陳敬民， 李開雙， 李翠紅， 周 軍

(廣西中醫(yī)藥研究院，廣西南寧530022)

復(fù)方黃松凝膠由崗松油、大葉桉油、滿山香油、蛇床子油、千里光、地膚子及黃柏組成，是廣西源安堂藥業(yè)有限公司復(fù)方黃松洗液(批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字Z20026294)的新劑型;具有清熱利濕、祛風(fēng)止癢作用，用于濕熱下注證，癥見陰部瘙癢，或灼熱痛，帶下量多，色黃如膿或赤白相間，或呈黃色泡沫狀;霉菌性、滴蟲性、非特異性陰道炎及外陰炎見以上征候者。為了開發(fā)新藥進(jìn)行新劑型主要藥效學(xué)研究［1］，現(xiàn)報告如下。

1 材料

1.1 藥物

復(fù)方黃松凝膠，每百克凝膠含總揮發(fā)油2.85 g和生藥18 g，廣西源安堂藥業(yè)有限公司提供，批號:051204;復(fù)方黃松洗液，每100 mL洗液含總揮發(fā)油0.95 g和生藥6 g，廣西源安堂藥業(yè)有限公司，批號:0504304。

1.2 動物

家兔，新西蘭種，體重2～2.5 kg，♀性，普通級，由廣西草業(yè)公司提供;NIH小鼠，18～22 g，普通級，由廣西中醫(yī)藥研究院動物室提供;WISTAR大鼠，250～300 g，清潔級，由廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號:SCXK桂2003－0003。

1.3 菌株

每菌各10株，均為臨床分離;金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、化膿性鏈球菌、白色念珠菌，由廣西區(qū)人民醫(yī)院、廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院提供;淋病雙球菌由廣西皮膚病防治研究所提供;陰道毛滴蟲由廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、廣西皮膚病防治研究所提供。

1.4 試劑與儀器

2%巴豆油，自配;丙酮，廣州化學(xué)試劑廠，批號:040610;角叉菜膠，SIGMA公司;培養(yǎng)基，按衛(wèi)生部《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》制備;桂敏淋菌培養(yǎng)基，廣西皮膚病防治研究所，批號:050908;滅菌干棉球，自制，10 mg/只;steri－Cyoier381 培養(yǎng)箱，美國Forma公司;光學(xué)顯微鏡，梧州光學(xué)儀器廠;FA1004型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.5 統(tǒng)計方法

抗菌、抗滴蟲實(shí)驗(yàn)資料統(tǒng)計以MIC50表示，抗炎實(shí)驗(yàn)資料統(tǒng)計采用t檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 體外抗菌作用

取復(fù)方黃松凝膠配成1:2、1:4、1:8、……、1:1024不同濃度，按文獻(xiàn)［2］進(jìn)行增菌，對倍稀釋于各種濃度培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，觀察有無細(xì)菌生長，以細(xì)菌不生長的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度(MIC)，根據(jù)各菌10個菌株的MIC利用回歸方程求出MIC50、MIC90。結(jié)果見表1，復(fù)方黃松凝膠對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、鏈球菌、淋病雙球菌均有不同程度的抗菌作用。

表1 復(fù)方黃松凝膠的體外抗菌作用(n=10)

2.2 體外抗陰道毛滴蟲作用

取復(fù)方黃松凝膠配成1:2、1:4、1:8、……、1:1024不同濃度;另在室溫(25℃)下將陰道患毛滴蟲病患者的陰道分泌物用生理鹽水洗下制成滴蟲密度為每個低倍顯微鏡視野下有1 000個以上運(yùn)動活潑的滴蟲液;每級試驗(yàn)取不同濃度藥液0.5 mL加滴蟲液0.5 mL，同時用蒸餾水作陰性對照，鏡下觀察并記錄藥物接觸5、10及20 min滴蟲是否失去活動力，利用回歸方程求出MIC50、MIC90。結(jié)果見表2，陰道毛滴蟲與復(fù)方黃松凝膠隨濃度增大、作用時間延長，殺滴蟲作用增強(qiáng)，20 min的MIC50是0.079 mg生藥/mL。

表2 復(fù)方黃松凝膠對陰道毛滴蟲的殺滅作用(n=10)

