使用雙三元梯度液相色譜(DGLC)
——讓工作變得更簡(jiǎn)單

戴安(DIONEX)園地

液相色譜技術(shù)在經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間有關(guān)速度的討論后,開(kāi)始逐漸回歸到關(guān)注液相的實(shí)用,說(shuō)到底,一個(gè)技術(shù)的好壞優(yōu)劣還是要看它解決實(shí)際問(wèn)題的能力 .美國(guó)戴安公司一向以離子色譜著稱(chēng)于世,近十年開(kāi)始在液相色譜技術(shù)方面也不斷推出新的技術(shù),UltiMate3000雙三元梯度液相色譜(DGLC)就是在近年來(lái)推出的最實(shí)用的液相色譜技術(shù) .

戴安雙三元梯度系統(tǒng)是在一個(gè)儀器箱內(nèi)放置兩臺(tái)三元梯度泵,通過(guò)共用自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、軟件和電腦達(dá)到兩套分析系統(tǒng)的功能,可以有以下的幾種組合方式:雙三元泵并聯(lián),雙三元泵串聯(lián),在線固相萃取,不同應(yīng)用間切換,二維或多維色譜分析 .

雙三元梯度泵并聯(lián)使用:

一套雙梯度系統(tǒng)可以完成兩套單梯度系統(tǒng)的工作,共享自動(dòng)進(jìn)樣器,效率提高 100%.

雙三元梯度泵串聯(lián)使用:

兩個(gè)流路共用自動(dòng)進(jìn)樣器和檢測(cè)器:一個(gè)泵用于分析,另一個(gè)泵用于色譜柱再生,色譜柱在兩個(gè)流路間切換,從運(yùn)行周期中減去沖洗及平衡色譜柱的時(shí)間,可縮短 20%—50%的運(yùn)行時(shí)間 .

全自動(dòng)在線固相萃取:

一個(gè)泵用于在線固相萃取,另一個(gè)泵用于色譜分析,吸附在 SPE柱的待分析物通過(guò)切換閥切換到分析流路中,可以將原來(lái)用 4—5h進(jìn)行固相萃取前處理的樣品縮短到 20m in左右在線完成,凈化或濃縮樣品并直接分析.

不同應(yīng)用間自動(dòng)切換:

針對(duì)同時(shí)使用不同淋洗液 (正相和反相淋洗液)的用戶,可以通過(guò)兩個(gè)泵和兩個(gè)十通切換閥切換實(shí)現(xiàn) .可使用不同的溶劑組合,不同的色譜柱,通過(guò)變色龍 (Chrom eleon)軟件在兩個(gè)應(yīng)用之間自動(dòng)切換,不需要手工更換溶劑及色譜柱,適合在兩種不同應(yīng)用間反復(fù)切換 .

二維或多維色譜分析:

二維或多維液相可以用來(lái)分析復(fù)雜的樣品以及高的峰容量,二維色譜可以是兩種不同分析機(jī)理的色譜法結(jié)合,比如一維是離子交換 (IEX),第二維為反相液相(RP-LC)或者是親和色譜與 RP-LC結(jié)合,儀器包括了所有二維所需的管路套盒和連接指導(dǎo),變色龍軟件可實(shí)時(shí)監(jiān)控全部流程,樣品在第一根色譜柱上分離,與色譜柱選擇性相同的組分結(jié)合到柱上,通常得到一個(gè)單峰,然后這個(gè)組分被轉(zhuǎn)移到第二根色譜柱上分離分析 .

以上組合中最具有實(shí)用價(jià)值的方式是“全自動(dòng)在線固相萃取”.利用這種組合方式,您可以實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的直接進(jìn)樣,色譜分析,可以將原來(lái)需要用天來(lái)計(jì)算樣品前處理及色譜分析時(shí)間縮短到短短的幾十分鐘甚至十幾分鐘,對(duì)于水、油、血液、體液等等各種復(fù)雜的樣品基質(zhì),需要做的僅僅是:1.啟動(dòng)儀器,2.得到結(jié)果 .

實(shí)例測(cè)定

實(shí)例為食用油中多環(huán)芳烴的在線固相萃取及液相色譜分析,可以簡(jiǎn)單有效地完成食用油樣品中美國(guó) EPA 610方法所列出的 12種多環(huán)芳烴類(lèi)化合物的在線固相萃取-HPLC的分析 .

儀器條件:

UltiMate DPG 3600A泵 (帶脫氣機(jī)),UltiMate TCC-3200柱溫箱 (帶兩個(gè)六通閥),W PS 3000TSL自動(dòng)進(jìn)樣器,RF2000熒光劑監(jiān)測(cè)器,使用變色龍軟件控制儀器運(yùn)行 .

色譜條件:

固相萃取柱:Ch rom Spher Pi,(3.0mm×80 mm,Varian),分析柱:Supelco PAH(4.6mm×250 mm),進(jìn)樣體積80μl(使用 100μl進(jìn)樣環(huán)),柱溫 30℃,自動(dòng)進(jìn)樣器溫度 40℃,流動(dòng)相 A:水,B:乙腈,C:異丙醇 .

食用油樣品在線固相萃取和 HPLC分離實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)圖 1到圖 3.

圖 1 泵A吸取異丙醇將樣品運(yùn)送至固相萃取柱,在線富集,同時(shí)泵B平衡分析柱

圖 2 泵A吸取乙腈水溶液將異丙醇和油從萃取柱上沖干凈,同時(shí)仍使用泵B平衡分析柱

圖 3 將富集了被分析物的固相萃取柱切換到分析流路,從而實(shí)現(xiàn)樣品的在線富集和分析

圖 4為美國(guó) EPA 610方法所列出的 12種多環(huán)芳烴類(lèi)化合物的連續(xù) 7次進(jìn)樣的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖 .保留時(shí)間的 RSD在0.026%—0.072%之間,色譜峰面積的 RSD在 4.1%—6.7%之間 .圖 5為 3種食用油樣品的在線固相萃取-HPLC色譜圖.

圖 4 12種多環(huán)芳烴類(lèi)化合物標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖 5 3種食用油樣品的在線固相萃取-HPLC色譜圖

色譜峰:1.phenanthrene;2. an thracene;3. fluoran thene;4.pyrene;5.benzo[a]anth racene;6.chrysene;7. benzo[b]fluoranthene;8.benzo[k]fluoranthene;9. benzo[a]pyrene;10. dibenzo[a,h]anthracene;11.benzo[g,h,i]perylene;12.indeno[1,2,3-cd]pyrene;13.enzo[b]crysene(內(nèi)標(biāo)物)