張辰露

(陜西理工學(xué)院陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西漢中723000)

娑羅子為七葉樹科植物中華七葉樹(Aesculus chinensis Bunge.)、浙江七葉樹(A.chinensis Bunge.var.chekiangensis(Hu et Fang)Fang)和天師栗(A.wilsonii Rehd.)的干燥成熟種子。娑羅子的主要成分為皂苷類化合物，具有疏肝、理氣、和胃、止痛、殺蟲之功效，還具有抗炎作用、消腫脹作用、抗?jié)B出、抗腫瘤作用［1］。中國藥典(2005年版)中規(guī)定娑羅子中七葉皂苷A的含量不得低于0.7%，炮制方法為去外殼及雜質(zhì)，用時打碎，其敘述較為簡單，且可操作性不強(qiáng)。而在實(shí)際生產(chǎn)中多數(shù)廠家是將娑羅子切片或作為原料藥粉碎直接提取，娑羅子經(jīng)炮制后便于調(diào)劑與制劑。國內(nèi)文獻(xiàn)資料極少針對影響娑羅子飲片質(zhì)量的加工方法進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)以新鮮娑羅子為樣品，比較幾種現(xiàn)行的炮制加工方法，分析研究娑羅子中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量變化，以改進(jìn)娑羅子炮制加工技術(shù)，為完善娑羅子飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

Agilent HP1100，G1314AVWD紫外檢測器，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Hypersil ODS(4.6 mm ×150 mm)5 μm，HPChem 色譜工作站。FA2004型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。302恒溫干燥箱(山東濰坊醫(yī)療器械公司)。

1.2 藥材

本批藥材于2007年10月在陜西省略陽縣采集。選擇10株以上樣樹，挑選大小均一、光滑飽滿、自然成熟的七葉樹種子，揀選去外殼及雜質(zhì)。經(jīng)陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室王勇博士鑒定其為Aescu-lus chinensis Bunge.的成熟種子。

2 方法

2.1 樣品溶液的制備

稱取娑羅子飲片樣品各10 g，置250 mL燒瓶中，加10倍量水，煎煮3次，每次2 h，濾過，合并濾液，濃縮至100 mL，放冷，備用。

2.2 水浸出物量(干膏率)的測定

精密吸取上述備用液30 mL，分別置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置烘箱中干燥3 h(105℃)，取出，置于干燥器中放置0.5 h，稱重，計算水浸出物量(干膏率)。

2.3 樣品含量測定方法

2.3.1 提取

精密稱取娑羅子樣品粉末1.0 g，置索氏提取器中，加乙醚，回流加熱1 h，棄去乙醚液，藥渣連同濾紙筒揮干溶劑后，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，超聲處理25 min，過濾，濃縮，水飽和正丁醇萃取4次，合并正丁醇，減壓濃縮后低溫?fù)]干溶劑，甲醇定容至25 mL，搖勻待測［1］。每個樣品做三次平行實(shí)驗(yàn)。

2.3.2 測定方法

檢測條件:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 Hypersil ODS(4.6 mm ×150 mm)5 μm，流動相為乙腈－0.02%磷酸溶液(35∶65)，檢測波長:220 nm，流速:1 mL/min，進(jìn)樣量:10 μL，檢測時間:16.5 min，柱溫:20℃。對照品及供試品的HPLC圖譜見圖 1、2。

圖1 對照品的HPLC色譜圖

圖2 娑羅子樣品中總皂苷的HPLC色譜圖

精密稱量對照品七葉皂苷鈉50 mg，甲醇定容至50 mL，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1.0 mg/mL。

分別精密吸取各對照品貯備液適量，配制成0.10、0.30、0.50、0.80、1.0 mg/mL 質(zhì)量濃度梯度，各進(jìn)樣10 μL，依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍見表1。

從調(diào)查中可以看出，區(qū)域教研組內(nèi)教師間的關(guān)系十分融洽，這種關(guān)系有助于教師形成歸屬感和認(rèn)同感，而這種關(guān)系是建立在教研組“尊重、關(guān)愛、合作”的基本理念基礎(chǔ)上的。

