陳敬民， 李開(kāi)雙， 李翠紅， 周 軍

(廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022)

復(fù)方黃松凝膠由崗松油、大葉桉油、滿山香油、蛇床子油、千里光、地膚子及黃柏組成，是廣西源安堂藥業(yè)有限公司復(fù)方黃松洗液(批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026294)的新劑型;具有清熱利濕、祛風(fēng)止癢作用，用于濕熱下注證，癥見(jiàn)陰部瘙癢，或灼熱痛，帶下量多，色黃如膿或赤白相間，或呈黃色泡沫狀;霉菌性、滴蟲(chóng)性、非特異性陰道炎及外陰炎見(jiàn)以上征候者。為了開(kāi)發(fā)新藥進(jìn)行新劑型主要藥效學(xué)研究［1］，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料

1.1 藥物

復(fù)方黃松凝膠，每百克凝膠含總揮發(fā)油2.85 g和生藥18 g，廣西源安堂藥業(yè)有限公司提供，批號(hào):051204;復(fù)方黃松洗液，每100 mL洗液含總揮發(fā)油0.95 g和生藥6 g，廣西源安堂藥業(yè)有限公司，批號(hào):0504304。

1.2 動(dòng)物

家兔，新西蘭種，體重2～2.5 kg，♀性，普通級(jí)，由廣西草業(yè)公司提供;NIH小鼠，18～22 g，普通級(jí)，由廣西中醫(yī)藥研究院動(dòng)物室提供;WISTAR大鼠，250～300 g，清潔級(jí)，由廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK桂2003－0003。

1.3 菌株

每菌各10株，均為臨床分離;金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、化膿性鏈球菌、白色念珠菌，由廣西區(qū)人民醫(yī)院、廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院提供;淋病雙球菌由廣西皮膚病防治研究所提供;陰道毛滴蟲(chóng)由廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、廣西皮膚病防治研究所提供。

1.4 試劑與儀器

2%巴豆油，自配;丙酮，廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào):040610;角叉菜膠，SIGMA公司;培養(yǎng)基，按衛(wèi)生部《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》制備;桂敏淋菌培養(yǎng)基，廣西皮膚病防治研究所，批號(hào):050908;滅菌干棉球，自制，10 mg/只;steri－Cyoier381 培養(yǎng)箱，美國(guó)Forma公司;光學(xué)顯微鏡，梧州光學(xué)儀器廠;FA1004型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

抗菌、抗滴蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)資料統(tǒng)計(jì)以MIC50表示，抗炎實(shí)驗(yàn)資料統(tǒng)計(jì)采用t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 體外抗菌作用

取復(fù)方黃松凝膠配成1:2、1:4、1:8、……、1:1024不同濃度，按文獻(xiàn)［2］進(jìn)行增菌，對(duì)倍稀釋于各種濃度培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，以細(xì)菌不生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度(MIC)，根據(jù)各菌10個(gè)菌株的MIC利用回歸方程求出MIC50、MIC90。結(jié)果見(jiàn)表1，復(fù)方黃松凝膠對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、鏈球菌、淋病雙球菌均有不同程度的抗菌作用。

表1 復(fù)方黃松凝膠的體外抗菌作用(n=10)

2.2 體外抗陰道毛滴蟲(chóng)作用

取復(fù)方黃松凝膠配成1:2、1:4、1:8、……、1:1024不同濃度;另在室溫(25℃)下將陰道患毛滴蟲(chóng)病患者的陰道分泌物用生理鹽水洗下制成滴蟲(chóng)密度為每個(gè)低倍顯微鏡視野下有1 000個(gè)以上運(yùn)動(dòng)活潑的滴蟲(chóng)液;每級(jí)試驗(yàn)取不同濃度藥液0.5 mL加滴蟲(chóng)液0.5 mL，同時(shí)用蒸餾水作陰性對(duì)照，鏡下觀察并記錄藥物接觸5、10及20 min滴蟲(chóng)是否失去活動(dòng)力，利用回歸方程求出MIC50、MIC90。結(jié)果見(jiàn)表2，陰道毛滴蟲(chóng)與復(fù)方黃松凝膠隨濃度增大、作用時(shí)間延長(zhǎng)，殺滴蟲(chóng)作用增強(qiáng)，20 min的MIC50是0.079 mg生藥/mL。

表2 復(fù)方黃松凝膠對(duì)陰道毛滴蟲(chóng)的殺滅作用(n=10)

