趙海琳 閆惠平 張海萍 （首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院感染與免疫研究中心,北京 100069）

83例原發(fā)性肝癌患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果分析①

趙海琳②閆惠平 張海萍 （首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院感染與免疫研究中心,北京 100069）

目的:探討原發(fā)性肝癌患者自身抗體產(chǎn)生的規(guī)律及臨床意義。方法:以臨床診斷為原發(fā)性肝癌患者83例作為研究對(duì)象,采用間接免疫熒光法及免疫印跡法檢測(cè)患者血清中自身抗體。結(jié)果:83例肝癌患者自身抗體檢出率為37.3%（31/83）,其中HBV感染患者檢出率35.9%（23/64）,HCV感染者檢出率50.0%（8/16）,二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。能檢測(cè)到一種、兩種及三種自身抗體的患者分別為24.1%、12.1%和1.2%?？购丝贵w（ANA）、抗細(xì)胞骨架抗體（CS）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）的檢出率分別為24.1%、13.3%、9.6%和4.8%。抗核抗體譜分析有Ro-52、CENP-B（著絲點(diǎn)B抗原）等自身抗體陽性。AFP（甲胎蛋白）異常及AFP正常的患者自身抗體檢出率分別為36.8%和22.2%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。HBV-DNA陽性與HBV-DNA陰性患者自身抗體檢出率分別為40.5%和27.3%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性患者自身抗體檢出率明顯高于男性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:37.3%的原發(fā)性肝癌患者能檢測(cè)到非器官特異性的自身抗體:ANA、CS、SMA和AMA,大多患者以檢出其中一種抗體為主,部分患者能檢出二至三種自身抗體。ANA、CS、SMA和AMA四種自身抗體中檢出率最高的是ANA,其次是CS和SMA,檢出率最低的是AMA。各抗體均以低滴度為主。ANA熒光模型以顆粒型為主。血清AFP含量的高低與自身抗體檢出率之間未見明顯相關(guān)性。HBV-DNA陽性患者與HBV-DNA陰性患者自身抗體檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性患者自身抗體檢出率明顯高于男性。

原發(fā)性肝癌;自身抗體;檢測(cè)

近年來,關(guān)于病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等患者體內(nèi)能檢測(cè)到自身抗體的報(bào)道越來越多[1-9]。本文通過對(duì)83例原發(fā)性肝癌患者血清抗核抗體（ANA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗線粒體抗體（AMA）及抗細(xì)胞骨架抗體（CS）等自身抗體的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,探討原發(fā)性肝癌患者自身抗體產(chǎn)生的特點(diǎn),分析自身抗體與AFP、DNA及年齡、性別之間的關(guān)系及其臨床意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 本組83例均為北京佑安醫(yī)院2008年1～12月臨床診斷為原發(fā)性肝癌的住院患者。其中男58例,女25例。年齡29～89歲,其中≤30歲者2例,31～39歲3例,40～49歲18例,50～59歲27例,60～69歲18例,70～79歲14例,80～89歲1例。

HBV表面抗原陽性者（乙肝肝癌組,A組）64例（77.1%）,男51例、女13例;HCV抗體陽性者（丙肝肝癌組,B組）16例（19.3%）,男4例、女12例;HBV表面抗原及HCV抗體陰性者（非乙非丙組,C組）3例（3.6%）,均為男性。

