柯吳堅(jiān) 劉原君 姚衛(wèi)鋒 等

【摘要】目的：了解性病門診就診者中人乳頭瘤病毒(human papinomavims，HPV)及其它性傳播疾病(sexuallytransmltted disease，STD)病原體混合感染的流行情況。方法：對90例臨床樣本采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reac-tion，PCR)技術(shù)檢測尿道或?qū)m頸拭子HPV DNA，同時(shí)檢測其它STD病原體。結(jié)果：在90例就診者中，HPV DNA陽性13例(14.4％)，女性、混合感染數(shù)多者及教育程度低者HPV感染率高(P<0.05)，HPV感染者至少同時(shí)伴有1種其它STD病原體感染。結(jié)論：HPV在性病門診就診者中存在一定的感染率，HPV感染與性別、混合感染數(shù)、教育程度等相關(guān)，HPV與其它STD病原體的混合感染多見。

【關(guān)鍵詞】人乳頭瘤病毒；性傳播痰??；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

尖銳濕疣(condyloma acuminature，CA)是一種常見的性傳播疾病(sexuauy transmitted disease，STD)。截止到2004年，我國尖銳濕疣的發(fā)病率為11.64／10萬，占報(bào)告STD人數(shù)20.35％，排在7種報(bào)告STD的第三位。尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒(human papiuoma—vims，HPV)感染引起的良性增生性疾病，在全球STD中，HPV感染約占15％～20％，在性活躍成人的一生中，75％的人感染過HPV，單在美國每年就有620萬人新感染HPV。本研究通過檢測天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院性病門診就診者HPV的感染以了解本地區(qū)HPV的感染情況及其與年齡、婚姻、教育程度、性伴數(shù)以及混合感染的相關(guān)性。

1材料和方法

1.1研究對象

天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2009年4月至2009年6月性病門診就診者90例，男性60例，女性30例；年齡為18-70歲，平均32.47歲。

1.2標(biāo)本采集

男性用滅菌細(xì)小棉拭子緩慢伸入尿道內(nèi)約2cm處，停留片刻，輕輕捻轉(zhuǎn)取柱狀上皮細(xì)胞；女性采用窺陰器暴露官頸后，先用無菌棉拭子拭去宮頸表面分泌物，再用新的棉拭子伸入宮頸口內(nèi)約lcm處，停留片刻，輕輕捻轉(zhuǎn)取官頸黏膜上皮細(xì)胞；抽靜脈血進(jìn)行梅毒螺旋體(Treponema pallidum，TP)血清學(xué)及人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)血清抗體檢測。

1.3方法

1.3.1 HPV DNA的檢測過程：①引物合成：擴(kuò)增HPV L1基因片段的通用引物對MY09／ll由南京金思特科技有限公司合成并純化。②提取模板DNA。③PCR反應(yīng)：反應(yīng)總體系包含Premix Taq、模板DNA、上下游引物和滅菌蒸餾水。反應(yīng)條件為94℃先加熱5min后進(jìn)入循環(huán)，循環(huán)條件為：94％變性30sec、55％退火30sec、72~C延伸60sec，共循環(huán)35次，最后72't2延伸8sec。④PCR產(chǎn)物鑒定：1％瓊脂糖凝膠電泳在450bp處出現(xiàn)擴(kuò)增條帶說明HPV DNA陽性。

1.3.2其它STD病原體的檢測沙眼衣原體(Chlamydia trachomafis，cT)采用免疫層析法檢測CT特有的特異性脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)抗原；TP血清學(xué)檢查采用梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(rapid plasma reagin test，RPR)和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(treDonema pallidum particle aggutinafion test，TPPA)；HIV血清學(xué)檢查采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)方法檢測HIV(I+II型)抗體。以上各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。解脲支原體(Ureaplasma urealyticum，UU)、白色念珠菌(Candida albicans，CA)、淋病奈瑟菌(Neisse-ria gonorrhoeae，NG)分別采用本室自制牛肉浸汁培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基、巧克力培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組間感染率比較采用X²檢驗(yàn)，兩組間均數(shù)比較采用￡檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1性病門診患者HPV檢測結(jié)果

在90例就診者中，共有13例檢測出HPV DNA，占總檢測人數(shù)的14.4％；其中有6例臨床診斷為尖銳濕疣。見圖1。

2.2HPV感染相關(guān)因素分析見表1。

從表1可見，HPV的感染與性別、混合感染數(shù)、教育程度相關(guān)，女性、混合感染數(shù)多者及教育程度低者HPV感染率高(P

2.3 HPV感染與其它STD病原體的混合感染情況

見表2。

表2顯示，13例HPV感染者都伴有1種或1種以上STD病原體感染，HPV感染同時(shí)合并CT和UU的感染率最高，達(dá)38.5％，其中有l(wèi)例HPV感染者同時(shí)伴有另外4種STD病原體(CT、UU、IP、CA)感染。