2.3 對白色念珠菌誘發(fā)家兔陰道炎的影響

家兔36只隨機(jī)分為6組，除空白對照組外，將其余5組家兔用消毒9號注射針頭在距陰道口1 cm陰道黏膜處作環(huán)型創(chuàng)傷，并在破損陰道黏膜處注入3×107/L白色念珠菌液(菌株號2199)0.2 mL。感染24 h開始陰道給藥，每天1次，連續(xù)7 d。治療結(jié)束后第2天處死動物作陰道涂片檢查，并取陰道組織作組織病理學(xué)觀察。結(jié)果見表3，給藥組陰道涂片觀察大多數(shù)動物未見白色念珠菌，陽性率顯著減少，病理檢查結(jié)果顯示大多數(shù)家兔PAS染色未見白色念珠菌菌體或芽孢，HE染色可見家兔陰道黏膜上皮修復(fù)完整，間質(zhì)炎癥反應(yīng)減退或未見炎癥反應(yīng)。用陰道涂片的陽性率和炎癥治愈率進(jìn)行χ2組間比較，結(jié)果復(fù)方黃松凝膠0.94 g凝膠/kg組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。

表3 復(fù)方黃松凝膠對白色念珠菌誘發(fā)家兔陰道炎的影響(n=6)

2.4 對巴豆油致小鼠耳廓腫脹的影響

取小鼠50只，♂♀各半，隨機(jī)分為5組，各組分別用相應(yīng)藥物涂擦右耳殼兩側(cè)，于給藥后30 min，用2%巴豆油0.05 mL/只均勻涂于右耳殼兩側(cè)，4 h后處死小鼠，剪下兩只耳殼、重疊，用直徑為8 mm沖鑿取圓片，稱重，以左、右耳重量之差作為腫脹度，計算均數(shù)方差，求出各組的腫脹抑制率，與空白對照組比較，以組間t檢驗(yàn)檢驗(yàn)其差異顯著性。結(jié)果見表4，復(fù)方黃松凝膠1.3、2.6 g凝膠/kg能明顯抑制巴豆油所致的小鼠耳廓腫脹。

表4 復(fù)方黃松凝膠對巴豆油所致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10)

2.5 對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響

取大鼠50只，♂性，隨機(jī)分成5組，實(shí)驗(yàn)前用軟尺測各鼠右后足跖正常周長，隨即涂藥1次。涂藥后30 min，各組大鼠右后足足跖皮下注射1%角叉菜膠0.05 mL/只致炎，同時再涂藥1次，分別于注入角叉菜膠致炎后1、2、4、6 h測定各大鼠右后足肢體腫脹程度(腫脹度=致炎后足跖周長－致炎前正常足跖周長)。計算各組均數(shù)方差，與空白對照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見表5，復(fù)方黃松凝膠給藥后能抑制角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹，其中在4 h各劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。

2.6 對大鼠棉球肉芽腫的影響

取大鼠50只，♂♀各半，按文獻(xiàn)［3］方法進(jìn)行棉球植入手術(shù)、分組、皮膚給藥，給藥第8天處死動物，取棉球肉芽、干燥、稱重，將稱得的重量減去棉球原重量即為肉芽腫凈重量。計算各組均數(shù)方差，與空白對照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見表6，復(fù)方黃松凝膠連續(xù)給藥7 d，能顯著抑制大鼠棉球肉芽腫的形成，與空白對照組進(jìn)行t檢驗(yàn)，0.45 g凝膠/kg有非常顯著性差異(P＜0.01)，0.9、1.8 g凝膠/kg有極顯著性差異(P ＜0.001)。

表5 復(fù)方黃松凝膠對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(n=10)

表6 復(fù)方黃松凝膠對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(n=10)

3 結(jié)論

復(fù)方黃松凝膠可有效抑制從臨床分離金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、鏈球菌、淋病雙球菌和陰道毛滴蟲;能抑制家兔陰道白色念珠菌的生長繁殖，修復(fù)白色念珠菌感染家兔陰道黏膜上皮，減輕間質(zhì)炎癥反應(yīng);可減輕巴豆油引起的小鼠耳廓炎性水腫;抑制角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹;減少棉球刺激引起的大鼠肉芽組織增生。綜合復(fù)方黃松凝膠的抗菌、抗滴蟲、抗炎試驗(yàn)結(jié)論，提示復(fù)方黃松凝膠具有抗菌、抗滴蟲、消炎的作用，為復(fù)方黃松凝膠用于婦科陰道疾病治療提供藥效學(xué)依據(jù)。

［1］陳 奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:1069.

［2］朱社敏，柴秀娟，匡 榮.復(fù)方大青葉合劑主要藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2004，26(11):909－911.

［3］陳曉軍，陳學(xué)芬，楞瑞生.廣西壯族民間用藥苦丁冬青降火茶的抑菌抗炎作用研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2005，74:158－160.

［4］譚元生，胡 宏，黃大香，等.復(fù)方苦參洗液的藥效學(xué)研究［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，20(1):12－14.