1.2 檢測(cè)試劑及方法 本組患者自身抗體檢測(cè)均采用德國歐蒙（Euroimmuno）公司產(chǎn)品,采用間接免疫熒光法（IIF）檢測(cè)抗核抗體（ANA）、抗線粒體抗體（AMA）、抗平滑肌抗體（SMA）、抗細(xì)胞骨架（CS）、抗肝腎微粒體（LKM）等自身抗體。血清自1∶100起稀釋,選擇的抗原基質(zhì)有Hep-2細(xì)胞,猴肝和心肌組織,大鼠肝、腎和胃組織。操作步驟按歐蒙公司生物薄片馬賽克TM技術(shù)試劑盒說明書進(jìn)行,封片后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果,組織或細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)特征性綠色熒光,血清稀釋度≥1∶100為陽性。歐蒙免疫印跡法進(jìn)行抗核抗體譜檢測(cè),檢測(cè)膜條包被抗原有:nRNP/Sm 、Sm 、SS-A 、Ro-52、SS-B 、Scl-70 、Jo-1 、CENP-B 、dsDNA 、Nukleosomen 、Histone 、Rib.p-Rrot,操作按說明書進(jìn)行。AFP采用美國雅培試劑盒微粒子酶免疫法（MEIA）進(jìn)行檢測(cè),AFP＞10.9 ng/ml為異常。HBVDNA檢測(cè)采用熒光定量PCR法,檢測(cè)下限為500 copies/ml,＞500 copies/ml為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)版本為SPSS17.0,數(shù)據(jù)處理采用 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 自身抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 自身抗體檢出率 83例原發(fā)性肝癌患者中,共有31例患者檢出自身抗體陽性,總陽性率為37.3%（31/83）。檢出的自身抗體包括抗核抗體（ANA）、抗細(xì)胞骨架抗體（CS）、抗平滑肌抗體（SMA）和抗線粒體抗體（AMA）。ANA、CS、SMA及AMA的檢出率分別為 24.1%（20/83）、13.3%（11/83）、9.6%（8/83）和4.8%（4/83）。見表1。

20例（24.1%）患者僅檢出一種自身抗體陽性,分別為:ANA 9 例、CS 5例 、SMA 5例 、AMA 1 例;10例（12.1%）同時(shí)檢出兩種自身抗體陽性,分別為:（ANA+AMA）4 例 、（ANA+CS）3 例 、（ANA+SMA）2例、（SMA+CS）1例;同時(shí)檢出三種自身抗體的1例（1.2%）,為（ANA+SMA+CS）。

A組（乙肝肝癌組）自身抗體檢出率為35.9%,B組（丙肝肝癌組）為50.0%,兩組自身抗體檢出率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.07,P＞0.05）。見表1。

2.1.2 自身抗體滴度分布 20例ANA陽性患者中 ,12例（60%）滴度為 1∶100,7例（35%）1∶320,1例（5%）1∶1 000;11例CS陽性患者中,8例（73%）滴度為1∶100,2例（18%）1∶320,1例（9%）出現(xiàn)了1∶1 000高滴度;8例SMA 陽性患者中,4例1∶100,4例1∶320;4例AMA陽性患者的滴度全部為1∶100。

2.1.3 ANA譜 8例ANA滴度≥320的患者采用歐蒙免疫印跡法進(jìn)行了ANA譜檢測(cè),結(jié)果顯示:一例（男63歲乙肝肝癌）Ro-52陽性,一例（女49歲丙肝肝癌）CENP-B陽性,一例（男61歲乙肝肝癌）抗組蛋白及抗dsDNA陽性,一例（女62歲乙肝肝癌合并類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎）SS-A陽性。

2.1.4 ANA熒光模型 20例ANA陽性患者的熒光模型分別為:顆粒型10例,均質(zhì)型4例,核仁型2例,核膜型1例,著絲點(diǎn)型1例,核仁+顆粒1例,核膜+核點(diǎn)1例。

2.2 自身抗體檢出率與血清甲胎蛋白（AFP）含量的關(guān)系 83例原發(fā)性肝癌患者中75例進(jìn)行了血清AFP檢測(cè),分析血清AFP含量與自身抗體檢出率的關(guān)系,結(jié)果顯示,AFP異常（AFP＞10.9 ng/m l）的患者與AFP正常的患者自身抗體檢出率分別為36.8%（21/57）和22.2%（4/18）,二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外,AFP含量在10～500 ng/m l的患者與AFP大于1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率很接近（38.2%及37.5%）,而AFP含量在500～1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率稍低（28.6%）。但經(jīng) χ2檢驗(yàn),各組之間自身抗體檢出率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表1 83例原發(fā)性肝癌患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果[例（%）]Tab.1 The detective Results of autoantibodies in 83 patients with HCC[n（%）]

表2 75例原發(fā)性肝癌患者血清AFP與自身抗體檢出率的關(guān)系[例（%）]Tab.2 The association between AFP and autoantibodies in 75 patientswith HCC[n（%）]

表3 乙肝肝癌患者自身抗體檢出率與HBV-DNA的關(guān)系[例（%）]Tab.3 The association between autoantibodies and HBV-DNA[n（%）]