3討

論

HPV是一種具有高度宿主和組織特異性的DNA病毒，不同型的HPV感染可以引起不同的臨床表現(xiàn)，其中侵犯泌尿生殖道上皮約有25～30個(gè)型。根據(jù)HPV感染宿主后的臨床表現(xiàn)不同，可分為典型(顯性)感染、HPV亞臨床感染(subclinical papillomaviral infee.tion，SPI)和潛伏(隱性)感染(1atent papillomaviral in—feetion，LPI)。SPI和LPI的感染率明顯高于典型(顯性)感染。在性活躍人群中，至少有15％為SPI，而只有1％的HPV感染者臨床出現(xiàn)可見的尖銳濕疣損害。SPI和LPI也具有傳染性，在一定條件下可能發(fā)展成尖銳濕疣，臨床醫(yī)生通過采取各種干預(yù)手段來控制SPI和LPI，可有效的減少尖銳濕疣的發(fā)生和復(fù)發(fā)。因此，通過檢測HPV可及早地發(fā)現(xiàn)SPI與LPI。但HPV在組織細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制的方式進(jìn)行繁殖，很難在體外的組織或細(xì)胞培養(yǎng)中生長，也很難在實(shí)驗(yàn)動物中接種生長，并缺少一種可靠的血清學(xué)檢測方法，所以目前主要應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)檢測HPV。本實(shí)驗(yàn)所采用PCR方法是一種特異性強(qiáng)、敏感性高、簡便快捷的分子生物學(xué)技術(shù)。選用Manos等設(shè)計(jì)的MY11／09通用引物對，通過擴(kuò)增HPV晚期區(qū)L1開放閱讀框架(open reading frame，ORF)序列，可以檢測出39種HPV類型，它們中包含了絕大多數(shù)的HPV高危型及低危型，有利于HPV的流行病學(xué)調(diào)查。

本研究應(yīng)用PCR技術(shù)對90例性病門診就診者進(jìn)行HPV DNA檢測，HPV檢出率為14.4％(13／90)，與Van der Snoek等報(bào)道的15.8％接近，但低于Wik—strom等檢測的20.4％。本研究顯示，女性HPV檢出率為26.7％(8／30)，與李紅玉等對4666例婦科門診女性患者HPV陽性率25.50％相仿；而男性就診者HPV檢出率為8.3％(5／60)，低于唐旭等對杭州地區(qū)性病門診男性就診者HPV DNA檢測的陽性率13.8％(42／305)，可能與地區(qū)差異或樣本量不夠大有關(guān)。13例HPV陽性患者中，只有6例臨床診斷為尖銳濕疣，其余7例沒有出現(xiàn)肉眼可見的皮膚黏膜損害，為SPI或LPI。對這部分患者也應(yīng)給予積極的治療和隨診，以減少尖銳濕疣的發(fā)生。

HPV的感染與性別、混合感染數(shù)、教育程度相關(guān)，而與婚姻情況和年齡無關(guān)。女性的HPV感染率明顯高于男性，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與女性生殖道特殊的生理結(jié)構(gòu)有關(guān)，因而比男性更易感染HPV.該結(jié)果與Siavinsky等的研究結(jié)果一致。HPV陽性者平均性伴數(shù)與HPV陰性者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但女性HPV感染者性伴數(shù)明顯低于男性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明隨著男性的性伴數(shù)增多，將導(dǎo)致其與HPV感染者接觸的機(jī)會增加。此外，性伴數(shù)的增多常伴有性生活頻率的增加，使其感染HPV的風(fēng)險(xiǎn)性隨之增高，而此項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)因素在女性身上體現(xiàn)并不顯著。HPV感染者學(xué)歷明顯低于HPV陰性者，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HPV陽性檢出率與受教育程度成反比，因此提示應(yīng)加強(qiáng)對文化程度較低人員進(jìn)行必要的倫理道德和衛(wèi)生保健知識宣傳教育。

HPV感染者常同時(shí)伴有其它STD病原體感染，可能由于HPV感染導(dǎo)致患者體內(nèi)及局部皮膚黏膜細(xì)胞免疫功能存在不同程度障礙，降低患者體內(nèi)及局部的抗病能力，有利于其它STD病原體的感染；另外，某些糜爛潰瘍性STD(如梅毒和生殖器皰疹等)可導(dǎo)致皮膚黏膜屏障受到破壞，有助于HPV的侵入，兩方面的共同作用使HPV感染者出現(xiàn)STD高混合感染的情況。HPV的混合感染常使患者的臨床癥狀變得復(fù)雜，給臨床診斷和治療帶來困難。許多研究表明，尖銳濕疣合并其它STD是尖銳濕疣復(fù)發(fā)的重要因素之一。而在實(shí)際臨床工作中，不少醫(yī)生在診斷尖銳濕疣后馬上給予患者進(jìn)行各種治療，而忽略了對其它STD病原體的檢測，這樣不僅會遺漏其它STD，也為尖銳濕疣的復(fù)發(fā)埋下隱患。在本研究中，13例HPV感染者全部伴有1種或1種以上的STD病原體混合感染，其中有1例同時(shí)發(fā)生5種病原體的混合感染。HPV的混合感染如此多見，提示臨床醫(yī)生應(yīng)對HPV感染者或尖銳濕疣患者進(jìn)行詳細(xì)全面的STD病原學(xué)檢查，以便發(fā)現(xiàn)STD混合感染并給予針對性治療，從而提高尖銳濕疣的治愈率，減少其復(fù)發(fā)率。因此調(diào)查性病門診就診者的HPV感染情況及混合感染狀況對性病的防治具有重要意義。