表1 七葉皂苷A和七葉皂苷B的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.3 精密度

精確吸取對照品溶液0.50 mg/mL，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得峰面積積分值，計算得相應(yīng)的七葉皂苷A和七葉皂苷B的RSD為1.12%和1.35%。結(jié)果表明精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性

取同一供樣品溶液，按上述色譜條件測定6次，每次間隔2 h，測得峰面積積分值，得到七葉皂苷A和七葉皂苷B的RSD為1.34%和1.61%。結(jié)果表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重現(xiàn)性

精密稱取娑羅子樣品粉末5份，按照供試品溶液的制備方法，精密稱取同一樣品，分別制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測定七葉皂苷A和B，結(jié)果平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為21.43和14.77 mg/g生藥，RSD分別為1.05%和1.43%。證明該法重現(xiàn)性良好。

2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收法，取已測定含量的娑羅子樣品粉末2 g，6份，精密稱定。分別精密加入七葉皂苷對照品溶液3、5、7 mL，按樣品溶液的制備方法如法制備、測定，計算回收率。七葉皂苷A的平均回收率為101.84%，RSD=1.03%(n=6);七葉皂苷B的平均回收率為96.79%，RSD=1.23%(n=6)?？蓪⒋朔ㄓ糜趯?shí)際樣品分析。

2.3.7 含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀器，測定與對照品溶液中七葉皂苷A與七葉皂苷B位置相應(yīng)的峰面積，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線得含量。

3 結(jié)果

為了方便醫(yī)療中的調(diào)劑與制劑，需要對娑羅子“制其形”，即將其制成飲片，其工藝包括產(chǎn)地干燥、軟化、切制以及飲片干燥，或干燥后粉碎。

3.1 不同干燥方法對娑羅子七葉皂苷的影響

娑羅子采集篩選后，在原產(chǎn)地用自來水噴淋洗凈，然后干燥。干燥方式對中藥材中有效成分的影響較大。樣品分別采用傳統(tǒng)自然晾曬法、直火熱風(fēng)烘干法和翻板式烘干法進(jìn)行干燥，并測定3種樣品中七葉皂苷A和B的含量，結(jié)果如表2。

表2 不同干燥方法對娑羅子七葉皂苷含量的影響(n=3)

由表2可知，加工同批藥材，傳統(tǒng)的自然晾曬法約用10 d，直火烘干法35℃需要5 d，采用翻板式干燥機(jī)55℃干燥則最多只需要5 h。比較三種干燥加工樣品的七葉皂苷含量可知:采用直火熱風(fēng)烘干法的樣品中七葉皂苷A和B含量都高于其它兩種方法，而翻板式烘干法含量相對較低。由此可見不同干燥方式下，藥材中七葉皂苷A和七葉皂苷B的含量和比例存在差異。

3.2 干燥溫度對娑羅子七葉皂苷含量的影響

將樣品放入實(shí)驗(yàn)室電熱鼓風(fēng)干燥箱中進(jìn)行溫度梯度試驗(yàn)，研究烘干溫度對娑羅子七葉皂苷含量的影響。樣品用量均為3 kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

由表3分析可知，隨著溫度的升高，娑羅子中七葉皂苷A和七葉皂苷B含量均呈現(xiàn)下降趨勢，80℃干燥達(dá)標(biāo)時七葉皂苷A的含量僅為40℃干燥的76.8%，說明七葉皂苷成分對溫度較敏感，溫度高于40℃或過低都不利于有效成分的保存，并且七葉皂苷A組分受溫度影響要大于七葉皂苷B。因此娑羅子最佳烘干溫度為30 ～40℃［3］。

3.3 不同軟化方法對娑羅子七葉皂苷含量的影響

干燥的藥材在切片之前應(yīng)進(jìn)行軟化，加水量、時間、溫度都對飲片品質(zhì)有影響。本實(shí)驗(yàn)分別采用先減壓后加水的軟化法與傳統(tǒng)泡潤法相比，兩種方法的測定結(jié)果見表4。

由表4可知減壓冷浸法七葉皂苷A和B的轉(zhuǎn)移率可達(dá)93.4%，而傳統(tǒng)泡潤法則只有70.1%，比較可知，減壓冷浸法軟化娑羅子能有效減少七葉皂苷在吸水軟化過程的損失，能提高加工過程中有效成分的轉(zhuǎn)移率。