2.3 乙肝肝癌組自身抗體檢出率與DNA的關(guān)系乙肝肝癌組42例DNA陽性患者中17例（40.5%）自身抗體檢測(cè)陽性;22例DNA陰性組中6例（27.3%）自身抗體陽性。兩組自身抗體檢出率進(jìn)行比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.09,P＞0.05）,見表3。

2.4 自身抗體與年齡及性別的關(guān)系 本次研究中對(duì)患者進(jìn)行了年齡段的劃分,結(jié)果顯示自身抗體檢出率最高的是60～69歲年齡組（66.7%）,＜70歲患者隨年齡增長(zhǎng),自身抗體檢出率呈現(xiàn)逐步上升的趨勢(shì),之后又呈下降趨勢(shì)。80歲以上患者總共只有1例,為自身抗體陽性。

83例肝癌患者中男性58例,自身抗體檢出率29.3%（17/58）;女性25例,自身抗體檢出率56%（14/25）,男女患者自身抗體檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.32,P＜0.05）。

3 討論

83例肝癌患者血清中主要檢出了ANA、CS、SMA和AMA四種自身抗體,總陽性率為37.3%（31/83）,未檢出LKM（肝腎微粒體抗體）和LSP（肝特異性蛋白）抗體。檢出率最高的是ANA,最低的是AMA,各抗體均以低滴度為主,這一結(jié)果與大多文獻(xiàn)報(bào)道相一致[4-7]。資料顯示病毒性肝炎及其相關(guān)疾病患者可產(chǎn)生LSP抗體,但這次研究中未檢出,可能與研究病例少有關(guān)。

本次研究中對(duì)部分患者進(jìn)行了抗核抗體譜分析,從檢測(cè)結(jié)果顯示肝癌患者抗核抗體靶抗原有Ro-52、CENP-B 、dsDNA、SS-A（出現(xiàn) SS-A 陽性的患者同時(shí)伴有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,所以此抗體的出現(xiàn)也可能與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)）等,這似乎提示肝癌患者的抗核抗體可以有多種靶抗原,或許還有某一特定靶抗原尚未發(fā)現(xiàn),但本次研究中檢測(cè)例數(shù)相對(duì)少,希望通過以后進(jìn)一步增加研究對(duì)象加以證實(shí),同時(shí)也期待著包被有更多抗原分子的檢測(cè)膜條或其它更先進(jìn)檢測(cè)手段的出現(xiàn),從而為各種自身抗體靶抗原特征研究創(chuàng)造條件,并進(jìn)一步闡明它們與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。通過對(duì)ANA熒光模型的觀察發(fā)現(xiàn),肝癌患者ANA雖可出現(xiàn)多種熒光模型,但仍以顆粒型為主。

ANA、CS、SMA和AMA都是非器官特異性自身抗體,它們可能不直接參與肝細(xì)胞的損傷,但可能以免疫復(fù)合物的形式加重肝臟損傷并引發(fā)肝外相關(guān)疾病,所以對(duì)于肝病患者如何調(diào)整機(jī)體免疫狀態(tài)很重要,既要提高抗病毒抗腫瘤免疫力又要控制自身免疫反應(yīng),這也是免疫學(xué)領(lǐng)域的一大難題。本次研究中雖然丙肝肝癌例數(shù)少,但其自身抗體檢出率（50.0%）高于乙肝肝癌（35.9%）這一結(jié)果卻與文獻(xiàn)報(bào)道[8,9]相符,即丙肝比乙肝患者更易出現(xiàn)自身免疫紊亂現(xiàn)象,所以,臨床上對(duì)于丙肝的干擾素抗病毒治療應(yīng)該比乙肝更為謹(jǐn)慎。研究結(jié)果顯示SMA在丙肝肝癌患者體內(nèi)的檢出頻率高于乙肝,SMA是否是丙肝患者特征性自身抗體有待于進(jìn)一步研究。

AFP是診斷原發(fā)性肝癌比較可靠的指標(biāo)之一,在這次研究的83例患者中,有75例都進(jìn)行了AFP的檢測(cè)。為了了解AFP與原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)自身抗體之間的關(guān)系,本文對(duì)75例患者血清AFP含量與自身抗體檢出率進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示AFP異常的患者自身抗體檢出率高于AFP正常的患者,另外,AFP含量10～500 ng/ml及＞1 000 ng/m l的患者自身抗體檢出率很接近（38.2%及37.5%）,且均高于AFP含量 500～1 000 ng/m l的患者（28.6%）,這是不是提示我們,AFP含量處于中間水平時(shí)自身免疫反應(yīng)弱,而過高或過低時(shí)自身免疫反應(yīng)增強(qiáng)。檢測(cè)結(jié)果顯示肝癌患者自身免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱似乎體現(xiàn)在AFP含量的變化上,但就個(gè)案看,有五例患者AFP值一度超過35 350 ng/ml,但他們的自身抗體檢出率為零,而18例AFP低于正常值的患者中卻有4例檢出自身抗體。血清AFP含量的高低與自身抗體檢出率之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步探討。

