豬瘟病毒E2蛋白的原核表達(dá)及抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立
2009-12-31 00:00:00溫國(guó)元李坤邵華斌羅青平張蓉蓉王紅琳艾地云羅玲程國(guó)富楊峻
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2009年11期
摘要：以豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒石門(mén)株為模板，RT-PCR擴(kuò)增CSFV E2基因N端的主要抗原區(qū)(△E2)。PCR產(chǎn)物定向克隆至原核表達(dá)載體pET-32a中，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-△E2，轉(zhuǎn)化Eacterium coli BL21-Codonplus(DE3)，IPTG誘導(dǎo)重組△E2蛋白表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE和Western-blot鑒定蛋白的正確表達(dá)。KCI預(yù)染切膠法純化△E2蛋白，以其為包被抗原，通過(guò)反應(yīng)條件的優(yōu)化，建立了CSFV抗體ELISA檢測(cè)方法。用該方法對(duì)331份臨床血清進(jìn)行檢測(cè)，并與IDEXX公司阻斷ELISA試劑盒進(jìn)行了相符性驗(yàn)證，符合率為74％。為研制豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒奠定了基礎(chǔ)，
關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；E2蛋白；間接ELISA；原核表達(dá)
中圖分類(lèi)號(hào)：s852.65+9；Q785
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：0439—8114(2009)11—2632—04