3.4 不同切制方法對娑羅子七葉皂苷的影響

切制對飲片質(zhì)量的影響，主要表現(xiàn)在有效成分的溶解度上。只有適當(dāng)厚度的飲片在常規(guī)的煎煮時間內(nèi)，才能使有效成分充分溶于溶媒中。本實(shí)驗(yàn)對比了“產(chǎn)地切制”和“減壓冷浸軟化后切制”的不同類型的飲片中七葉皂苷含量的變化。結(jié)果見表5。

由表5可知飲片的厚度形狀對娑羅子有效成分的浸出影響較大。比較飲片的干膏收率可知:顆粒>薄片>中片>厚片?！俺悯r切制”的飲片中七葉皂苷A和B的轉(zhuǎn)移率要明顯大于“軟化后切制”。比較不同飲片的水浸出物中七葉皂苷A和B的含量可知:薄片>顆粒>中片>厚片。另外煎煮過程中高溫對七葉皂苷成分也會造成破壞作用［4］。

4 討論

4.1 自然晾曬法雖為傳統(tǒng)方法，但對于大規(guī)模集中生產(chǎn)來說，這種方法既不能提高生產(chǎn)效率又不易達(dá)到藥材的衛(wèi)生要求。雖然翻板式干燥法產(chǎn)量大效率高，但無法避免七葉皂苷的破壞和損失，分析溫度梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知干燥溫度是主要影響因素。干燥方式和干燥溫度不僅影響七葉皂苷的含量，還會影響各皂苷組分的比例。因此，比較可知采用35℃直火熱風(fēng)干燥法是目前有效且經(jīng)濟(jì)的方法。

4.2 在藥材的軟化過程中，減壓冷浸法對七葉皂苷的損失小，優(yōu)于傳統(tǒng)泡潤法，有效成分的轉(zhuǎn)移率可達(dá)93.4%。張轉(zhuǎn)平等［5］以幾個廠家采用傳統(tǒng)切制工藝所提供的樣品，測定其七葉皂苷A和七葉皂苷B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，比較可知生品最高，炮制后飲片中七葉皂苷A及七葉皂苷B含量明顯降低。同一炮制方法，不同廠家炮制，其轉(zhuǎn)移率差異較大，這可能與水泡時間長短有關(guān)。由于七葉皂苷成分可溶于水，應(yīng)盡量縮短與水的接觸時間，避免有效成分的流失。因此最好采用“趁鮮切制”，建議采收后及時進(jìn)行原產(chǎn)地加工。

4.3 娑羅子若需要切制當(dāng)以薄片為佳。薄片的七葉皂苷的水提取率略高于直接粉碎的藥材?？赡苁怯捎阪读_子的淀粉含量較高，在煎煮過程有可能糊化，從而影響有效成分的溶出。無論藥材是以切片還是顆粒形式，采用含水乙醇為提取溶劑，七葉皂苷的提取率可大大提高［6-7］。

4.4 藥材經(jīng)過水處理、切片后，含水量較高，給微生物的生長繁殖提供了條件，及時地進(jìn)行干燥處理，是保證飲片質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。此外在貯藏過程中還應(yīng)防止藥材“回潮”。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:206.

［2］尚萬榮，溫端財.切制、干燥對中藥飲片質(zhì)量的影響［J］.天津藥學(xué)，2001，13(6):53.

［3］張志梅，楊太新，翟志席，等.干燥方法對白芷中香豆素類成分含量的影響［J］.中國中藥雜志，2005，30(21):1703-1704.

［4］張辰露，李新生，梁宗鎖.七葉樹屬植物的分布特征及化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.西北林學(xué)院學(xué)報，2009，24(6):142-145.

［5］張轉(zhuǎn)平，胥道寶，王 靜.炮制對娑羅子中七葉皂苷A和七葉皂苷 B 的影響［J］.中藥材，2008，31(3):348-349.

［6］郭 杰，徐 嵬，楊秀偉.娑羅子中三萜皂苷成分的HPLC定量分析［J］.中草藥，2007，38(5):767-770.

［7］王緒英.娑羅子中七葉皂苷的提取分離與純化［J］.西北植物學(xué)報，2003，23(9):1592-1595.