在我國,HBV及HCV的慢性感染是導(dǎo)致原發(fā)性肝癌最常見的原因。在本次研究中,83例原發(fā)性肝癌患者中64例都存在HBV慢性感染,占77.1%;16例有HCV慢性感染,占19.3%。這一結(jié)果符合我國乙肝高發(fā)的特點(diǎn)。另有三例既無HCV感染史（HCV IgG、IgM及HCV RNA陰性）,也沒有HBV的現(xiàn)癥感染情況（HBV DNA小于500 copies/m l,HBsAg陰性）,但這三例患者都有HBV既往感染史（三位患者都出現(xiàn)了HBV一至三種抗體陽性）,所以這三例患者仍不排除存在HBV的隱匿性感染現(xiàn)象,也就是說這三例患者肝癌的發(fā)生可能仍與HBV感染有著密切的關(guān)系。因此,從導(dǎo)致原發(fā)性肝癌的原因看,預(yù)防HBV及HCV感染就等于預(yù)防了90%以上肝癌的發(fā)生,所以預(yù)防接種及避免醫(yī)源性病毒感染仍是我國避免肝癌發(fā)生的重要手段。

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[收稿2010-06-17 修回2010-07-13]

（編輯 倪 鵬）

Analysis of autoantibodies in 83 patientswith primary hepatic carcinnoma

ZHAOHai-Lin,YANHui-Ping,ZHANGHai-Ping.InfectionandImmunologyResearchCenter,BeijingYou′anHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China

Objective:To study the characteristics of autoantibodies in patientswith primary hepatocellular carcinoma（HCC）.Methods:83 patients with primary hepatocellular carcinoma（HCC）were studied.Different autoantibodies were detected by indirect immunofluorescent assay（IIF,Euroimmuno,Germany）.Results:31 of 83 caseswere found autoantibodies（37.3%）,in whom 64 patientswere in HBV infection,with 23 autoantibodies positive（35.9%）.8were autoantibody-positive in 16 patientswith HCV infection（50.0%）.Therewas no significant differences between the two groups（P＞0.05）.24.1%（20/83）or12.1%（10/83）or 1.2%（1/83）patientswere positive forone,two or three kinds of autoantibodies respectively.Anti-nuclear antibody（ANA）was themost popular（24.1%）than others.Anti-cytoskeleton（CS）was 13.3%,whereas anti-smoothmuscle antibody（SMA）was 9.6%and anti-m itochond ria antibody（AMA）4.8%respectively.Itwas shown thatanti-Ro-52 or anti-CENP-Bwas positiveby ANA analysis.Comparing AFP normalwith abnormal patients,antoantibody rate（22.2%vs 36.8%）had no significantdifference.There were no remarkable difference between autoantibodies positivegroup and autoantibodies negative group forHBV-DNA.Conclusion:Non-organ-specific autoantibodies—ANA,CS,SMA and AMA can be detected in 37.3%patientswith HCC.The highest detection rate is ANA,the next is CSand SMA,and the lowest is AMA.Allof detected autoantibodies are shown with low titer（1∶100）.Concentration of AFP and autoantibodies is not shown significant correlation.There is no remarkable difference in autoantibodies between HBV-DNA positive group and negative group.

Hepatocellular carcinoma;Autoantibodies;Detection

R735.7

A

1000-484X（2010）12-1127-04

10.3969/j.issn.1000-484X.2010.12.016

①本文為北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.7092046）

②云南省曲靖醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校微生物與免疫教研室,曲靖 655000

趙海琳（1970年-）,女,碩士,副教授,主要從事微生物與免疫學(xué)教學(xué)工作;

及指導(dǎo)教師:閆惠平（1955年-）,女,研究員,主要從事自身免疫性肝病研究,E-mail:yhp503@vip.sina.com。