基本上可提取完全。

3.3 醫(yī)院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在普遍偏低的問題，多數(shù)是按藥典各劑型項下的要求檢驗，一部分增加了薄層鑒別項，少數(shù)具有含量測定項。我們在此實驗的基礎(chǔ)上會對其他制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，以期全面提高我院制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］中國藥典［S］.一部.2005.

［2］何燕萍，蔡 陽，朱珍燕.復(fù)方中成藥慢肝寶沖劑中五味子乙素的含量測定［J］.中國中藥雜志，1995，20(9):541-543.

［3］譚生建，曲雪蓮，楊成勇，等.肝復(fù)康丸中五味子甲素和五味子乙素含量測定方法研究［J］，解放軍藥學(xué)學(xué)報，2000，(16)5:270-272.

［4］將 平，文永盛，吳艷輝，等.五子衍宗丸中五味子乙素的含量測定［J］.中國藥師，2006，(9)9-10.