2.3 對(duì)白色念珠菌誘發(fā)家兔陰道炎的影響

家兔36只隨機(jī)分為6組，除空白對(duì)照組外，將其余5組家兔用消毒9號(hào)注射針頭在距陰道口1 cm陰道黏膜處作環(huán)型創(chuàng)傷，并在破損陰道黏膜處注入3×107/L白色念珠菌液(菌株號(hào)2199)0.2 mL。感染24 h開(kāi)始陰道給藥，每天1次，連續(xù)7 d。治療結(jié)束后第2天處死動(dòng)物作陰道涂片檢查，并取陰道組織作組織病理學(xué)觀察。結(jié)果見(jiàn)表3，給藥組陰道涂片觀察大多數(shù)動(dòng)物未見(jiàn)白色念珠菌，陽(yáng)性率顯著減少，病理檢查結(jié)果顯示大多數(shù)家兔PAS染色未見(jiàn)白色念珠菌菌體或芽孢，HE染色可見(jiàn)家兔陰道黏膜上皮修復(fù)完整，間質(zhì)炎癥反應(yīng)減退或未見(jiàn)炎癥反應(yīng)。用陰道涂片的陽(yáng)性率和炎癥治愈率進(jìn)行χ2組間比較，結(jié)果復(fù)方黃松凝膠0.94 g凝膠/kg組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。

表3 復(fù)方黃松凝膠對(duì)白色念珠菌誘發(fā)家兔陰道炎的影響(n=6)

2.4 對(duì)巴豆油致小鼠耳廓腫脹的影響

取小鼠50只，♂♀各半，隨機(jī)分為5組，各組分別用相應(yīng)藥物涂擦右耳殼兩側(cè)，于給藥后30 min，用2%巴豆油0.05 mL/只均勻涂于右耳殼兩側(cè)，4 h后處死小鼠，剪下兩只耳殼、重疊，用直徑為8 mm沖鑿取圓片，稱重，以左、右耳重量之差作為腫脹度，計(jì)算均數(shù)方差，求出各組的腫脹抑制率，與空白對(duì)照組比較，以組間t檢驗(yàn)檢驗(yàn)其差異顯著性。結(jié)果見(jiàn)表4，復(fù)方黃松凝膠1.3、2.6 g凝膠/kg能明顯抑制巴豆油所致的小鼠耳廓腫脹。

表4 復(fù)方黃松凝膠對(duì)巴豆油所致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10)

2.5 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響

取大鼠50只，♂性，隨機(jī)分成5組，實(shí)驗(yàn)前用軟尺測(cè)各鼠右后足跖正常周長(zhǎng)，隨即涂藥1次。涂藥后30 min，各組大鼠右后足足跖皮下注射1%角叉菜膠0.05 mL/只致炎，同時(shí)再涂藥1次，分別于注入角叉菜膠致炎后1、2、4、6 h測(cè)定各大鼠右后足肢體腫脹程度(腫脹度=致炎后足跖周長(zhǎng)－致炎前正常足跖周長(zhǎng))。計(jì)算各組均數(shù)方差，與空白對(duì)照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表5，復(fù)方黃松凝膠給藥后能抑制角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹，其中在4 h各劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。

2.6 對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響

取大鼠50只，♂♀各半，按文獻(xiàn)［3］方法進(jìn)行棉球植入手術(shù)、分組、皮膚給藥，給藥第8天處死動(dòng)物，取棉球肉芽、干燥、稱重，將稱得的重量減去棉球原重量即為肉芽腫凈重量。計(jì)算各組均數(shù)方差，與空白對(duì)照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表6，復(fù)方黃松凝膠連續(xù)給藥7 d，能顯著抑制大鼠棉球肉芽腫的形成，與空白對(duì)照組進(jìn)行t檢驗(yàn)，0.45 g凝膠/kg有非常顯著性差異(P＜0.01)，0.9、1.8 g凝膠/kg有極顯著性差異(P ＜0.001)。

表5 復(fù)方黃松凝膠對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(n=10)

表6 復(fù)方黃松凝膠對(duì)大鼠棉球肉芽腫形成的影響(n=10)

3 結(jié)論

復(fù)方黃松凝膠可有效抑制從臨床分離金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、鏈球菌、淋病雙球菌和陰道毛滴蟲(chóng);能抑制家兔陰道白色念珠菌的生長(zhǎng)繁殖，修復(fù)白色念珠菌感染家兔陰道黏膜上皮，減輕間質(zhì)炎癥反應(yīng);可減輕巴豆油引起的小鼠耳廓炎性水腫;抑制角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹;減少棉球刺激引起的大鼠肉芽組織增生。綜合復(fù)方黃松凝膠的抗菌、抗滴蟲(chóng)、抗炎試驗(yàn)結(jié)論，提示復(fù)方黃松凝膠具有抗菌、抗滴蟲(chóng)、消炎的作用，為復(fù)方黃松凝膠用于婦科陰道疾病治療提供藥效學(xué)依據(jù)。

［1］陳 奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:1069.

［2］朱社敏，柴秀娟，匡 榮.復(fù)方大青葉合劑主要藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2004，26(11):909－911.

［3］陳曉軍，陳學(xué)芬，楞瑞生.廣西壯族民間用藥苦丁冬青降火茶的抑菌抗炎作用研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2005，74:158－160.

［4］譚元生，胡 宏，黃大香，等.復(fù)方苦參洗液的藥效學(xué)研究［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，20(1):12－14.