譚艾娟　歐　翔　劉愛英

摘要應(yīng)用4株蟬擬青霉開展對小菜蛾致病性的研究。結(jié)果表明:4株蟬擬青霉分生孢子、菌絲對小菜蛾的致病性有一定差異,其中GZDXIFR4611的感染致死效果最好,孢子懸液的致死率可達到70%,菌絲懸液的致死率可達到65%,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供了參考數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞蟬擬青霉;小菜蛾;致病性

中圖分類號 S476.12 文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)15-0369-01

StudyonPathogenicityofPaecilomycescicadaetoPlutella xylostella

TAN Ai-juanOU XiangLUI Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025)

AbstractTo investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae(PC)to Plutella xylostella(L.),the insecticidal mortality of the 4 strains of PC were tested. The results showed that the spore and the hyphae of 4 strains of PC had great differences in the pathogenicity. The highest insecticidal mortalitywas GZDXIFR4611,whose mortality in spore suspension was 70% and in hyphae suspension was 65%.The results provided reference for the use of Paecilomyces cicadae as bio-control fungi.

Key wordsPaecilomyces cicadae;Plutella xylostella;pathogenicity

蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)又名蟬花,是由子囊菌類麥角菌科真菌大蟬草(Cordyceps cicadae)的子實體及其寄主山蟬(Cicadeflammata)幼蟲的蟲體部構(gòu)成[1]。擬青霉屬真菌作為一類重要的生防真菌可以侵染多種害蟲,產(chǎn)生多種具有生物活性的代謝產(chǎn)物,在害蟲生物防治上有著廣泛的應(yīng)用[2]。蟬擬青霉既是名貴中藥,又有較高的致病性,可以寄生鱗翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆蟲[3]。小菜蛾(Plutella xylostella(L.))屬鱗翅目菜蛾科,在我國南、北方均有分布,危害植物多達40種以上,也是熱帶和亞熱帶十字花科蔬菜的重要害蟲[4]。對小菜蛾的防治起初采用化學農(nóng)藥,隨著其對化學農(nóng)藥耐藥性的增加以及農(nóng)藥殘留毒性等弊端日益凸顯,生物防治成為當今研究的熱點[5]?，F(xiàn)報道4株蟬擬青霉對小菜蛾的致病性,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數(shù)據(jù),有一定的應(yīng)用價值。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試菌株。蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)共4株:GZDXIFR4611采自貴州省貴陽市森林公園,GZDXIFR 4718采自貴州省梵凈山,GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山,GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由貴州大學真菌資源研究所分離、鑒定、保存。

1.1.2試驗試蟲。供試小菜蛾由貴州省農(nóng)科院植保所提供。

1.1.3培養(yǎng)基。①PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g切塊,用水煮沸30min,加蔗糖20g、瓊脂20g、水補足1 000mL,pH值自然。②液體培養(yǎng)基[6]:葡萄糖20g,酵母膏5g,K2HPO4 1g,水補足1 000mL,pH值6.5。

1.2試驗方法

1.2.1菌培養(yǎng)。①斜面培養(yǎng):將4株菌分別接種到PDA試管斜面上,25℃恒溫培養(yǎng)7d,備用。②平板培養(yǎng):將活化的斜面菌種接種于PDA平板,25℃恒溫培養(yǎng)15d,備用。③液體種子培養(yǎng):用接種環(huán)將已活化的試管斜面菌種接種到裝有50mL液體培養(yǎng)基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,搖床振蕩培養(yǎng)18～20h。④液體發(fā)酵培養(yǎng):將種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有50mL液體培養(yǎng)基的250mL的三角瓶中,25℃,150rpm,搖床振蕩培養(yǎng)72～96h。

1.2.2殺蟲制劑準備。①孢子懸液:在培養(yǎng)好的平板菌落上倒入適量的0.05%土溫-80溶液,用接種環(huán)輕輕刮下孢子,充分振蕩后用4層紗布濾入無菌三角瓶中,調(diào)整孢子濃度為1×107個/mL、2×107個/mL、3×107個/mL,備用。②菌絲懸液:將搖瓶培養(yǎng)好的菌絲用無菌水洗滌除去發(fā)酵液,用玻璃勻漿器破碎細胞,無菌水稀釋備用,稀釋倍數(shù)(w∶v)為1倍、2倍、5倍。

