劉姝暢， 孫艷濤， 李 想， 張振秋

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連116600)

莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù)(Curcuma phaeocaulis Valeton)、廣西莪術(shù)(C.kwangsinensis S.G.Lee et C.F.Liang)和溫莪術(shù)(C.wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)的干燥根莖，具行氣破血、消積止痛的功效，始載于《唐本草》［1］。莪術(shù)油具有抗癌、抗菌、抗病毒、抗癲癇等活性。莪術(shù)油的抗腫瘤作用已被藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用所證實(shí)［2－4］，本文采用GC，對(duì)10批次莪術(shù)殘油樣品進(jìn)行分析，并建立以毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定莪術(shù)殘油中莪術(shù)醇、吉馬酮和莪術(shù)二酮含量的方法，為莪術(shù)殘油的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP－5氣相色譜儀(Agilent Technologies 6890N);FID檢測(cè)器;METTLER AB135－S十萬分之一電子天平(瑞士)

1.2 試藥 購得市售莪術(shù)殘油10批，樣品編號(hào)依次為批1－10。莪術(shù)醇對(duì)照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):100185－200506);吉馬酮對(duì)照品(購于天津奎青商貿(mào)有限公司);莪術(shù)二酮對(duì)照品(購于上海滬云醫(yī)藥開發(fā)有限公司，批號(hào):13657－68－6)。水楊酸甲酯對(duì)照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110707－200710)。甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 HP－5(0.32 mm×30 m)石英彈性毛細(xì)管柱，5%苯基甲聚硅氧烷為固定相;程序升溫:柱初始溫度為100℃，以4℃/min升至140℃，以13℃/min升至170℃，保持8 min，以5℃/min升至200℃;氫火焰檢測(cè)器(FID)280℃，進(jìn)樣口溫度250℃;載氣為高純度氮(純度 ＞99.999%);前柱壓 42 kPa，載氣流速 1 mL/min，進(jìn)樣量4 μL，不分流進(jìn)樣。

2.2 內(nèi)標(biāo)物溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯適量，加甲醇溶解并稀釋制成3.971 mg/mL的溶液，即得。

圖1 對(duì)照品(A)、樣品(B)的GC圖譜

2.3 對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取莪術(shù)醇、吉馬酮和莪術(shù)二酮適量，加甲醇溶解并稀釋成分別含5.489、5.725和2.715 mg/mL的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備 稱取莪術(shù)殘油約0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取莪術(shù)醇對(duì)照品貯備液10 mL，吉馬酮對(duì)照品貯備液2 mL，和莪術(shù)二酮對(duì)照品貯備液10 mL，置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液作為混合對(duì)照品母液。再分別精密吸取母液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取不同濃度的混合對(duì)照品溶液5 mL，置10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液稀釋至刻度，即得。分別進(jìn)樣5 μL，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積比值(對(duì)照品/水楊酸甲酯)為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系結(jié)果

2.6 精密度考察 取批10號(hào)樣品，按2.4項(xiàng)下方法制備，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次4 μL，不分流進(jìn)樣，計(jì)算各組分與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD。莪術(shù)醇、吉馬酮和莪術(shù)二酮的RSD分別為1.8%、1.7%、1.2%，精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 取批10號(hào)樣品，按2.4項(xiàng)下方法制備，分別于 0、2、4、8、10 h 各進(jìn)樣 4 μL，不分流進(jìn)樣，計(jì)算各組分與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD。莪術(shù)醇、吉馬酮和莪術(shù)二酮的RSD分別為2.2%、1.7%、1.6%，表明樣品在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性考察 取批10號(hào)樣品5份，按2.4項(xiàng)下方法制備，分別進(jìn)樣4 μL，不分流進(jìn)樣，計(jì)算各組分含量的RSD。RSD分別為2.2%、1.8%、1.4%，重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率 取已知含量的樣品5份莪術(shù)醇(47.33 mg/g)、吉馬酮(5.30 mg/g)和莪術(shù)二酮(15.73 mg/g)，每份約0.1 g，置25 mL量瓶中，各精密加入莪術(shù)醇對(duì)照品貯備液0.9 mL、吉馬酮對(duì)照品貯備液0.1 mL和莪術(shù)二酮對(duì)照品貯備液0.6 mL，按2.4項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果莪術(shù)醇、吉馬酮和莪術(shù)二酮的加樣回收率分別為99.0%、100.3%、99.2%;RSD分別為1.0%、1.4%、2.2%。

2.10 樣品測(cè)定 分別取不同批號(hào)莪術(shù)殘油，按2.4項(xiàng)下方法制備，按上述色譜條件測(cè)定各樣品莪術(shù)殘油中莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果(mg/g，n=3)

3 討論

3.1 莪術(shù)殘油為莪術(shù)油提取β－欖香烯后的殘余物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)β－欖香烯成分也進(jìn)行了考察，部分批號(hào)能檢測(cè)出但含量很低，部分批號(hào)未檢測(cè)出，故不作為測(cè)定指標(biāo)。

3.2 不同批號(hào)的莪術(shù)殘油中3種成分的含量差異不顯著，說明莪術(shù)殘油質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定。

3.3 莪術(shù)二酮遇熱不穩(wěn)定，加熱后互變異構(gòu)為一烯醇式中間體，同時(shí)發(fā)生兩個(gè)σ－鍵的遷移和一個(gè)氫原子的1，3－遷移而形成了莪術(shù)醇，相同條件下，莪術(shù)醇不能轉(zhuǎn)化為莪術(shù)二酮。測(cè)定莪術(shù)殘油中莪術(shù)二酮含量低于莪術(shù)油中含量，而莪術(shù)醇含量則高于莪術(shù)油中含量，分析此結(jié)果可能由于莪術(shù)油經(jīng)高溫加熱提取β－欖香烯過程中部分莪術(shù)二酮轉(zhuǎn)化成莪術(shù)醇。

3.4 在GC測(cè)定過程中，對(duì)汽化室和柱溫箱的溫度進(jìn)行了考察，溫度過高不僅影響柱子的使用壽命，還影響莪術(shù)油中指標(biāo)性成分的檢測(cè)。經(jīng)摸索汽化室溫度確定為250℃，柱溫箱溫度確定為200℃，莪術(shù)殘油中指標(biāo)性成分能達(dá)到很好的分離并均能被檢測(cè)出。

［1］中國藥典2005年版［S］一部.2005:194.

［2］丁玉玲，徐愛秀.莪術(shù)油及其有效組分抗腫瘤研究［J］.中藥材，2005，28(2):152－155.

［3］黃亞東，項(xiàng) 琪.莪術(shù)油噴霧劑的研制及抗病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中藥材，2007，30(3):342－345.

［4］楊 威，張樹和.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定莪術(shù)油中吉馬酮和β－欖香烯的含量［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，23(12):785－787.

［5］朱亞爾，朱曉平.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定莪術(shù)中莪術(shù)醇的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31(5):389－390.