1.2.3致病性測定。參照安建梅[7]、陳祝安等[8]方法,在直徑為15cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入圓形濾紙,滅菌、冷卻,將小菜蛾2～3齡的幼蟲分別浸于配好的待測溶液中。每濃度處理20頭蟲,浸漬10～20s后放入培養(yǎng)皿中,飼喂新鮮甘藍菜葉片,放在20～25℃室溫下飼養(yǎng),每天更換新鮮的甘藍菜葉片,并在培養(yǎng)皿內(nèi)放濕棉球以保持高濕,逐日統(tǒng)計感染死亡率。以無菌水為對照,設(shè)3個重復(fù)。致死率=試驗組死亡率-對照組死亡率。

2結(jié)果與分析

2.1感染癥狀

在試驗過程中,小菜蛾感染了蟬擬青霉后1～2d長得很慢,而對照長得很快,可見菌液對小菜蛾有抑制生長的作用。處理后4～7d蟲體僵硬,出現(xiàn)死亡高峰,繼續(xù)培養(yǎng)1～2d 后,蟲體被白色菌絲覆蓋,無孢梗束形成,對感染的小菜蛾進行粘片顯微觀察,可見蟬擬青霉菌絲形成的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子。

2.24株蟬擬青霉菌絲懸液對小菜蛾的致病性差異

由表1可看出,不同濃度的4株蟬擬青霉菌絲懸液對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR 4611的致病性最強,致死率可達到65%。

2.34株蟬擬青霉孢子懸液對小菜蛾的致病性差異

由表2可看出,不同濃度的4株蟬擬青霉孢子懸液對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR 4611的致病性最強,致死率可達到70%。

3結(jié)論與討論

(1)對小菜蛾的致病性測定結(jié)果顯示,4株蟬擬青霉菌株對小菜蛾都有致病作用,濃度越高,致病性越強。通過對蟬擬青霉孢子懸液、菌絲懸液致病性測定表明,孢子懸液的致病能力略高于菌絲懸液,其中GZDXIFR4611孢子懸液對小菜蛾的最高致死率可達到70%,菌絲懸液的最高致死率可達到65%。由此說明,孢子懸液的致病能力高于菌絲懸液,4株蟬擬中GZDXIFR4611致病性最強。

(2)昆蟲病原真菌通過體表接觸即能使寄主感染、發(fā)病并引起寄主昆蟲死亡,可以發(fā)揮獨到的作用[5]。對感染的小菜蛾進行粘片顯微觀察,結(jié)果顯示芽孢結(jié)構(gòu)是蟬擬青霉;孢子懸液致病的原因可能在于孢子萌發(fā)時芽管侵入蟲的體表使蟲致死。

(3)昆蟲病原真菌在昆蟲病原微生物中種類最多,約占昆蟲病原微生物種類的60%以上。在溫室栽培業(yè)蓬勃發(fā)展的今天,研究利用昆蟲病原真菌已成為害蟲微生物防治研究領(lǐng)域的熱點。有關(guān)小菜蛾的致病性研究方面,目前僅有少量關(guān)于白僵菌、綠僵菌和擬青霉等的研究報道[9,10];對蟬擬青霉的研究主要集中在藥用方面,在生物防治方面的研究不多,研究表明,蟬擬青霉作為生防試劑有良好的開發(fā)應(yīng)用前景,有待進一步深入研究。

4參考文獻

[1] 陳祝安,劉廣玉,胡菽英.蟬花的人工培養(yǎng)及其藥理作用研究[J].真菌學報,1993,12(2):138-144.

[2] 陳祝安.蟲生真菌蟬擬青霉的研究[J].真菌學報,1991,10(4):280-287.

[3] 鄒曉,劉愛英,梁宗琦.紫外線誘變蟬擬青霉對白粉虱治病性的影響[J].菌物研究,2004,2(4):35-39.

[4] 黃劍,吳文君.小菜蛾抗藥性研究進展[J].貴州大學學報(自然科學版),2003,20(1):97-104.

[5] 韓燕峰,張延威,梁建東,等.一些擬青霉菌株對小菜蛾致病性的初步研究[J].植物保護,2008,34(2):46-49.

[6] TAN AIJUAN,LIANG ZONGQI,LIU AIYING.Orthogonal Experi-ment on the Optimum cluture conditions of paecilomyces cicadae[J].Jou-rnal of Huazhong Agricultural University,2004,23(1):33-35.

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[9] 馬駿,HOLDOM D,DUFF J,等.球孢白僵菌對小菜蛾致病力的測定[J].湖南農(nóng)業(yè)大學學報,1999,25(5):387-392.

[10] 姚麗娟.幾株真菌代謝產(chǎn)物對小菜蛾和菜青蟲的殺蟲效果[J].中國生物防治,1996,12(3):99-102.